El documento describe un estudio epidemiológico y molecular de infecciones invasivas causadas por Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) adquirido en la comunidad en Argentina. El estudio encontró que la clona ST30-SCCmec IVc fue la causa predominante de infecciones, mostrando resistencia a oxacilina pero sensibilidad a otros antibióticos. Los autores concluyen que el conocimiento de las características clínicas y moleculares de estas infecciones

1. By Diana Grecco Herrera
& Daniel Gallego González
Pontificial Bolivarian University
Faculty of Medicine
Molecular Biology
III Semester
2013 - I
Methicillin-resistant Staphylococcus aureus
ST30-SCCmec IVc clone as the major
cause of community-acquired invasive
infections in Argentina

2. ORIGINAL ARTICLE
Authors:
• S. Fernandez;
• L. de Vedia;
• M. Lopez;
• N. Gardella;
• S. Di Gregorio;
• M. Ganaha; et al.

3. ORIGINAL ARTICLE
 Short communication.
 Article history:
• Received 5 October 2012.
• Received in revised form
18th December 2012.
• Accepted 19th December 2012.
• Available online January 20th.
• Published by Elsevier.

4. INTRODUCTION
 STAPHYLOCOCCUS
• Genus of Gram-positive
bacteria.
• 32 species most of wich
are animal pathogens or
commensals.
• Aerobic and facultative
anaerobic.
• 1μm in diameter.

5. INTRODUCTION
 STAPHYLOCOCCUS
• Catalase +, oxidase -,
nonmotile, nonsporing,
noncapsulated.
• Solid media: Grape-like
clustering.
• Liquid media: Short
chains.
• Smears taken from pus:
Singly, pairs, clusters,
short chains of 3 or 4 cells.

6. INTRODUCTION
 STAPHYLOCOCCUS AUREUS
• Is the most virulent of all the S.
• Coagulase-positive.
• Found mainly on the skin and
mocous membranes of animals.
• Normal microbial flora.
• Produce toxins and virulent
enzymes.
Cause: Foliculitis, osteomielitis,
necrotizing pneumonia, endocar-
ditis, meningitis and others.

7. INTRODUCTION
 METHICILLIN
• Narrow-spectrum β - lactam
antibiotic used against A B
Gram-positive bacteria.
• Inhibits the synthesis of
bacterial cell walls.
• Semisynthetic derivate of
penicillin.
A: β-Lactam Ring
• Penicillinase resistance. B: Thiazolidine Ring
• It is no longer manufactured.

8. INTRODUCTION
 METHICILLIN-RESISTANT
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
• Methicillin-resistant bacteria appeared at 1960’s in UK.
• Nowadays is a worldwide pandemic.
 MECHANISM OF RESISTANCE IN MRSA:
mecA gene Encodes PBP2a Low affinity for β -
lactams RESISTANCE TO METHICILLIN

9. INTRODUCTION
 METHICILLIN-RESISTANT STAPHYLOCOCCUS
AUREUS ST30-SCCmec IVc CLONE.
Staphylococcus: Genus.
Aureus: Species.
Methicillin-resistant: Strain.
ST30: Sequence type number 30.
SCC: Staphylococcal Cassette Chromosome.
mec: Gene mecA.
IV: Type of SCCmec.
c: Subtype of IV SCCmec.
Clone: Identical copy of a gene

10. GENERAL OBJECTIVE
 To describe the clinical and molecular
epidemiology of current invasive infections
caused by CA-MRSA in adolescent and
adult patients in Argentina.

11. MATERIALES & MÉTODOS
 DISEÑO DEL ESTUDIO:
• Estudio de tipo prospectivo, multicéntrico,
observacional.
• Diseñado para evaluar las características
clínicas y moleculares de las infecciones
invasivas por CA-MRSA.
• Argentina, marzo de 2010 - diciembre de
2011.
• 11 hospitales participantes, situados en
la región central del país.

12. MATERIALES & MÉTODOS
 SELECCIÓN DE PACIENTES:
CRITERIOS DE INCLUSIÓN
Pacientes ≥ 14 años con infección masiva de MRSA
diagnosticada al ser admitido en el hospital o en 48 horas.
 CRITERIOS DE EXCLUSIÓN
Si cumplían con alguno de los siguientes ítems
en los últimos 12 meses:
 Hospitalización.
 Diálisis.
 Residencia en centro de atención durante
mucho tiempo.

13. MATERIALES & MÉTODOS
 RECOLECCIÓN DE DATOS: Historias clínicas
• Variables socio-económicas.
• Comorbilidades.
• Uso de antibiótico previo.
• Presentación clínica.
• Resultados principales de laboratorio al inicio del estudio.
• La fuente de aislamiento (Ej: sangre, líquido articular, pleura).
 Los datos de seguimiento se pretendieron obtener 90 días
después de finalizar el tratamiento.

14. MATERIALES & MÉTODOS
 ESTUDIOS MICROBIOLÓGICOS: MÉTODO
KIRBY-BAUER
• Identificación de S. aureus = procedimientos
de diagnóstico convencionales.
• Almacenamiento a -20°C.
• Llevados a un laboratorio de la U. de Buenos
Aires.
• Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos
= Métodos de difusión de acuerdo con las
directrices del Instituto de Normas Clínicas y
de Laboratorio. (CLSI, 2009). Agar
Müller-Hinton

15. MATERIALES & MÉTODOS
Inóculo suspendido VS.
 McFarland: Ácido sulfúrico 1% +
cloruro de bario 1,175%
1. 4-5 colonias de 16-24 h de cto en
una placa de agar.
2. Se suspenden en caldo en o
suero fisiológico al 0,85%.
3. Se compara la turbidez de la
suspensión con el estándar 0,5 de
McFarland.
Usado en la preparación del inóculo
para la prueba de sensibilidad a
antimicro- bianos o antibiogramas.

16. MATERIALES & MÉTODOS
 AMPLIFICACIÓN POR PCR:
 De una región de ADN que
corresponden a un gen o parte de él.
 Las porciones molde de ADN
son flanqueadas por dos
oligonucleótidos que inician la
reacción de polimerización.
 Con la DNA polimerasa, Mg como
cofactor, un buffer y dNTP.

17. MATERIALES & MÉTODOS
 MÉTODOS DE TIPIFICACIÓN:
 Electroforesis en gel de
campo pulsado (PFGE).
 Endonucleasas de restricción
de ADN infrecuentes. (SmaI)
 Fragmentos de gran tamaño.
(>20kb).
 Pulsos alternos de corriente
multidireccional.

18. RESULTADOS
Características
clínicas

19. RESULTADOS
Características
clínicas

20. RESULTADOS
Características
clínicas

21. RESULTADOS
 SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA:
• Las pruebas de sensibilidad antibiótica
revelaron resistencia a la oxacilina (100%),
la eritromicina (9%), clindamicina (6%),
gentamicina (11%), y quinolonas (4%)

22. RESULTADOS
 SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA:
• Todos los aislamientos de MRSA fueron
sensibles a vancomicina, teicoplanina,
linezolid, rifampicina, doxiciclina y trimetoprim /
sulfametoxazol.
 Ninguna de las cepas fue multirresistente.

23. RESULTADOS
 Caracterización
molecular de los
aislados de MRSA:
• MRSA fue aislado del
70% de los pacientes
y la clona ST30 fue
predominante en el
68%.
C1 C3

24. RESULTADOS
 Caracterización molecular de los aislados de MRSA:
En los últimos 6 años la clona que predominó en Argentina fue: CAA clone: ST5-
SCCmec IV-spa t311. Fue reemplazada por la clona ST30- SCCmec IVc-spa t019.

25. DISCUSSION
AUTHORS PHRASE YES NO
“Spread of some epidemic clones into
other regions has produced some
Amorim et al. displacement of previously circulating
(2007); Gardella
et al. (2005)
strains indicating that successful
lineages may have competitive
x
advantages which may be key in the
evolution of this pathogen”.
“Skin and skin structure infections were
the most common primary source for
Klevens et al.
(2007)
invasive CA-MRSA infection. This finding
is in agreement with both recent and old
x
studies”.

26. DISCUSSION
AUTHORS PHRASE YES NO
“Antimicrobial resistance patterns have
been used to distinguish between CA-
Ma et al. (2002); MRSA and HA-MRSA strains, with CA-
Naimi et al.
(2003)
MRSA strains showing greater
susceptibility to several antimicrobial
agents (usually gentamicin,
x
clindamycin, and trimethoprim-
sulfamethoxazole) than HA-MRSA”.
“Suggest the use of monotherapy with
Deresinski
(2009)
vancomycin to treat serious MRSA
infections there are concerns regarding
a diminished efficacy of this agent”.
x

27. PERSONAL CONCLUSIONS
 The main factor which has allowed to the massive
proliferation of this bacterial strain is the antibiotics
indiscriminate use. This explains the resistance to
oxacillin, erythromycin, clindamycin, gentamicin and
quinolones, presented by this bacterial strain.
 Knowing the clinical and molecular features of bacterial
infections is very important to the development of a
health plan and an appropriate treatment, because
these microorganisms are constantly mutating and
becoming resistant to different antibiotics.

28. PERSONAL CONCLUSIONS
 The knowledge of the genetic variability involved in the
virulence and antibiotic resistance determined by PCR
and PFGE methods can provide molecular targets for
antibiotic treatment.
 By means of this research it was possible to verify that
the new clones of CA-MRSA have a better capacity to
expand, because they possess more virulence factors
and are better able to survive on the skin of human
beings, which gives them an advantage over existing
clones.

29. REFERENCES
 Fernandez S, de Vedia L, Lopez Furst MJ, Gardella N, Di Gregorio S,
Ganaha MC. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus ST30-SCCmec
IVc clone as the major cause of community-acquired invasive infections in
Argentina. Infect Genet Evol. 2013:14C:401-405.
 Rogers K. Methicillin. Encyclopædia Britannica, Inc. 2013.
 Chen L, Chopra T, Kaye K. Pathogens Resistant to Antibacterial Agents.
Med Clin N Am 95, 2011:647-676.
 Chandra S. Textbook of Microbiology and Inmunology. Elsevier. 2009:181 –
182.
 Forbes, Sahm, Weissfeld. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology.
Editorial Medica Panamericana. 12th edition. 2007:255p.
 Jiménez J, Correa M. Staphylococcus aureus resistente a meticilina: bases
 moleculares de la resistencia, epidemiología y tipificación. Iatreia. 2009:22
(2):147-158.
 Dufour, Philippe. Jarraud, Sophie. Et al. High Genetic Variability of the agr
Locus inStaphylococcus Species. J Bacteriol. 2002 Feb;184(4):1180-6.

30. CONCEPT MAPS
 Cmaptools Grecco
Diana Grecco Herrera

31. CONCEPT MAPS
Daniel Gallego González