2. CETIS 62
PRACTICA No.6
IDENTIFICACION DE PROTEINAS
OBJETIVO: Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la
configuración y la identificación por el reactivo BIURET.
MARCO TEORICO:
Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos constituidos por
aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que intervienen en diversas funciones
vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta
inmunológica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los componentes
principales de las células y que suponen más del 50% del peso seco de los
animales. El termino proteína deriva del griego proteico, que significa primero.
El plasma sanguíneo normal contiene de 6.5 a 7.5gr de proteínas por 100al. Las
proteínas plasmáticas pueden dividirse en 3 grupos: a) fibrinógenos; b) globulinas;
c) albuminas. Cada una de estas variedades pueden ser precipitadas en bases a su
solubilidad en soluciones salinas, y se logra una separación simple o burda
mediante precipitación salina de dichas proteínas o fuerzas iónicas diferentes.
La precipitaciónsalina con sulfato de amonio es una etapa preliminar útil en muchas
técnicas de aislamiento de proteínas en particular de enzimas. Existen 2 tipos de
lograr esta etapa de purificación o bien sea añadiendo sulfato de amonio sólido, o
bien sea con una solución saturada (100 por 100) neutra del mismo. En el primer
caso, existe ventaja de mantener en un mínimo el aumento de volumen; en cambio
la solución saturada presenta la ventaja de una manipulación más cómoda.
Las moléculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido
conectivo y el pelo, hasta los glóbulos compactos solubles, capaces de atravesar la
membrana celular y desencadenar reacciones metabólicas. Tienen un peso
molecular elevado y son específicas de cada especie y de cada uno de sus órganos.
Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 proteínas distintas, de las que solo
un 2% se ha descrito con detalle. Las proteínas sirven sobre todo para construir y
mantener las células, aunque su descomposición química también proporciona
energía, con un rendimiento de 4 kilocalorías por gramo, similar al de los hidratos
de carbono.
3. Las enzimas son proteínas, al igual que la insulina y casi todas las demás hormonas,
los anticuerpos del sistema inmunológico y la hemoglobina
COAGULACION POR CALOR
MATERIALES Y REACTIVOS IMAGEN
24 Tubos de ensaye
Gradilla
Baño maría
6. 2. Añadir 2 gotas de acido acético al 1%
3. Colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente
manera:
Tubo1= 1ml acetona
Tubo2= 1ml de éter
Tubo3= 1ml de butanol
Tubo4= 1ml tolueno
4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla.
5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH
concentrado, y agitar.
7. 6. Observar y anotar diferencias.
Al principio cuando se añadió el ácido acético se coagulo por completo la
clara y ligeramente el pescado.
Resultados
Sustancia
Leche Clara Leva
dura
pescado Grenetin
a
espinacas
Ácido
acético
Acetona
Éter
Butanol
tolueno
Simbología
Coaguló
No coaguló
Disolvió
No disolvió
8. CONCLUSIONES
Al agregar los diversos reactivos donde se encontraban los coágulos formados se
añadió la cantidad necesaria donde en la clara no logro disolverse con: Acetona,
Butanol y Tolueno; la levadura y el pescado no disolvieron con el tolueno y las
espinacas coagularon y no disolvieron con el Butanol y el tolueno.
REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)
MATERIAL
Pescado
Espinaca
Levadura
Tubos de ensaye
1 gradilla
10. 3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1% hasta la aparición de
un color rosa o violeta (máximo 10 gotas).
4. Reportar a que gota aparece el color.
PROTEINA GOTAS
PESCADO 4
ESPINACA 10
LEVADURA 6
ALBUMINA 10
GRENETINA 9
CAESIA 4
11. Observaciones:
Las proteínas cambiaron de color en diferente número de gotas del reactivo como
se muestra a comparación. La espinaca y el pescado fueron las proteínas que
necesitaron las 10 gotas para cambiar de color y este era el número máximo de
gotas que podíamos poner a cada proteína.
Conclusión: El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa, y el Cu, en un
medio fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un
complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la
concentración de proteínas.
REACCION XANTOPROTEICA
MATERIALES Y REACTIVOS IMAGEN
Tubos de ensaye
13. 2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.
3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.
Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él vire de
color.
14. LECH
E
CLAR
A
LEVADUR
A
PESCAD
O
GRENETIN
A
ESPINACA
S
Cambi
o de
color
CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEINAS?
aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusión y una drástica
disminución de su solubilidad
2. Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?
ácido nítrico, acetona, tetracolruro de carbono.
3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?
La prueba general para determinar proteínas es la de Biuret, en la que un
color violeta indica positivo. Pruebas físicas sencillas como la coagulación y
precipitación en sales neutras, también confirman.
4. ¿Que coloración da la reacción del Biuret?
una coloración violeta cuya intensidad de color depende de la concentración
de proteínas presentes.
5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?
Si, puesto que el reactivo de Biuret reacciona con proteínas independiente al
ser liquidas o sólidas
15. 6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es
positiva o negativa? ¿Por qué?
Es negativa porque al analizar un solo aminoácido, no hay ningún enlace
peptídico puesto que este enlace se da entre aminoácidos, y la reacción dará
positivo cuando exista este enlace coordinándose en el Cu en medio alcalino
7. Explica la reacción Xantoproteíca.
Esta reacción se debe a la formación de nitroderivados aromáticos por
reacción del ácido nítrico sobre grupos bencénicos que poseen algunos
aminoácidos como la fenilalanina, la tirosina yel triptófano. Por lo tanto, la
dan positiva todas aquellas proteínasque tengan aminoácidos aromáticos en
su molécula.
