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Caracterización genética de Enterococos resistentes a vancomicina aislados en Hungría 2012-2015
- 2. INTRODUCTION • ENTEROCOCCUS • IS A LARGE GENUS OF LACTIC ACID BACTERIA OF THE PHYLUM FIRMICUTES. • ENTEROCOCCI ARE GRAM-POSITIVE COCCI • CLINICAL INFETIONS: • URINARYTRACT INFECTIONS • BACTEREMIA • BACTERIAL ENDOCARDITIS • DIVERTICULITIS • MENINGITIS.
- 4. AIM •THE AIM OF THE STUDY WAS TO CHARACTERIZE AND ELICIT THE GENETIC RELATEDNESS OF EMERGING VANCOMYCIN-RESISTANT ENTEROCOCCI (VRE) ISOLATED BETWEEN 2012 AND 2015 AT A TEACHING HOSPITAL IN DEBRECEN, HUNGARY.
- 5. MATERIALES Y MÉTODOS •AISLAMIENTO • EL PERIODO DE ESTUDIO FUE ENTRE ENERO DEL 2012 Y DICIEMBRE DE 2015 • SE ASILARON EN TOTAL 7799 ENTEROCOCOS • OBTENIDAS DE 5687 PACIENTES, DEL HOSPITAL UNIVERSITARIO DE DEBRECEN, HUNGRÍA
- 6. MÉTODOS MALDI-TOF desorción/ionización láser asistida por matriz. acoplada a un analizador TOF Permite el análisis de biomoléculas y moléculas orgánicas grandes Se mezcla con la matriz en exceso sobre una superficie de metal Ambas cocristalizan cuando se evapora el solvente E. TEST Prueba de epsilometria Se usa para determinar si una cepa es susceptible a la acción de antibióticos Tira rectangular que contiene el antibiótico a estudiar
- 7. MÉTODOS PCR Reacción en cadena de la polimerasa El objetivo de esta técnica es la amplificación de un gen o un fragmento de DNA En este caso se están amplificando los genes de la resistencia bacteriana Principio del método • Desnaturalización del DNA • Hibridación de la hebra • Replicación de la hebra
- 8. MÉTODOS • Electroforesis en gel de campo pulsado • Se tienen una cámara con varios electrodos, se van activando por pulsos. Se van halando las muestras • Se busca: una caracterización genética de una población. PFGE • Tipificación multilocus de secuencias • Caracterización taxonómica de bacterias y microorganismos • Caracteriza cepas mediante sus perfiles alélicos únicos • En este caso se uso para 7 genes MLST
- 9. RESULTADOS
- 10. RESULTADOS
- 11. RESULTADOS
- 12. DISCUSSION “In Hungary,the first known healthcare- associatedVRE outbreakwas caused by a vanB isolateat a hematology and stem cell transplantationunit in 2004.” Böröcz, K., E. Szilagyi, A. Kurcz, B. Libisch, K. Glatz, and M. Gacs. 2005 “Regardingthe distributionof vancomycinresistance genes it is known that vanA predominatesin the United States while in Australia vanB is more frequent and in Europe both vanA and vanB-positiveVRE can be found” Howden, B.P., K.E. Holt, M.M.C. Lam, T. Seemann, S.Ballard, G.W. Coombs, S.Y.C. Tong, M.L. Grayson, P.D.R. Johnson, and T.P. Stinear. 2013
- 13. DISCUSSION “Frequency of resistance was 100% to ampicillin and the strains were also resistant to gentamicin at a high level (81.4%). Because of the synergism between aminoglycosides and cell wall active agents this is a serious problem since it reduces the number of possible treatments available for enterococcal infections. This resistance rate is similar to the findings in Iran.” Arshadi, M., M. Douraghi, L. Shokoohizadeh., S.M. Moosavian, and M.R. Pourmand. 2017.
- 14. CONCLUSIONS Bacterial resistance doesn´t just affect a country. You can see that according to the experiment and other studies other countries are also being affected. Becoming a public health problem. The bacteria acquire resistance to the new implemented drugs. Which will become a bigger problem to look for antibiotics against it in the future
- 15. MAPA CONCEPTUAL • CMAPTOOLS. EN INGLES O ESPAÑOL NO HAY PREFERENCIAS • TEMA CENTRAL: RESISTENCIA-----CARACTERÍSTICAS DE LA RESISTENCIA-----ENTEROCOCO----- VANCOMICINA-----CONCLUSIÓN
Notas del editor
- Esta preparación es sometida a pulsos cortos de láser en alto vacío lo que provoca que la absorción de energía por parte de la matriz sea convertida en energía de excitación y en transferencia de H+ a la muestra (ionización) dando lugar, normalmente, a especies monocargadas que son analizadas mediante TOF. En este caso para el E-test se utilizo la vancomicina teicoplanin, daptomycin, tedizolid, linezolid, and tigecyline
- La técnica es una amplificación enzimática In vitro (incremento del numero de copias del DNA) Desnaturalizacion del DNA para dar hebras sencillas Hibridacion especifica de la hebra con oligonucleótidos Replicacion de la hebra por DNA polimerasa a partir de oligonucleotdo anterior como cebador
- PFGE: para saber como se comporta una sepa en cuanto a la resistencia con respecto a otra, se pueden concluir diferencias genéticas o similitudes La MLST mide directamente los cambios en la secuencia de una serie de genes de mantenimiento y caracteriza cepas mediante sus perfiles alélicos únicos. El principio de la MLST es sencillo: la técnica consiste en amplificación mediante PCR seguida de la secuenciación del ADN. Se pueden rastrear las diferencias en nucleótidos entre cepas en un número variable de genes en función del nivel de discriminación que se desee.
- No hubo una presencia fuerte de la biocapa Casi todos estuvieron negativos para la biocapa Cuando hay precensia de genes si disminuye la presencia de la biocapa En las ultimas tres muestras se puede ver que no hay presencia de ningún gen y las tres concuerdan con que producción de biocapa negativa en cambio en los que hubo expresio de 1 gen hubo producción de biocapanegativa mucho mayor
- cuales fueron los antibióticos para los cuales se hizo la evalucion RESISTENCIA BACTERIANA Los antibiotidos para los cuales se hizo la evalucion fueron la vancomicina, teicoplanina, Ampicilina, gentamicina, ciprofloxacina, linezolid, tedizolid, daptomicina, tigeciclina. Como se puede ver se presentan dos columnas una con suseptibilidad y otra con la rsistencia, como se puede ver y es muy llamativo, las bacterias son resistentes al 100% a 3 antibióticos los cuales son la vancomicina, ampicilina y la ciprofloxacina. Comparar todos los datos de las tablas
- SIMILITUD QUE HAY ENTRE LAS BACTERIAS. Linea punteada hacia la derecha es mas similar que lo que hay hacia la izquierda. Encerramos en un cuadro las sepas mas diferentes y en otro las mas iguales Patron electroforético igual en las que son similares pero en cuanto a las otrs que hay que no son tan paridas son muy diferentes Vienen de sitios diferentes hay 17, 412, 203 y 117. esto hace que genéticamente el comportamiento de la bacteria sea diferente a un tratamiento antibiótico porque la resistencia va a ser ccon un comportamiento diferente
- Frequency of resistance was 100% to ampicillin and the strains were also resistant to gentamicin at a high level (81.4%). Because of the synergism between aminoglycosides and cell wall active agents this is a serious problem since it reduces the number of possible treatments available for enterococcal infections. This resistance rate is similar to the findings in Iran.4