Presented by Juan Diego Gómez Peña y Jose Alejandro Gómez Roldán

1. Presented by :
Juan Diego Gómez Peña
Jose Alejandro Gómez Roldán
third semester
Medicine, UPB

2. Introduction
Helicobacter pylori
● It’s a gram-negative
● Acid resistance mechanisms (ureases).
● It’s microaerophilic and its proliferation is slow.
Gastritis
● It is an acute or chronic disease of the gastric mucosa with histological
findings of inflammation.
● There is atrophy of the gastric mucosa by Helicobacter pylori
● Parietal cell death therefore decreased gastric acid secretion.

3. Transcription factors:
Helicobacter pylori can interfere with transcription factors STAT3, NF-κB, and
β-catenin, and ETS1 to mediate inflammatory response.
cag is a group of genes that encode a type IV bacterial secretion system of
which are:
● the CagA protein that activates the NF-kB pathway that induces ETS1
● CagL protein, binds to integrins on the cell surface.
ETS1 is a proto-oncogene that plays an important role in inflammatory
disorders, also on the pathogenesis of H. pylori-associated gastritis.
- inflammatory response -leukocyte migration and chemotaxis

4. Objectives
● Explain the expression of ETS1 in gastric epithelial cells positively
regulates the inflammatory response in Helicobacter pylori-associated
gastritis

5. MÉTODOS
PCR en tiempo real
El PCR en tiempo real permite realizar el procesos de amplificación de
fragmentos de DNA y de detección de manera simultánea.
La detección se realiza por fluorescencia, al mismo tiempo que se amplifica la
cantidad de DNA sintetizado.
La emisión de fluorescencia es directamente proporcional a la cantidad de
DNA formado.
En el artículo se usó para cuantificar el RNAm del factor de transcripción ETS1.

6. Ensayo de Luciferasa: Es utilizada para estudiar la expresión génica a nivel
transcripcional.
● Se traduce el ARNm, produciendo la
enzima reportera de luciferasa.
● Luego se lisa la célula y la luciferasa
cataliza la luciferina y ATP en Oxiluciferina
la cual genera luz. Se mide con un
luminómero.
● En este caso, usaron el promotor del gen
ETS1.
● Consiste en identificar un promotor a estudiar
● se inserta upstream del gen de Luciferasa en un plásmido.

7. Western blot
-Las células y tejido fueron puestas en gel SDS-PAGE al 10% (Buffer)
-Posteriormente se transfiere a una membrana PVDF y se observa la
migración de las proteínas al polo positivo.
-las más grandes son las que menos migrarán al polo positivo
-luego para bloquear la membrana se usó BSA al 5% y se pone en suspensión
con anticuerpos específicos
-posteriormente se incubó en anticuerpos secundarios conjugados con HRP
-las proteínas fueron visualizadas usando kit de quimioluminiscencia ECL

8. Transfección de ARNsi
-Se usó RNAsi dirigido al ETS1 y RNAsi de control
-Alrededor del 50% de monocapas confluentes fueron lavadas e incubadas en
medio libre de suero y antibióticos.
-las transfecciones se realizaron usando lipofectamine 2000

9. Resultados
1 2
3

10. Resultado
4
5
6
7

11. Resultados

12. Resultados

13. Discussion
AUTOR Agree or
disagree
Findlay, V. J. et al. ETS family is one of the largest families of evolutionarily conserved
TFs, regulating critical cellular functions during cell homeostasis
and contributing to tumor progression when perturbed
DiDonato, J. A., Mercurio, F.
& Karin, M. et al.
The NF-κB signaling pathway is a master regulator of inflammatory
responses as it regulated in many cellular processes, including
proliferation, angiogenesis, and even transformation
Yamaoka, Y. et al. Previous studies have shown that the pathogenicity of H. pylori is
largely attributed to virulence factor, cagA protein, which is a
120–140 kDa protein and can be injected into GECs via the T4SS

14. Conclusions
-Understand molecular biology methods, and know what their proper use is
like, determines the success of a research.
-All the biggest discoveries on medicine is related with the laboratory research
and molecular biology methods
-Molecular biology allows an evidence-based precision medicine, because
research has allowed identify especific proteins and molecules.

15. Mapa conceptual José Alejandro Gómez Roldán

16. Mapa conceptual Juan Diego Gómez Peña