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PRINCIPIOS DE
MICROSCOPIA
MICROSCOPIO
• Es una herramienta indispensable ya que la mayoría de las estructuras
celulares son demasiado pequeñas para ser observadas a simple vista.
• El primer microscopio fue desarrollados en 1590 por Zacharias Janssen
• Uno de los primeros científicos en utilizar el microscopio con fines
científicos fue Robert Hooke, quien en 1665 publicó una de sus obras más
importantes titulada Micrographia.
• El tipo más común y el primero que se inventó es el
microscopio óptico. Se trata de un instrumento óptico
que contiene una o varios lentes que permiten obtener
una imagen aumentada del objeto y que funciona por
refracción.
Elementos del microscopio
• Fuente (como un haz de fotones o de electrones)
• Muestra sobre la que actúa dicha Fuente
• Receptor de la información proporcionada por la interacción de la fuente
con la muestra
• Procesador de esta información.
La calidad de la imagen depende de tres
factores
• Aumento
• Contraste
• Resolución
Aumento
• Con una lente convexa simple se pueden visualizar estructuras de hasta 1 µm. Los
microscopios que utilizamos actualmente tienen más de una lente, son compuestos.
• Aunque el aumento es muy importante, no
siempre es suficiente para que apreciemos los detalles de un objeto. Los dos factores que
afectan a nuestra capacidad para ver una imagen de calidad son el contraste y la resolución.
El contraste
• Diferencia en la intensidad luminosa que nos permite diferenciar el objeto
del fondo o apreciar distintas partes del mismo.
• Depende de la cantidad de luz absorbida por el objeto y la que es transmitida.
Si un objeto y el medio inmediato que lo rodea transmitieran la misma
cantidad de luz, la imagen del objeto no se distinguiría del fondo
• Algunos tipos de microscopios tienen
dispositivos para aumentar el contraste (ej. Microscopio de contraste de
fases, microscopio de campo oscuro).
Resolución
• La resolución depende del sistema de lentes del
microscopio, no del objeto que se está estudiando; en concreto depende
de:
• Tamaño de la primera lente de aumento llamada
Objetivo
• Longitud de onda de la fuente de iluminación del objeto
• Índice de refracción (capacidad de desviación de la luz) del material que se encuentre
entre la lente del objetivo y el especimen
Tipos mas comunes de microscopio
• Óptico
• Electrónico
• Contraste de fase
• Usa la luz como fuente de iluminación, (natural o artificial)
• Fue el primero en inventarse
• Existen dos tipos
– Simples (un lente)
– Compuestos (dos lentes)
Microscopios ópticos
Microscopio electrónico
• Permite reconocer las ultra estructuras celulares
• Fue inventado en 1931, su uso se generaliza en la década de los 50
• Utiliza como fuente de iluminación un haz de electrones de alta velocidad, regulado
por lentes electromagnéticos
• La longitud de la onda del chorro de electrones es menor que la luz blanca, esto
determina un mayor poder de resolución.
• El haz electrónico se hace pasar por la muestra y luego se dirige a una placa
fotográfica o una pantalla fluorescente.
Microscopio electrónico de barrido
• Crea una imagen ampliada de la superficie de un objeto
• No es necesario cortar el objeto en capas para observarlo
• Explora la superficie de la imagen punto por punto
• Examina una gran parte de la muestra cada vez
Microscopio electrónico de transmisión
• Permite la observación de muestra en cortes ultrafinos
• Dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea
aumentar
• Parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el
objeto y otros lo atraviesan formando una imagen
aumentada del espécimen
Microscopio de contraste de fase
• Fue inventado alrededor del 1935
• Tiene un sistema óptico que modifica la trayectoria de los rayos de luz
• Permite exagerar ciertas propiedades de las estructuras celulares, acentuando los contrastes
y favoreciendo así su visibilidad
• Se para observar tejidos y células especialmente vivas.
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Principios y tipos de microscopía: óptico, electrónico y contraste de fase

  • 2. MICROSCOPIO • Es una herramienta indispensable ya que la mayoría de las estructuras celulares son demasiado pequeñas para ser observadas a simple vista. • El primer microscopio fue desarrollados en 1590 por Zacharias Janssen • Uno de los primeros científicos en utilizar el microscopio con fines científicos fue Robert Hooke, quien en 1665 publicó una de sus obras más importantes titulada Micrographia.
  • 3. • El tipo más común y el primero que se inventó es el microscopio óptico. Se trata de un instrumento óptico que contiene una o varios lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refracción.
  • 4. Elementos del microscopio • Fuente (como un haz de fotones o de electrones) • Muestra sobre la que actúa dicha Fuente • Receptor de la información proporcionada por la interacción de la fuente con la muestra • Procesador de esta información.
  • 5. La calidad de la imagen depende de tres factores • Aumento • Contraste • Resolución
  • 6. Aumento • Con una lente convexa simple se pueden visualizar estructuras de hasta 1 µm. Los microscopios que utilizamos actualmente tienen más de una lente, son compuestos. • Aunque el aumento es muy importante, no siempre es suficiente para que apreciemos los detalles de un objeto. Los dos factores que afectan a nuestra capacidad para ver una imagen de calidad son el contraste y la resolución.
  • 7. El contraste • Diferencia en la intensidad luminosa que nos permite diferenciar el objeto del fondo o apreciar distintas partes del mismo. • Depende de la cantidad de luz absorbida por el objeto y la que es transmitida. Si un objeto y el medio inmediato que lo rodea transmitieran la misma cantidad de luz, la imagen del objeto no se distinguiría del fondo • Algunos tipos de microscopios tienen dispositivos para aumentar el contraste (ej. Microscopio de contraste de fases, microscopio de campo oscuro).
  • 8. Resolución • La resolución depende del sistema de lentes del microscopio, no del objeto que se está estudiando; en concreto depende de: • Tamaño de la primera lente de aumento llamada Objetivo • Longitud de onda de la fuente de iluminación del objeto • Índice de refracción (capacidad de desviación de la luz) del material que se encuentre entre la lente del objetivo y el especimen
  • 9. Tipos mas comunes de microscopio • Óptico • Electrónico • Contraste de fase
  • 10. • Usa la luz como fuente de iluminación, (natural o artificial) • Fue el primero en inventarse • Existen dos tipos – Simples (un lente) – Compuestos (dos lentes) Microscopios ópticos
  • 11. Microscopio electrónico • Permite reconocer las ultra estructuras celulares • Fue inventado en 1931, su uso se generaliza en la década de los 50 • Utiliza como fuente de iluminación un haz de electrones de alta velocidad, regulado por lentes electromagnéticos • La longitud de la onda del chorro de electrones es menor que la luz blanca, esto determina un mayor poder de resolución. • El haz electrónico se hace pasar por la muestra y luego se dirige a una placa fotográfica o una pantalla fluorescente.
  • 12. Microscopio electrónico de barrido • Crea una imagen ampliada de la superficie de un objeto • No es necesario cortar el objeto en capas para observarlo • Explora la superficie de la imagen punto por punto • Examina una gran parte de la muestra cada vez
  • 13. Microscopio electrónico de transmisión • Permite la observación de muestra en cortes ultrafinos • Dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar • Parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espécimen
  • 14. Microscopio de contraste de fase • Fue inventado alrededor del 1935 • Tiene un sistema óptico que modifica la trayectoria de los rayos de luz • Permite exagerar ciertas propiedades de las estructuras celulares, acentuando los contrastes y favoreciendo así su visibilidad • Se para observar tejidos y células especialmente vivas.