El documento describe una práctica de laboratorio para identificar aminoácidos en una proteína hidrolizada. Se realizaron varias pruebas químicas en muestras de grenetina hidrolizada y albúmina, incluyendo reacciones xantoproteicas, de precipitación, de Biuret y con ninhidrina. Los resultados indicaron la presencia de aminoácidos aromáticos y azufrados en la albúmina, mientras que la grenetina contenía aminoácidos como fenilalanina, valina, isoleucina,

1. Practica 6
Hidrolisis de una proteína y ensayos para proteínas y
aminoácidos.
Intregrantes:
QBP
Introducción
Las proteínas son polímeros biológicos,componentes
principales decélulasvegetales y animales;químicamente
son poliamidas,cuyos monómeros son aminoácidos.Las
proteínas se pueden clasificar según el tipo de función que
desempeñen.
-Proteínas fibrosas o estructurales:secaracterizan por ser
insolubles en agua,de gran resistencia y en forma de fibras.
-Proteínas globulares:secaracterizan por ser proteínas
pequeñas que seasocian formando unidades compactas y
son solubles en agua
-Proteínas conjugadas:están asociadasa una parteno
proteica como las nucleoproteínas,glicoproteínas y
lipoproteínas.
Los alfa-aminoácidosqueforman las proteínas,pertenecen a
la serieL. Estos aminoácidos seunen entre si formando
enlaces peptídicos;la unión de dos aminoácidosorigina un
péptido; de tres un tripeptido, etc. Hasta la formación de
polipéptidos;cuando el número de aminoácidoses mayor de
80 seconsidera proteína.
Antecedentes
Los aminoácidosdesempeñan un papel central en
el metabolismo celular,y los organismos losnecesitan para
sintetizar la mayoría de sus componentes. Muchos de
nosotros nos familiarizamos con los aminoácidoscuando
aprendimos sobreel proceso de traducción,esto es, la
síntesis de proteína desde el código del ARNm. Hasta la
fecha, los científicos han descubierto más de 500
aminoácidos en la naturaleza,pero sólo veintidós participan
en la traducción. En 1943,Gordon, Martin y Synge utilizaron
la cromatografía de partición para separar y estudiar los
componentes de las proteínas (Gordon, Martin y Synge
1943),y hubo un gran avanceque contribuyó a la rápida
identificación delos veinte aminoácidos en las proteínas
utilizados por todos los organismos vivos. Después de esta
explosión inicial dedescubrimientos,dos aminoácidos
adicionales,queno son utilizadospor todos los organismos,
se han añadido a la lista:selenocisteína (Bock 2000) y
pirrolisina(Srinivasan Et. al 2002.).
Objetivos:
General
- Efectuar la hidrólisistotal deuna proteína.
- Identificar algunosaminoácidospresentes en un
hidrolizado deproteína, por medio de sus propiedades físico-
químicas.
- Identificar por cromatografía en placa fina algunos delos
aminoácidos presentes en un hidrolizado deproteína.
Particulares
- Identificar los aminoácidospresentes en el hidrolizado de
proteína por medio de reacciones químicas.
- Identificar por cromatografía en placa fina losaminoácidos
presentes en el hidrolizado deproteína.
Parte experimental
Se preparó la solución “A” (hidrólisis de grenetina): en un
matraz balón fondo plano se agregó 1g de grenetina, 10 ml
de HCl y 10 ml de H2Odest, se reflujo por 35 min. Se le agrego
carbón activado y se filtro.
Solución “B” (neutralizada de hidrolizado de grenetina): se
tomó 5 ml de sol. “A” y se neutralizo con NaOH 10% se filtró
y se confirmó su pH básico con una tira de pH.
Solución “C” (grenetina sin hidrolizar): en un vaso de pp se
agregó 0.5g de grenetina y 20ml de H2Odest y se agitó.
Solución “D” (albúmina): se agitò clara de huevo por 10 seg.
Y se le agregó 100ml de H2O, se agitò y filtro con una gasa.
Reacciones de identificación:
1 ) Reacción Xantoproteìca: en 2 tubos a uno se le agregó
2ml de sol. “A” y al otro 2ml de sol. “D”, posteriormente a
cada tubo se le agregaron unas gotas de HNO3 y se calentó a
baño marìa y se le agrego NaOH.
2) Reacción de precipitación: 2 tubos de ensayo uno con 2ml
de sol. “A” y el otro con 2ml de sol. “D” y un tubo con H2O
(control), a cada tubo se le agrego 5ml de NaOH y 1ml de
(CH3COO)2Pb y se calentó por 5min.
3) Reacción de Biuret: 6 tubos de ensayo 1) 0.5ml de H2Odest
+0.5 de NaOH 10%; 2) 0.5ml de sol. “C” + 0.5ml de NaOH
10%; 3) sol. “D”; 4) 0.5ml de sol “A” + 0.5ml de NaOH 10%;
5)0.5ml de sol. “D” + 0.5 de NaOH 10%; 6) 0.5ml de sol “A”
4) Reacción con Ninhidrina: 5 tubos de ensayo 1) 0.5ml de
H2Odest; 2)0.5 ml de sol. “B”; 3) 0.5ml de sol. “C”; 4)0.5ml de
sol. “D”; 5) 0.5ml de sol de 1% de aminoácido patrón.
5) Reacción de HNO2: en 4 tubos de ensayo se colocaron 3ml
de HCl concentrado y posteriormente al tubo 1) 2ml de sol
“A”, 2) 2ml de sol. “C”; 3)2ml de sol. “D”; 4)tubo testigo sin
proteína.
5) Acción reguladora de aminoácidos: en 2 tubos de ensayo
1) 2ml de sol.”B”; 2) 2ml de H2Odest ; a cada tubo se le agregó
6 gotas de rojo congo y gotas de HCl 0.1N hasta el vire, se
repitió el procedimiento pero ahora con fenolftaleína y
NaOH 0.1N. finalmente se realizo una cromatografía en placa
fina con sol “B” y aminoácidos patrón.
Resultados
1 ) Reacción Xantoproteíca
Sustrato Observaciones
Solución A Parcialmente positiva
Solución D Positivo

2. 2) Reacción de precipitación
3) Reacción de Biuret
Sustrato Observaciones
Solución A Negativa
Solución C Positiva
Solución D Positiva
4) Reacción con Nihidrina
Sustrato Observaciones
Solución B Positiva
Solución C Negativa
Solución D Negativa
Sol. De aminoácido patrón Positiva
5) Reacción con Acido Nitroso (HNO2)
Sustrato Observaciones
Solución A Positivo
Solución C Negativo
Solución D Negativo
6) Acción reguladora de aminoácidos
Sol Indicador inicial Ml de
HCl
Agua destilada Rojo Congo Rojo Violeta
Solución B Rojo Congo Rojo Violeta
Agua destilada Fenolftaleína
0.1%
Transparente ml. de
NaOH
0.1%
Rosa
Solución B Fenolftaleína
0.1%
Transparente Rosa
Discusión.
1.-Reacción Xantoproteíca sirvepara identificar lapresencia
de anillos aromáticos,por lo cual la reacción fuepositiva en
la solución dealbumina (sol.“D”)ya que contiene
aminoácidos como la fenilalanina,Tirosina,Triptófano que
contienen el anillo aromático quees nitrado y produce el
cambio de coloración deamarillo a rojo,favorecido por el
calentamiento de los tubos.
La reacción para la solución degrenetina hidrolizada (sol.
“A”) fue parcialmentepositiva,ya que no contenía
aminoácidos con anillosaromáticos solo la fenilalanina.
2.-Reacción de precipitación,sirvepara identificar
aminoácidos azufrados,al proporcionar un precipitado
negro, resultado de la interacción del plomo con los puentes
de disulfuro presentes en los aminoácidoscisteína y
metionina de la Albumina,en la cual la prueba fue positiva.
La reacción con grenetina fue negativa al no tener ningún
aminoácido azufrado.
3.-Reacción de Biuret, identifica enlaces peptídicos demás
de 3 unidades,gracias a la formación deun complejo de
color violeta,al ser necesario un medio básico los tubos que
dieron positivo fueron únicamente los que contenían
proteínas sin hidrolizar en un medio básico obtenido al
agregar el hidróxido desodio al 10%.
En dipéptidos no se forma el complejo ya que al protonarse
el Oxigeno unido al carbonilo,estanca en dobleenlace
evitando la formación del complejo.
4.-Reacción con Ninhidrina,identificagrupos aminos libres
en aminoácidospor lo tanto los tubos que dieron positivo
fueron los que contenían únicamente una proteína
hidrolizaday un aminoácido patrón,como lo fue el tubo 2 y
5 que contenían grenetina hidrolizada.Es importante
mencionar que en los 𝛽 aminoácidosno es positivo ya que
no descarboxila.
5.-Reacción con Ácido nitroso, esta prueba nos permite
determinar la cantidad dehidrogeno liberado de una amina,
con la reacción deácido nitroso,identificando los grupos
aminos libres delos péptidos y las proteínas midiendo la
cantidad de nitrógeno liberado en la reacción,las pruebas
donde haya un burbujeo continuo, indica la
existencia de dichos aminos libres.
La única prueba donde dio positivo fueen la solución A,de
grenetina hidrolizada,esto quiere decir que la hidrolisis fue
parcial,ya que quedaron aminos libres con los cualespudo
reaccionar el ácido nitroso y liberar nitrógeno gaseoso.
6.-Acción reguladora de proteínas, en las pruebas con rojo
Congo se observó que el hidrolizado degrenetina a pH
neutro logra formar una solución tampón que regulariceel
pH a pesar de agregar gota a gota HCl al 0.1N,
evidenciándosecon un color violeta-
Lo mismo sucede con la fenolftaleína como indicador.
7.- Los aminoácidos esenciales encontrados en la grenetina
fueron, fenilalanina, valina,isoleucina, lisina y treonina.
Conclusión
La buena hidrolisisdeuna proteína se demuestra en pruebas
como la de biuret, la identificación dealgunos aminoácidos
se puede obtener por sus propiedades fisicoquímicas,por
eso son útiles estás pruebas ya que nos permiten identificar
a estos polímeros biológicos tan importantes
Bibliografia
1.- John McMurry, Quimica orgánica,7°ed, 2008,Editorial
Cengage Learning (653-657)
2.- A. Carey, Química Orgánica,6°ed, 2006, Editorial
McGraw Hilll (645-648,650)
3.-Voet voet, Bioquímica,3° ed, México, Editorial
Panamericana,2006 (71-100)
Sustrato Observaciones
Solución A negativa
Solución D positiva