Practica de molecular, extracción ADN

1. UNIVUNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO
FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS
Y BIOTECNOLOGÍA
CARRERA DE BIOTECNOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR
Datos Informativos:
Nivel Cuarto Paralelo “B”
Docente PhD. Helena De la Torre
Ciclo académico Octubre 2021-Febrero 2022
Integrantes
 Cajiao Naomi
 Cazañas Juan
 Romero Nathaly
 Silva Bryan
EXTRACCIÓN DE DNA Y PESO MOLECULAR DE DNA
1. OBJETIVOS
a. Objetivo general
 Analizar las técnicas y reactivos empleados en la extracción genómica de muestras de
células vegetales y células animales a partir de los resultados obtenidos de la práctica
de forma casera con el fin de desarrollar habilidades y conocimiento necesario para
emplearlos en el manejo de laboratorios.
b. Objetivos específicos
 Establecer la función que tiene cada uno de los reactivos e instrumentos utilizados en
la práctica de extracción de ADN.
 Determinar las causas que afectan los resultados durante el método casero para la
extracción de ADN.
2. INTRODUCCIÓN
Los organismos eucariotas tienen características que hacen que sus células posean
similitudes, una de estas es la presencia de núcleo celular en el cual se encuentra conteniendo
el material genético de un organismo, el ADN se considera como la unidad principal de
herencia dando como resultado características tanto fenotípicas como genotípicas a una
determinada especie. El gran desarrollo de la ciencia y la basta tecnología en la actualidad, ha

2. contribuido al estudio de la composición a nivel microscópico de humanos, plantas y animales
lo que ha permitido el manifiesto de distintas técnicas para la extracción del ADN a nivel de
laboratorio con el fin de ampliar el conocimiento sobre la molécula de la vida (Martínez, 2010).
Las técnicas de extracción de ADN proporcionan la posibilidad de aislamiento de
moléculas altamente puras, facilitando así su estudio, siendo esto una gran ventaja para el
desarrollo de medicamentos creados a partir del ADN o conocimiento sobre enfermedades
hereditarias o congénitas y sus posibles tratamientos. No obstante, es importante mencionar
que esta técnica es posible desarrollarla también de forma casera, debido a que los productos
de consumo diario como frutas y verduras poseen sus propios genes, mientras que los productos
de uso doméstico como, sal, alcohol, agua, jabón desempeñan las mismas propiedades que los
reactivos usados dentro de un laboratorio. Finalmente, el desarrollo de extracción casera
favorece la comprensión de la morfología del ADN a personas que lo estén estudiando (Merino
et al., 2019).
3. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1 Materiales y reactivos
Tabla 1
Materiales, reactivos y equipos usados durante la práctica.
Materiales Reactivos Equipos Cantidades según
la extracción
 Varios vasos
(transparente
s, altos)
 Agua
 Gaza o tela
de algodón
 Cedazo
 Cuchara
sopera
 Palillo chino
 Palillo de
dientes
 Tenedor o
pinzas
 Futas (1
platano ó de
4 a 5 fresas)
 Jabón líquido
para manos o
vajillas.
extracción)
 Sal de mesa
 Ablandador
de carne (1
pizca, solo
para la
muestra de
saliva)
 Alcohol (al
70% frio o
industrial al
96%), 200ml
aproximada
mente.
 Cocina o
microondas
 Licuadora
 Mandil
 Guantes
 Ollas
El agua solo se
utiliza para la
extracción de ADN
de fruta, media tasa
aproximadamente.
Una cucharada de
jabón para la
extracción de ADN
de fruta y dos gotas
para la muestra de
saliva. Una
cucharada de sal
para el
procedimiento en la
fruta y una pizca
para la saliva.

3.  Muestra de
saliva (media
tasa)
Fuente: Elaboración Propia
3.2 Procedimiento experimental
Procedimiento para la extracción de ADN en una muestra de fruta
Paso 1: Se preparó una solución de lisis agregando una cucharada de sal y jabón líquido, se
agrega media taza de agua o 150ml aproximadamente, se calienta la solución a baño María
hasta que esta se entibie (2 min) o durante 30seg en el microondas.
Paso 2: Se colocó en la licuadora la fruta seleccionada hasta que se formó un puré.
Paso 3: Se tomó cinco cucharadas (75ml aproximadamente) de la fruta triturada y solución
de lisis en la misma cantidad para colocar todo en un recipiente y mezclar.
Paso 4: Por medio del cedazo y con ayuda de la tela de algodón o gaza se cernió la mezcla
separando la fase líquida.
Paso 5: Se incorporó lentamente por medio de los bordes del recipiente el cual se encontraba
inclinado el alcohol al 70% enfriado previamente, se buscó duplicar la cantidad de muestra en
fase líquida obtenida en el anterior paso.
Paso 6: Después de unos minutos de reposo se evidencia la división en dos fases de la muestra
en donde se extrajo las hebras de ADN presentes en la parte superior del vaso.
Procedimiento para la extracción de ADN en una muestra de saliva
Paso 1: Se tomó una muestra de saliva (medio vaso o 150ml) se añade 2 gotas de jabón
líquido mezclando suavemente hasta que se homogenice la muestra durante 1min.
Paso 2: Se colocó una pizca del ablandador de carne y se procedió a homogenizar.
Paso 3: Se agregó el alcohol previamente enfriado, inclinando el vaso y vertiendo el líquido
lentamente hasta que la muestra duplique su cantidad.
Paso 4: Al Se evidenció la separación en fases en dónde la parte superior contenía las hebras
de ADN y se procedió a la extracción de las mismas.
4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
4.1. Resultados

4. Tabla 2
Resultados obtenidos para la extracción de ADN vegetal y animal.
Muestra Fotografía Observaciones
ADN de
fresas
No se logró extraer mucho
ADN, presentó una textura
grumosa posterior a la
extracción
ADN de
extraído de
la saliva.
Tiene aspecto más líquido y
no presenta demasiados
grumos.
ADN de
banana
Se puede observar
perfectamente la separación
en dos fases que se produjo
luego de verter el alcohol.
ADN de
extraído de
la saliva
Fibras de ADN de
contextura grumosa, aunque
en muy pequeña cantidad
ADN de
fresas
Fibras de ADN débiles y de
difícil extracción.

5. ADN de
extraído de
la saliva
Material genético de fácil
extracción de aspecto
grumoso.
ADN
extraído de
un banano
Material genético en gran
cantidad de aspecto grumo
ADN
extraído de
una
muestra de
saliva
Material genético escaso y
de fibrillas débiles.
Nota: Datos obtenidos durante la práctica procedentes de Silva Bryan, Cazañas Juan,
Romero Nathaly y Cajiao Janis.
Discusión
En general, los resultados obtenidos de la extracción casera de ADN en muestras
vegetales (Tabla 2) y muestras de origen animal (Tabla 2) se vieron influenciados tanto por los
reactivos utilizados como también por los pasos empleados en el transcurso de la práctica.
Entre los principales componentes se encuentra el alcohol, el mismo que mostró ser un
elemento fundamental para la obtención del producto; Suazo et al (2020), menciona que el
etanol actúa como inhibidor durante la extracción de ADN, y que, en dependencia de su
concentración, puede llegar a oxidar el ADN durante el proceso de lisis. A razón de esto, Lugo
(2018), alude que la lisis celular depende significativamente del tipo de muestra a examinar,
puesto que en ejemplares como sangre o saliva se alcanza una eficiente lisis celular en un
tiempo corto, mientras que, en otros tipos de especímenes como tejidos vegetales se requiere
de un tratamiento previo mucho más laborioso y de mayor tiempo. Esto se pudo comprobar en
la práctica casera, debido a que para extraer el ADN de las frutas se tuvo que licuar, machacar
y cernir, lo cual para la muestra de saliva no fue necesario, esto se explica porque los tejidos
vegetales y sobre todo las frutas presentan gran cantidad de polisacáridos y compuestos
polifenólicos que se acumulan durante la maduración o en respuesta a estímulos ambientales,
lo que complica la redisolución del ADN.

6. Del mismo modo, el uso de detergente también es indispensable, ya que comprende la
capacidad de romper la bicapa de fosfolípidos de las membranas plasmáticas y la envoltura
nuclear de las células, Alejos et al (2004) afirma que el detergente descompone los lípidos de
la membrana al deshacer las uniones que mantienen la membrana junta, ayudando a que el
ADN sea más sencillo de extraer.
La extracción de ADN de forma casera presenta serias dificultades y sesgos para extraer
de forma efectiva, cantidades significantes de ADN, dada la falta de materiales y equipos.
Como se evidencia en la Tabla 2, la cantidad de ADN rescatado por integrante del grupo posee
variaciones bastante significativas a pesar de utilizar la misma fruta en algunos casos. La
selección de la fruta influye directamente en la cantidad de ADN que se puede extraer, en el
caso de la fresa por poseer 56 cromosomas (ocho copias de cada cromosoma) posee una mayor
cantidad de ADN (Bonet Gigante, 2010) con relación al banano que solo posee 11 cromosoma
(Duenas et al., 2005). Por otro lado, las técnicas comerciales debido a su carácter profesional
ya están estandarizadas y prometen rescatar ADN con mayor cantidad y calidad, aunque
represente un costo superior.
Emplear técnicas caseras resulta muy económico, sin embargo, las muestras no frescas
deben ser mantenerse a una temperatura de -20 °C a 4 °C. Las técnicas de extracción de ADN
en laboratorio comprenden procesos químicos y físicos, que poseen ciertas ventajas y
desventajas. Las técnicas de extracción más utilizadas son fenol-cloroformo, cloruro de cesio,
cromatografía por exclusión de tamaño, salting-out y chelex (Salazar et al., 2013).
La técnica de fenol-cloroformo es la más utilizada, emplea dodecilsulfato sódico como
detergente no iónico para lisar las células y no dañar los ácidos nucleicos, a través de la
aplicación buffer de lisis (detergente, sales y proteinasa K) es liberado el ADN de las histonas.
Para la eliminación de restos celulares se administra Tris-Cl y EDTA seguido de centrifugación
de 200 a 1000 rpm. Luego se aplica los solventes orgánicos como el cloroformo, fenol y alcohol
en proporción 24:25:1 para la desnaturalización y precipitación de las proteínas. El ARN no
deseado es eliminado con ARNasas y se precipita con etanol helado (Gupta, 2019).
5. CONCLUSIONES
La extracción de ADN de forma casera posee una metodología sencilla y eficaz con
materiales e instrumentos de uso cotidiano, es por ello que existen variables externas que no se
pueden controlar, así como lo son las cantidades precisas de reactivos añadidos o las diferencias

7. existentes entre la composición química de los mismos, lo cual al extraer el material genético
presenta desventajas, sin embargo, se observó las características físicas que tiene el ADN fuera
de la envoltura celular, en donde principalmente se evidencia diferencias en los resultados
obtenidos según el tipo de muestra analizada, vegetal o animal, la preparación y procesamiento
de las mismas implican diferencias de tratamiento y reactivos, similitud que también presentan
los procesos a nivel de laboratorio.
Los resultados obtenidos durante la práctica evidenciaron la formación de dos fases
después de colocar el alcohol, una semisólida y otra liquida. Esto se debe a que el alcohol
contiene etanol el cual actúa como un inhibidor, permitiendo que el ADN se pliegue sobre sí
mismo y convirtiéndose así en una solución insoluble. También se demostró que el detergente
cumple una función específica durante el desarrollo de la práctica, ya que este permite romper
la bicapa lipídica de la célula además de su envoltura nuclear.
Se estableció la importancia que tiene el tipo de muestra durante la aplicación del
método de extracción de ADN, debido a que las muestras obtenidas de tejidos vegetales tendrán
ciertas variaciones en comparación con las muestras obtenidas de tejidos animales. Una de las
causas de estas variaciones es la lisis celular, la cual se produce en menor tiempo en
comparación con la lisis producida por las células vegetales.
6. CUESTIONARIO
Consultar el protocolo de extracción de ADN con solvente y compararlo con la práctica
Método fenol-cloroformo: Se realiza la ruptura de las macromoléculas de la muestra,
para este proceso se toma en cuenta el material biológico que se está usando (en ciertos cosos
se puede realizar una homogenización por medio de nitrógeno líquido y tampón de lisis), se
añade fenol-cloroformo-alcohol isoamílico, con sus respectivas centrifugaciones, el ADN se
precipita con etanol o acetato de sodio proceso en el que se centrifuga se lava con etanol al
70% y se deja secar a temperatura ambiente, se resuspende la muestra de ADN en una solución
tampón tris-EDTA TE (Fraga et al., 2004). Para este método se usa fenol-cloroformo-alcohol
isoamílico para disolver las moléculas de lípidos y proteínas mientras que en la extracción
casera de ADN el jabón se usa para la lisis de los lípidos presentes en la membrana celular y la
sal permite que existan mayores interacciones hidrofóbicas entre proteínas para que se dé la
coagulación del ADN, en ambos procesos se usa una fase alcohólica para que se dé la
separación del ADN de otros compuestos, el método casero luego de la lisis de la muestra

8. necesita procesos de homogenización ligeros debido a la sensibilidad del ADN que tiende a
romperse mientras que en procesos de laboratorio como el antes nombrado es necesario que se
realicen reiteradas centrifugaciones para obtener ADN, este proceso en el laboratorio tiene
mayor exactitud y control en cada proceso realizado (Merino et al., 2019).
7. BIBLIOGRAFÍA
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