Práctica de laboratorio

1. Práctica 6: Identificación de proteínas.
CETis 62
Equipo 6
Integrantes:
Gutiérrez prieto Natali
López Villafaña Michel Vanessa
Macias Moreno Ana Isabel
Zavala Laguna Andrea
Zavala Quiroz Guadalupe Roberto
Laboratorio Clínico 6 “E”

2. OBJETIVO: Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la
configuración y la identificación por el reactivo BIURET.
MARCO TEORICO:
Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos constituidos por
aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que intervienen en diversas funciones
vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta
inmunológica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los componentes
principales de las células y que suponen más del 50% del peso seco de los
animales. El termino proteína deriva del griego proteico, que significa primero.
El plasma sanguíneo normal contiene de 6.5 a 7.5gr de proteínas por 100al. Las
proteínas plasmáticas pueden dividirse en 3 grupos: a) fibrinógenos; b) globulinas;
c) albuminas. Cada una de estas variedades pueden ser precipitadas en bases a
su solubilidad en soluciones salinas, y se logra una separación simple o burda
mediante precipitación salina de dichas proteínas o fuerzas iónicas diferentes.
La precipitación salina con sulfato de amonio es una etapa preliminar útil en
muchas técnicas de aislamiento de proteínas en particular de enzimas. Existen 2
tipos de lograr esta etapa de purificación o bien sea añadiendo sulfato de amonio
sólido, o bien sea con una solución saturada (100 por 100) neutra del mismo. En el
primer caso, existe ventaja de mantener en un mínimo el aumento de volumen; en
cambio la solución saturada presenta la ventaja de una manipulación más
cómoda.
Las moléculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido
conectivo y el pelo, hasta los glóbulos compactos solubles, capaces de atravesar
la membrana celular y desencadenar reacciones metabólicas. Tienen un peso
molecular elevado y son específicas de cada especie y de cada uno de sus
órganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 proteínas distintas, de
las que solo un 2% se ha descrito con detalle. Las proteínas sirven sobre todo
para construir y mantener las células, aunque su descomposición química también
proporciona energía, con un rendimiento de 4 kilocalorías por gramo, similar al de
los hidratos de carbono.
Las enzimas son proteínas, al igual que la insulina y casi todas las demás
hormonas, los anticuerpos del sistema inmunológico y la hemoglobina.

3. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)
MATERIAL
1 gradilla pescado, espinaca, levadura,
Tubos de ensaye
Albúmina, grenetina y caseína
REACTIVOS
NaOH al 10%
Sulfato cúprico al 1% en gotero

4. PROCEDIMIENTO
1. En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solución de proteína (diluida al 1%).
2. Añadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar.
3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1%
hasta la aparición de un color rosa o violeta (máximo
10 gotas).
4. Reportar a que gota aparece el color.
RESULTADOS:
Solución proteica. Numero de gotas para que
ocurriera el cambio de color.
Pescado 3
Levadura 5
Grenetina 4
Huevo 2
Leche 5
Espinaca 5

5. REACCION XANTOPROTEICA
MATERIAL REACTIVOS
Tubos de ensaye proteínas
Gradilla NaOH concentrado (gotero)
Baño maría HNO3 concentrado
PROCEDIMIENTO
1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.
2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.
3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.
4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él
vire de color. Observar y reportar resultados.
RESULTADOS:

6. Solución proteica. Numero de gotas para que
ocurriera el cambio de color.
Pescado 8
Levadura 8
Grenetina 9
Huevo 3
Leche 9
Espinaca 5
COAGULACION POR CALOR

7. MATERIAL REACTIVOS
16 Tubos de ensaye Acido acético al 1%
Gradilla Acetona
Baño maría Éter
Tetracloruro de carbono
Butanol

8. Proteínas
NaOH concentrado
PROCEDIMIENTO
1. Calentar a hervir 5ml de solución de proteína.
2. Añadir 2 gotas de acido acético al 1% .
3. Colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente
manera:
Tubo1= 1ml acetona
Tubo2= 1ml de éter

9. Tubo3= 1ml de butanol
Tubo4= 1ml tolueno
4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla.

10. 5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH
concentrado, y agitar.
RESULTADOS:
Proteína Éter Tolueno Butanol
albumina Formación del
coagulo
Formación del
coagulo
Formación del
coagulo
Leche Disolución del
coagulo
Disolución del
coagulo
Pescado Disolución del
coagulo
Formación del
coagulo
Levadura Disolución del
coagulo
Disolución del
coagulo
Disolución del
coagulo
Espinaca Formación del
coagulo
Formación del
coagulo
Disolución del
coagulo
Grenetina Formación del
coagulo
Formación del
coagulo

11. OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE
MATERIAL REACTIVOS
2 vasos de precipitados de 250ml leche entera
1 probeta de 100ml HCl 0.2N
1 embudo acetona
2 papel filtro
éter

12. PROCEDIMIENTO
1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado.
2. Agregar 100ml de agua destilada.
3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.8.
4. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.
5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.
6. Repetir este lavado 4 veces.
7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la
proteína.

13. 8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar
y filtrar. Repetir 4 veces.
9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de
acetona, y filtrar.
10.Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el
polvo 24 horas después.
RESULTADOS:

14. CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEINAS?
Cambian notablemente sus características, y pueden cambiar de coloración, o
precipitarse, o coagularse, o volverse solubles en agua, o insolubles, o
volverse rígidas, o volverse blandas, entre otros cambios.
2. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de
desnaturalización?
Con el ácido clorhídrico se tiene mayor poder de desnaturalización ya que tiene
mayor pérdida de conformación nativa por ser éste un ácido fuerte y provocar
cambios en sus propiedades.
3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?
Podríamos realizar sobre esa sustancia la reacción de Biuret para detectar la
presencia de proteínas
4. Que coloración da la reacción del Biuret?

15. Provoca una coloración violeta cuya intensidad de color depende de la
concentración de proteínas
5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?
Sí, puesto que el reactivo reacciona con cualquier proteína ya sea líquida o sólida.
6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es
positiva o negativa? ¿Por qué?
Será negativa porque si analizamos un solo aminoácido, no hay ningún enlace
peptídico puesto que este enlace se da entre dos aminoácidos, y la reacción de
Biuret va a dar positivo cuando exista enlace peptídico (CO-NH) coordinándose
con él el Cu en medio alcalino
7. Explica la reacción Xantoproteíca.
Esta reacción se debe a la formación de un compuesto aromático nitrado de color
amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado.
Generalmente, se forma primero un precipitado blanco que cambia a amarillo al
calentarlo. El color se empieza a tornarse anaranjado cuando la solución se vuelve
básica. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos
portadores de grupos bencénicos, tirosina, fenilalanina y triptofano, obteniéndose
nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio
fuertemente alcalino (formación del ácido pirámico o trinitrofenol). En esta prueba
se produce la nitración del anillo bencénico presente en dichos aminoácidos. Las
manchas amarillas en la piel se causan por el ácido nítrico son el resultado de una
reacción xantoprotéica.