Elaboración de equipo PCR en tiempo real, la cual se presenta informe del proceso.

1. Biotecnología
Universidad Nacional de Moquegua
MAQUETA:
EQUIPO PCR EN
TIEMPO
CONVENCIONAL
Alumna: Mamani Pacho, Ericka Sheyla
2021

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Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental
INDICE
I. INTRODUCCIÓN..................................................................................................................... 3
II. OBJETIVOS............................................................................................................................. 4
2.1. OBJETIVO ESPECIFICO ................................................................................................... 4
2.2. OBJETIVO GENERAL....................................................................................................... 4
III. MATERIAL Y FUNDAMENTOS ............................................................................................ 4
3.1. Materiales: ......................................................................................................................... 4
3.2. Proceso............................................................................................................................... 5
3.2. Fundamento científico. ...................................................................................................... 8
3.2.1. Historia........................................................................................................................ 8
3.2.2. Kary Banks Mullis ........................................................................................................ 9
3.2.3. Aplicaciones de la PCR................................................................................................. 9
IV. RECOMENDACIONES....................................................................................................... 10
V. Bibliografía .......................................................................................................................... 10

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I. INTRODUCCIÓN
En la actualidad, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, polymerase chain
reaction por sus siglas en inglés) en tiempo real es la técnica más sensible para la
detección de ácidos nucleicos (ADN y ARN). La PCR en tiempo real se basa en el
principio del método de la PCR desarrollado por Kary Mullis en la década de los 80,
que permite detectar ADN a partir de pequeñas cantidades, amplificándolas hasta más
de un billón de veces (Mullis 1990) (véase capítulo de PCR).
La PCR en tiempo real es una técnica que combina la amplificación y la detección en
un mismo paso, al correlacionar el producto de la PCR de cada uno de los ciclos con
una señal de intensidad de fluorescencia. Posee características importantes como alta
especificidad, amplio rango de detección (de 1 a 107 equivalentes genómicos de la
secuencia blanco) y rapidez en la visualización del producto ya que no es necesario
realizar una electroforesis posterior. Los ensayos de la PCR en tiempo real son entre
10,000 y 100,000 veces más sensibles que las pruebas de protección por ARNasa,1
1,000 veces más sensibles que la hibridación por Dot blot2 y pueden detectar
diferencias de una sola copia del ADN . Además, se ha reportado que para la PCR
convencional (punto final), la cantidad final de producto amplificado puede verse
afectada por inhibidores, saturación de la reacción o bien por falta de una
estandarización adecuada.
Entonces, los resultados de la PCR punto final pueden no tener relación entre la
cantidad de ácidos nucleicos que había al inicio de la reacción y la concentración final
del producto amplificado. Debido a la enorme proyección que tienen los ensayos de
la PCR en tiempo real como herramienta útil y extremadamente sensible en
investigación clínica, industrial, biológica y biomédica, en este capítulo se revisan las
bases teóricas de esta técnica, sus aplicaciones, el análisis de resultados y se da un
ejemplo específico para realizar un ensayo de cuantificación. (Aguilera, Ruiz
Tachiquín, & Rocha Munive, s.f.)

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II. OBJETIVOS
2.1. OBJETIVO ESPECIFICO
Crear una maqueta PCR, y poder lograr identificar sus partes, así mismo también
se busca contar con conocimiento de cómo funciona el equipo de Reacción en
cadena de la polimerasa
2.2. OBJETIVO GENERAL
 Conocer el equipo de forma visual, sus componentes y funciones.
III. MATERIAL Y FUNDAMENTOS
3.1. Materiales:
Para realizar el presente trabajo se utilizó solo material reciclado, el cual todos
contamos con ello, por lo cual detallo así:
 Cartón (3 a 4 cajas grandes)
 Goma, pegamento
 Tijeras, cúter
 Tempera azul y blanca
 Tapas descartables
 Taper descartable
 Hojas de bond
 Cinta
 Cable USB (opcional)
 Lapiceros, lápiz, colores.
 Regla
Figura 1. Materiales

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3.2. Proceso
1) iniciamos recolectando cartón y tapas que encontremos en casa, una vez obtenido
se procedió a determinar las medidas, por la cual mi persona tomo una hoja bond
como base, donde se realizó unos simples ajustes circulares, para obtener el molde.
2) Seguido se colocó el molde sobre el cartón ya estirado y se marcaron con un lápiz
el boceto, por el cual se inició contando los costados.
3) Tomamos un cartón largo y lo cortamos en tamaño A4, el cual va a servir de base
para la maqueta y también para sus paredes.
4) Ahora unimos las partes de la maqueta
Figura 3. piezas ya unidas y pintadas
Figura 2. molde cortado.
Fuente 1. PROPIA, Ericka 2021
Fuente 2. Propia,2021

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5) Se realizó el pegado correspondiente, para ir armando el cuerpo de la maqueta.
6) La maqueta consta de dos partes, una parte móvil y la otra parte siendo el cuerpo
de la maqueta, el marte móvil se reservó para después realizar el mismo proceso, es
decir se colocó las partes correspondientes a la parte móvil pegando el cartón a sus
lados.
Figura 4. secado de maqueta.
Fuente 3. Propia, 2021
Figura 5. Elevación de parte móvil
Fuente 4. Propia, Ericka Sheyla, 2021

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7) Se procedió a pintar las tapas que se tenían de color azul, el cual serviría como
base de la maqueta.
8) El taper descartable se le hicieron huecos para que funciones como un guardador
de muestras de PCR.
9) Una vez obtenida las partes de la maqueta, se realizó el pegado para poder
culminar. Probando que el lado móvil funciona perfectamente.
10) Se cortó una hoja el cual se determinó el tamaño midiendo la maqueta para
realizar ahí los dibujos correspondientes para la pantalla, una vez realizada se adhirió
a la maqueta para asi poder finalizar.
Figura 6. Pintado de tapas descartables
Fuente 5. Propia Ericka 2021
Figura 7. simulación de malla metálica para colocar muestras de
PCR
Fuente 6. Propia, Ericka 2021

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3.2. Fundamento científico.
3.2.1. Historia
La técnica de la polimerización en cadena como sabemos hoy fue conceptuada y
desarrollada en los años 80 por Kary Mullis y sus colegas en Cetus Corporation. El
aislamiento y la purificación de las polimerasas termoestables de Taq llevadas a la
automatización de la técnica inicialmente lenta y laboriosa de la polimerización en
cadena y el revelado de los cyclers térmicos programables de la polimerización en
cadena le hicieron una técnica ampliamente utilizada en muchos niveles de biología
y de química. Aunque Mullis inventara la polimerización en cadena, sus usos
acertados en varios campos son un resultado de mucho trabajo duro de otros
investigadores de Cetus tales como Henry Erlich. También, hay retos a las patentes
de la polimerización en cadena llevadas a cabo por Mullis basó en los trabajos
tempranos de investigación realizados por Khorana y otros en los años 60 y los años
70.
Los gracias a su flexibilidad extraordinaria, hoy, polimerización en cadena se están
utilizando en campos diversos tales como ciencia forense, estudios ambientales,
tecnología alimenticia, y remedio diagnóstico. El adelanto masivo a lo largo de los
años en nuestra comprensión del genoma de seres humanos y de varias otras
especies no habría sido posible sin el notable con todo la técnica simple llamó la
polimerización en cadena. (Susha Cheriyedath, s.f.)
Fuente 7. Propia Ericka 2021
Figura 8. Maqueta Equipo PCR finalizada

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3.2.2. Kary Banks Mullis
En 1993 la Academia Sueca concede el Premio Nobel de Química a Kary Banks
Mullis por la invención en 1983 de la reacción en cadena de la polimerasa o PCR.
El galardonado declaró que su idea surgió conduciendo el coche en un viaje de fin
de semana con su novia. Hoy en día, gracias a esta herramienta, investigadores de
diversos campos pueden obtener un gran número de copias de un fragmento de
ADN en particular, partiendo de una cantidad mínima de muestra.
Nació el 28 de diciembre de 1944 en Carolina del Norte y creció en Columbia,
Carolina del Sur. Se graduó en Ciencias en 1966. Y en 1973 culminó el doctorado
en Bioquímica por la Universidad de Berkeley, California. Su tesis se basaba en la
síntesis y caracterización estructural de las moléculas transportadoras de hierro en
las bacterias.
Ya entonces su carrera científica empezó a ser discontinua, con diversas
interrupciones en las que se dedicó a otras actividades. Pero un día asistió a un
seminario en el que explicaron cómo se podía sintetizar químicamente el ADN.
Aquella charla debió de marcarle en su carrera como científico. Meses después
entró a trabajar en la biotecnológica Cetus, donde alcanzaría el éxito con la
invención de la PCR.
Ha trabajado con algunas de las principales empresas del sector biomédico,
desarrollando su carrera como consultor experto. Por otro lado, se ha hecho también
visible por mantener opiniones y teorías polémicas en diversos temas ajenos a su
especialidad. (Biotecnologia, s.f.)
3.2.3. Aplicaciones de la PCR.
Las aplicaciones de la PCR son múltiples, desde la arqueología, la Medicina forense
y la Medicina clínica. Permite el diagnóstico de enfermedades infecciosas en unas
horas frente a la espera de los cultivos. Además, las cantidades necesarias son
mínimas, por lo que ese inconveniente es obviado.
También tiene esta técnica interés para la demostración de genes indicadores de
diversos rasgos que conduzcan a patología. Del máximo interés parece ser la
demostración de oncogenes, genes supresores de tumor que en oncología van
teniendo valor en el estudio pronóstico de ciertos tumores. Estudios de Biología
molecular han demostrado que las células tumorales del carcinoma de pulmón han

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adquirido lesiones genéticas como activación de oncogenes dominantes o la
inactivación de oncogenes supresivos. En relación con los oncogenes dominantes
estas lesiones se manifiestan como mutaciones puntuales en las regiones que
codifican los oncogenes de la familia ras, principalmente el gen K-ras en el
adenocarcinoma de pulmón.
Las mutaciones de los genes de la familia ras condicionan el cambio de un solo
aminoácido en la proteína que estos genes codifican, generalmente en las posiciones
12, 13, 59, 61 ó 53. Estas alteraciones se descubren hasta en el 30% de los
adenocarcinomas de pulmón mediante oligonucleótidos sintéticos tras la
amplificación del ADN por la reacción en cadena de la polimerasa. (GONZALEZ,
s.f.)
IV. RECOMENDACIONES
 Tener una idea antes de realizar la maqueta, es decir planear anticipadamente
 Tener un boceto de la maqueta
 Asegurarse de trabajar en un ambiente amplio
 Planeación: Recuerda medir tus tiempos a la fecha de entrega y programa tus
etapas de elaboración de maquetas, no olvides considerar los Colchones de
tiempo.
V. Bibliografía
Aguilera, P., Ruiz Tachiquín, M., & Rocha Munive, M. G. (s.f.). PCR en tiempo Real. Obtenido de
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/pcrtiempo.pdf
Biotecnologia, O. S. (s.f.). La PCR y su peculiar inventor. Obtenido de
https://onscience.es/como-se-invento-la-pcr-polimerasa/
GONZALEZ, J. F. (s.f.). PATOLOGIA MOLECULAR EN LA CITOPATOLOGIA DEL APARATO
RESPIRATORIO Y DE LA PLEURA. Obtenido de
http://www.conganat.org/iicongreso/conf/019/aplicac.htm
Iñón, D. N. (s.f.). FIJACION BIOLOGICA DEL NITROGENO. Obtenido de
http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2017/Qui
micaBiol/1495120476.pdf
Susha Cheriyedath, M. (s.f.). New Medical Life Sciences . Obtenido de https://www.news-
medical.net/life-sciences/History-of-Polymerase-Chain-Reaction-(PCR)-(Spanish).aspx