Este documento describe un laboratorio de bioquímica en el que se realizaron pruebas cualitativas para identificar proteínas utilizando la clara de huevo como muestra. Se llevaron a cabo las reacciones de Biuret, Millón y aldehídica para el triptófano, obteniéndose resultados positivos para Biuret e inconclusos para las otras dos. El objetivo era conocer métodos para la identificación cualitativa de proteínas y distinguir soluciones positivas de negativas.

1. Facultad de Ciencias Ambientales y
Agrícolas
Curso: Bioquímica Laboratorio
Catedrático: Walter Mayen
Sección: 1
Glauco Contreras Cossich. Carnet: 1320315
Fecha de entrega: 27/10/16
Laboratorio no. 6
Determinación cualitativa de las proteínas
OBJETIVOS
 Conocer métodos (reacciones) para la identificación cualitativa de proteínas.
 Identificar las soluciones positivas y negativas.
ANTECEDENTES
Las proteínassonlosmaterialesmásimportantesque desempañanunmayornúmerode funciones
en las células de todos los seres vivos. Forman parte de la estructura básica de los tejidos y
desempeñanfuncionesmetabólicasyreguladoras.Sonelementosque definenlaidentidadde cada
ser vivo ya que son las estructuras del código genético y de los sistemas de reconocimientode
organismos extraños en el sistema inmunitario. Son macromoléculas orgánicas, constituidas
básicamente de carbono,hidrogeno,oxígenoynitrógeno;aunquepuedencontenertambiénazufre
y fosforo; y en menor proporción, hierro, cobre, magnesio y yodo. Estos elementos químicos se
agrupanparaformanloque se conoce comoaminoácidos. Lospéptidosestánformadosporlaunión
de aminoácidos mediante un enlace peptídico. Es un enlace covalente que se establece entre el
grupo carboxilode un aminoácidoy el grupo amino del siguiente,dandolugaral desprendimiento
de una molécula de agua. Para formar los péptidos, los aminoácidos se van enlazando entre si
formando cadenas de longitud y secuencia variable. (Koolman, 2012)
Porlaestructurapeptídicaylapresenciade determinadosgruposR,lasproteínaspuedenreaccionar
con una variedad de agentes. Estas reacciones son la base para la determinación cualitativa y
cuantitativade lasproteínas,por presentarse variacionesenlacomposiciónde losaminoácidosde
las distintas proteínas, se manifiestan diferentes colores y grados de intensidad para una misma
reacción, íntimamente relacionado con la naturaleza de la proteína analizada. Para la reacción de
triptófano, el aminoácido se condensa fácilmente con varios aldehídos en presencia de ácidos
fuertes para dar los compuestos coloreados. En la reacción se utiliza el reactivo de Ehrlich (p-
dimetilaminobenzaldehído al 10% en HCL concentrado.) que reacciona con un buen número de
compuestos orgánicos tales como índoles, aminas aromáticas y compuestos ureicos para dar
complejoscoloreados.Enlareacciónde Biuret,detectalapresenciade proteínas,péptidoscortosy
otros compuestoscon dos o más enlacespeptídicosensustanciasde composicióndesconocida.El
reactivo,de colorazul,cambiaa violetaenpresenciade proteínas,yviraa rosa cuando se combina
con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero

2. proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar. El reactivo de Millón reconoce
residuos fenólicos, en contacto con proteinas, los compuestos mercúricos en medio fuertemente
nítrico (reactivo de Millon) se condensancon el grupo fenólico del aminoácido tirosina,formando
complejos de color rojizo. (Mendoza. 2002)
DIAGRAMA DE FLUJO
DATOS, CALCULOS Y RESULTADOS
Cuadro1. Resultadosde reacciónde Biuret
Tubo Solución Cantidad Colorobtenido
de gotas
1 Urea sólida 5 Celeste
2 Urea en cristales 5 Celeste
3 Clara de huevo 5 morado
Cuadro2. Resultadosde reacciónde Millón
Tubo Solución Cantidad Precipitado Color(luego Positivo/Negativo
de gotas de calentar)
1 Clara de huevo 20 no celeste negativo
Cuadro3. Resultadosde reacciónaldehídicaparael triptófano
Tubo Solución Cantidad Colorobtenido Gotas de Colorobtenido
de gotas (luegode NaNO2
calentar)
1 Clara de huevo 40 Amarillo 2 Anaranjado
(abajo)
Amarillo
(arriba)

3. DISCUSION DE RESULTADOS
En la reacción de Biuret, detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos
con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. La reacción de
Biuret es positiva es cuando el color de la solución torna de un color morado, la clara de
huevo dio positivo debido a la albumina es una proteína. El resultado de la prueba de Millón
dio negativo,en este caso la prueba debía dar positivo pero por algún mal manejo de los
reactivos dio negativo, científicamente da positivo debido a que cuando en la solución existen
grupos fenólicos, como la tirosina. La solución dio un precipitado blanco con forme el calor
de la misma reacción del reactivo este precipitado tomo un color rojizo. Como la tirosina es
el único compuesto fenólico en las proteínas es por eso que su reacción es positiva que nos
indica a presencia de esta proteína en la clara de huevo. Por último, el experimento final no
reacciono, seguramente por la calidad de los reactivos usados o una mala manipulación de
los mismos, pero científicamente debería dar positivo debido a que la proteína contenida en
la clara de huevo a la hora de reaccionarse con el aminoácido, este se condensa con varios
aldehídos en presencia del ácido fuerte que reacciona con compuestos orgánicos tales como
los índoles para dar los complejos coloreados. En este caso de color anaranjado, que indica
presencia de indol en la muestra analizada.
CUESTIONARIO
1. Indique que proteínas posee la clara del huevo.
proteínasOvoalbúmina, ovomucina,conalbuminayovomucoide.
2. Escriba las reacciones que ocurrieron durante la práctica.
Reaccion de Biuret:
Reacción de Millón:
Reacción aldehidica para el triptófano:
3. ¿Qué métodos cuantitativos existen para determinar
Cromatografíay espectrofotometría

4. CONCLUSIONES
 Se conocen exitosamente diferentes métodos para la identificación de proteínas
mediante pruebas cualitativas.
2. Se identificó exitosamente las soluciones negativas y positivas cuando se realizó las
reacciones
BIBLIOGRAFIA
Armstrong; Bradley; Bennet. (2001). Bioquímica. 6a ed. Reverté, Barcelona.550 p.
Koolman and Röhm. (2012). Bioquímica: Texto y atlas. 4a ed. Ed. Médica Panamericana,
México.488 p.
Mendoza, L. (2005). Química: Prácticas de laboratorio. 2a ed. INDEC, República
Dominicana. 61 p.