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JFS H: Salud, Nutrición y Alimentación
in vitro Potencial de Ascophyllum nudoso Mediado
por antioxidantes fenólicos α-Glucosidasa y α
-Inhibición de la amilasa
EAPOSTOLIDIS Y CM LEE.UU.
ABSTRACTO: Ascophyllum nudoso es un alga parda que crece abundantemente en la región costera del Nordeste. En este
estudio, el potencial deA. nudoso para el control de la diabetes tipo 2 a través de antioxidantes α-glucosidasa y αSe investigó la
inhibición de -amilasa. Después de la selección inicial de 4 algas recolectadas localmente,A. nudoso fue elegido por su mayor
contenido fenólico y fue sometido a extracción con agua. Entre las proporciones de extracción de 50 g a 100 a 1000 ml a
temperatura ambiente, 50 g/400 ml produjeron el contenido fenólico más alto de 4,5 mg/g de peso húmedo. Para la evaluación
de la temperatura de extracción de 20 a 80◦C, se eligió 50 g/400 mL como cantidad mínima de extractante. Entre las
temperaturas estudiadas, la extracción a 80◦C dio como resultado los contenidos fenólicos totales más altos
(4,2 mg/g de peso húmedo). Todos los extractos tenían niveles similares de actividad antioxidante en el rango de 60% a 70% en términos
de actividad de eliminación de radicales libres de 1, 1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH). los 80◦El extracto C tuvo la mayorα-glucosidasa y α
-actividad inhibidora de la amilasa con IC50 de 0,24 y 1,34mg fenoles, respectivamente, en comparación con el IC50 de acarbosa, inhibidor
de referencia, siendo 0,37 y 0,68mgramo. Los resultados muestran que frescoA. nudoso tiene fuerteα-glucosidasa y leveα-actividades
inhibidoras de la amilasa que se correlacionaron con los contenidos fenólicos. Este estudio sugiere un potencial nutracéutico deA.
nudoso basado en actividades fitoquímicas antioxidantes y antihiperglucemiantes.
Palabras clave: antioxidantes,Ascophyllum nudoso, α-inhibición de la glucosidasa, fitoquímicos fenólicos, diabetes
tipo 2
Introducción El principal inconveniente de la acarbosa son sus efectos secundarios,
como distensión abdominal, flatulencia, meteorismo y posiblemente
diarrea (Bischoff y otros 1985). Se ha sugerido que tales efectos adversos
podrían ser causados por la inhibición excesiva de la función pancreática.
α-amilasa que resulta en la fermentación bacteriana anormal de
carbohidratos no digeridos en el colon (Bischoff y otros 1985; Horii y otros
1987). Ciertos extractos de plantas, como el arándano rojo, la rodiola, el
orégano y el romero, demostraron tener un efecto inhibidor más bajo
contraα-actividad de amilasa y más fuerte α-tiene un efecto inhibidor de la
glucosidasa y, por lo tanto, puede usarse potencialmente como una terapia
eficaz para la hiperglucemia posprandial con efectos secundarios mínimos
(Horii y otros 1987; Apostolidis y otros 2006; Kwon y otros 2006).
Los datos estadísticos recientes muestran que la diabetes tipo 2 es un desafío
para la salud mundial. Los estudios indican que la prevalencia total de diabetes
solo en Estados Unidos es de 20,8 millones (casi el 7% de la población total),
cuando en 1980 y 2003 esta cifra era de 5,8 y 13,8 millones, respectivamente
(Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades 2005). El manejo de
esta enfermedad requerirá estrategias multipropósito, incluida la
quimioprevención dietética como parte de la solución.
Ascophyllum nudoso es una especie de alga parda intermareal rocosa
dominante que pertenece a la clase Phaeophyceae. Se encuentra
comúnmente en la costa noreste de América del Norte y la costa noroeste
de Europa (Taylor 1962) y se usa ampliamente como alimento, cosmético,
fertilizante y recientemente como ingrediente alimentario funcional (Chan y
otros 2006). Durante los últimos 3 años, los desembarques de algas
marinas en el Golfo de Maine aumentaron de 5 millones de libras en 2005 a
7 millones de libras en 2006 y 2007, con un precio constante (alrededor de
4¢/Lb) durante los últimos 10 años (Maine Seaweed Council, comunicación
personal) A. nudoso contiene fucoxantina (Marais y Joseleau 2001), un
carotenoide que tiene potencial antiobesidad (Maeda y otros 2006) y
antioxidante (Yan y otros 1999), florotaninos
Dla diabetes mellitus es una enfermedad crónica importante causada
por el equilibrio inadecuado de la homeostasis de la glucosa (Rosetti
y otros 1990). Actualmente se conocen dos tipos de diabetes mellitus, uno
es la diabetes mellitus insulinodependiente (tipo 1) y el otro es la diabetes
mellitus no insulinodependiente (tipo 2). Si bien la diabetes tipo 1 se puede
controlar de manera eficaz mediante la administración de insulina, es difícil
encontrar un tratamiento eficaz para la diabetes tipo 2, debido a su
naturaleza no insulinodependiente, que consiste en más del 90 % de la
población diabética.
La hiperglucemia, una condición caracterizada por un aumento posprandial
anormal en el nivel de glucosa en sangre, se ha relacionado con la aparición de
diabetes tipo 2 y se ha asociado con disfunción oxidativa e insuficiencia de varios
órganos, especialmente los ojos, los riñones, los nervios, el corazón y los vasos
sanguíneos. , y se ha demostrado que también está relacionado con la
hipertensión (Haffner 1998). La hidrólisis de los carbohidratos de la dieta, como
el almidón, es la principal fuente de glucosa en la sangre. Esta hidrólisis se lleva a
cabo por un grupo de enzimas hidrolíticas que incluye pancreáticasα-amilasa e
intestinal α-glucosidasas (Harris y Zimmer 1992; Bischoff 1994). Se cree que la
inhibición de estas enzimas puede ser una estrategia importante para el control
de la diabetes tipo 2 (Krentz y Bailey 2005), en la queαLos inhibidores de la
glucosidasa podrían retrasar la rápida utilización de los carbohidratos de la dieta
y suprimir la hiperglucemia posprandial (Watanabe y otros 1997). Actualmente,
se ha demostrado que los fármacos terapéuticos, como la acarbosa, reducen
eficazmente la absorción intestinal de azúcares en humanos (Jenkins y otros
1981; Cheng y Fantus 2005).
MS 20090846 Presentado el 1 de septiembre de 2009, aceptado el 10 de enero de 2010. Los autores
pertenecen al Departamento de Nutrición y Ciencias de la Alimentación, Centro de Investigación de
Ciencias de la Alimentación y Nutrición, Univ. de Rhode Island, Kingston, RI 02881, EE. UU. Consultas
directas al autor Apostolidis (E-mail: emanos@mail.uri.edu ).
©
C 2010 Instituto de Tecnólogos de Alimentos©
doi: 10.1111/j.1750-3841.2010.01544.x
R
vol. 75, núm. 3, 2010—REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS H97
Prohibida la reproducción posterior sin autorización
H:
Salud,
Nutrición
y
Comida
Traducido del inglés al español - www.onlinedoctranslator.com
A. nudoso --inhibición de la glucosidasa. . .
(Ragan y Glombitza 1986), fenoles de gran peso molecular que tienen
potencial antioxidante (Yan y otros 1996) y antidiabético (Zhang y
otros 2007), y fenoles simples, como catequinas (Yoshie y otros 2000),
ácido hidroxibenzoico, ácido cumárico, ácido cinámico y ácido cafeico
(Dumay y otros 2004), que tienen potencial antioxidante y
antidiabético (Apostolidis y otros 2006; Kwon y otros 2006).
Estudios previos han determinado que los extractos solventes de
A. nudoso tienen un alto contenido fenólico y que este contenido fenólico se
correlaciona con la reducción de los niveles de glucosa en sangre en ratas (Zhang
y otros 2007). Los solventes utilizados en este estudio fueron etanol, butanol,
metanol y ácido acético. Sin embargo, para los sistemas alimentarios y la
aplicación de alimentos funcionales, sería más deseable un sistema de extracción
a base de agua debido a la ausencia de residuos de disolventes.
Los objetivos de nuestro estudio fueron inicialmente identificar un alga
marina local con el contenido fenólico más alto y determinar las
condiciones óptimas de extracción de agua en términos de relación alga/
agua y temperatura de extracción en contenido fenólico y α-amilasa y α
-inhibición de la glucosidasa. Este estudio ayudaría a orientar el uso deA.
nudoso extracto acuoso como remedio natural para el tratamiento de la
diabetes tipo 2.
se transfirió a un tubo de ensayo y se mezcló con 1 ml de etanol al 95 % y 5
ml de agua destilada. A cada muestra se le añadieron 0,5 mL de reactivo de
Folin-Ciocalteu al 50 % (v/v) y se mezcló en vortex. Después de 5 min, 1 ml
de Na al 5 %2CO3 Se añadió a la mezcla de reacción y se dejó reposar
durante 60 min. La absorbancia se leyó a 725 nm utilizando un
espectrofotómetro Perkin-Elmer Lambda 4b (Waltham, MA, EE. UU.). Los
valores de absorbancia se convirtieron a fenoles totales y se expresaron en
mg de ácido gálico/g de peso fresco de muestra (FW). La curva estándar se
estableció usando varias concentraciones de ácido gálico en etanol.
Actividad antioxidante por ensayo de inhibición de
radicales 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH)
La actividad antioxidante por inhibición de la captación de radicales
libres de DPPH se determinó siguiendo el procedimiento modificado
de Shetty y otros (1995). Hasta 0,8 ml 60mM DPPH en etanol, 200 mL
(25 mg fresco A. nudoso) de cada extracto, se monitoreó la
disminución de la absorbancia a 517 nm, utilizando un
espectrofotómetro Perkin-Elmer Lambda 4b (Waltham) hasta obtener
una lectura constante. Las lecturas se compararon con los controles,
que contenían 200mL de agua en lugar del extracto. El porcentaje de
inhibición se calculó por
Materiales y métodos
F
( )
− Abdominalesmuestra × 100
refresca A. nudoso, Ceramium virgatum, Ulva lactuca, y Saccharina
latissima fueron recolectados de la bahía de Narragansett 3 veces
(principios de junio de 2008, fines de junio de 2008 y septiembre de 2008).
α-Amilasa (pancreática porcina, EC 3.2.1.1), α-glucosidasa (levadura, EC
3.2.1.20) y acarbosa (levadura, EC 260.030.7) se adquirieron de Sigma
Chemical Co. (St. Louis, Missouri, EE. UU.). La acarbosa es un conocidoα
-glucosidasa y α-inhibidor de la amilasa utilizado actualmente para el
tratamiento de la diabetes tipo 2. A menos que se especifique lo contrario,
todos los productos químicos también se compraron a Sigma Chemical Co.
Abdominalescontrol
Abdominalescontrol
% inhibición =
α-ensayo de inhibición de amilasa
Una mezcla de 500mL extracto o acarbosa y 500mL Tampón de fosfato de
sodio 0,02 M (pH 6,9 con cloruro de sodio 0,006 M) que contieneα-solución de
amilasa (13U/mL) se incubaron a 25◦C durante 10 min. Después de la
preincubación, 500mSe añadieron l de solución de almidón soluble al 1% en
tampón de fosfato de sodio 0,02 M (pH 6,9 con NaCl 0,006 M) a cada tubo a
intervalos de tiempo. A continuación, las mezclas de reacción se incubaron a 25◦C
durante 10 min seguido de la adición de 1 ml de reactivo de color de ácido
dinitrosalicílico. Luego, los tubos de ensayo se colocaron en un baño de agua
hirviendo durante 5 minutos para detener la reacción y se enfriaron a
temperatura ambiente. Luego, la mezcla de reacción se diluyó con 10 ml de agua
destilada y se leyó la absorbancia a 540 nm.
( )
preparación de la muestra
En la proyección inicial, A. nodosum, C. virgatum, U. lactuca, y
S. latissima (cosechadas a principios de junio de 2008) se secaron durante
la noche a 100 ◦C en horno. A continuación, las algas secas se trituraron
durante 2 min a alta velocidad utilizando un Stephan UM5 (Alemania). El
polvo seco resultante (5 g) se extrajo con 100 mL de agua a 90◦C utilizando
un condensador de reflujo durante 30 min. Se recolectó el sobrenadante y
se centrifugó a 7200× gramo utilizando una microcentrífuga Fisher
Scientific MicroV (Pittsburgh, Pa., EE. UU.) para determinar el contenido
fenólico total.
Para el siguiente paso, decidimos usar un método de extracción más
simple usando agua fresca A. nudoso, por su mayor contenido fenólico
entre las algas analizadas. Los extractos se prepararon a partir de 50 g deA.
nudoso (cosechado a finales de junio de 2008) con 100, 200, 400, 800 y
1000 mL de agua a temperatura ambiente mezclando durante 1 min en
una licuadora Osterizer de 1,25 L. El producto mezclado se filtró a través de
un tamiz nr 25 (710mm) con 15 kg de peso de presión encima durante 5
min y el filtrado se centrifugó a 7200 × gramo y luego se utiliza para
determinar la relación de extracción óptima. Para estudiar el efecto de la
temperatura media de extracción, 50 g de agua frescaA. nudoso (cosecha
en septiembre de 2008) se extrajo con 400 mL de agua a diferentes
temperaturas (20, 40, 60 y 80 ◦C) batiendo durante 1 min en una licuadora
Osterizer. El filtrado se obtuvo como se describió anteriormente.
Después de la extracción, todas las muestras se almacenaron en un -18 ◦C congelador y
todos los experimentos se realizaron dentro de las 3 semanas.
- Abdominalescontrol − -Abdominalesmuestra × 100
- Abdominalescontrol
% inhibición =
La actividad inhibitoria se expresó como la mitad de la
concentración inhibitoria máxima (IC50), que es una medida de la
eficacia de un compuesto para inhibir la función biológica o
bioquímica.
α-ensayo de inhibición de glucosidasa
una mezcla de 50 mL extracto o solución de acarbosa y 100 mL de
tampón fosfato 0,1 M (pH 6,9) que contiene α-La solución de glucosidasa
(1,0 U/ml) se incubó en placas de 96 pocillos a 25 ◦C durante 10 min.
Después de la preincubación, 50ml de p-nitrofenil- 5 mMαSe añadió
solución de -D-glucopiranósido en tampón de fosfato 0,1 M (pH 6,9) a cada
pocillo a intervalos de tiempo. Las mezclas de reacción se incubaron a 25◦C
durante 5 min. Antes y después de la incubación, se registró la absorbancia
a 405 nm mediante un lector de microplacas (VMax, Molecular Device Co.,
Sunnyvale, California, EE. UU.) y se comparó con la del control que tenía 50
mL solución tampón en lugar del extracto. Elα-La actividad inhibidora de la
glucosidasa se expresó como porcentaje de inhibición y se calculó de la
siguiente manera:
Ensayo de fenoles totales
( )
Los fenoles totales se determinaron siguiendo el procedimiento
modificado de Shetty y otros (1995). Brevemente, 1 mL de extracto fue
- Abdominalescontrol − -Abdominalesmuestra × 100
- Abdominalescontrol
% inhibición =
H98 REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS—vol. 75, núm. 3, 2010
H:
Salud,
Nutrición
y
Comida
A. nudoso --inhibición de la glucosidasa. . .
Los resultados inhibitorios se expresaron como la mitad de la
concentración inhibitoria máxima (IC50), que es una medida de la
eficacia de un compuesto para inhibir la función biológica o
bioquímica.
polisacáridos y desnaturaliza las proteínas de la pared celular permitiendo la
extracción de fenoles atrapados en la matriz de la pared celular.
Actividad antioxidante por ensayo de
eliminación de radicales DPPH
análisis estadístico Todas las muestras analizadas tenían actividades antioxidantes altas
similares (Figura 4). Sin embargo, extraer a 20◦C tuvo una mayor actividad
de eliminación de radicales libres que los de 40, 60 y 80 ◦C. Estos resultados
sugieren que otros componentes no fenólicos de A. nudoso fueron
extraídos e interfirieron con el ensayo DPPH.
Estudios previos con calabaza y frijoles han demostrado que la
extracción de agua a 100 ◦El C aumenta el contenido fenólico pero reduce
en algunas ocasiones la actividad depuradora de radicales libres (Kwon y
otros 2007). Además, los estudios en algas pardas extraídas en agua en un
rango de 40 a 60◦C, han demostrado que la actividad de eliminación de
radicales libres de DPPH no se correlacionó bien con el contenido fenólico
total (Heo y otros 2005).
Un estudio anterior mostró que A. nudoso también contiene carotenoides no
fenólicos, como la fucoxantina, que tiene una fuerte actividad antioxidante (Yan y
otros 1999), por lo que es probable que el perfil de los antioxidantes fenólicos y
no fenólicos individuales, como los carotenoides o las xantofilas en los extractos,
también pueda tener influencia.
Todos los experimentos se realizaron dos veces y el análisis de cada
experimento se realizó por triplicado. Se extrajeron dos lotes de
muestras de la misma cosecha. Medias, desviaciones estándar, el
grado de significancia (pag < 0.05: análisis de varianza de una vía
[ANOVA] y t-test) y correlación (r—coeficiente de correlación de
Pearson) se determinaron utilizando Microsoft Excel XP. CI50 los
valores se calcularon utilizando ED50plus vol.1 desarrollado por
Vargas (http://www.softlookup.com/display.asp?id=2972, consultado
en mayo de 2009).
Resultados y discusión
Contenido fenólico total
La selección inicial de las diferentes algas mostró que A. nudoso
tuvo el mayor contenido de fenoles totales (6,8 mg/g de peso seco) y
los de los otros 3 oscilaron entre 1,3 y 1,6 mg/g de peso seco
(Figura 1). Por lo tanto, la evaluación adicional se centró en atribuir la actividad antioxidante además de los fenoles.
A. nudoso.
La extracción del contenido fenólico soluble total se determinó a diferentes
niveles de agua. Los 50 g de algas marinas frescas a 100 ml tuvieron el
rendimiento más bajo (3,5 mg/g de peso húmedo), mientras que los de 50 g a
400, 800 y 1000 ml tuvieron rendimientos más altos en el rango de 4,5 a 4,1 mg/g
de peso húmedo, 50 g /400 mL siendo el más alto (Figura 2). Para una extracción
eficiente, se requirió una cantidad suficiente de medio de extracción como se ve
con 400 a 1000 mL. Entre las proporciones de extracción, se encontró que 50 g a
400 ml era la más efectiva en la extracción de compuestos fenólicos solubles en
un volumen mínimo y se usó como una proporción de extracción óptima.
Los resultados del efecto de la temperatura en la extracción de compuestos
fenólicos indican una correlación entre las temperaturas de extracción y el
contenido fenólico total (r = 0,92) (Figura 3). Extracción a 80◦C produjo el
contenido fenólico total más alto, 4,2 mg/g de algas marinas frescas, mientras
que el 20 ◦C produjo el más bajo (3,2 mg/g).
Los resultados anteriores confirman informes anteriores que
afirman que una temperatura más alta resultó en la extracción de
mayores cantidades de fenoles de A. nudoso en etanol (Zhang y otros
2007), de cohosh negro en metanol al 60% (Mukhopadhyay y otros
2006) y de camote en etanol al 20% (Padda y Picha 2007). Esto podría
deberse al hecho de que una temperatura más alta debilita el
6
5
4
3
2
1
0
50 g/ 100 ml 50 g/ 200 ml 50 g/ 400 ml 50 g/ 800 ml 50 g/ 1000 ml
Temperatura de extracción (oC)
Figura 2 --- Efecto de la relación de extracción en el contenido
fenólico total de Ascophyllum nudoso (cosecha a finales de junio
de 2008).
5
4.5
4
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
r = 0,92 C
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
B B
a
20 40
Temperatura de extracción (oC)
60 80
cerámica
virgatum
ulva
lactuca
Ascófilo
nodoso
Saccharina
latissima
Figura 3 --- Efecto de la temperatura de extracción sobre el
contenido de fenoles totales en base al peso fresco de
Ascophyllum nudoso (cosecha en septiembre de 2008) (a, b, c: los
valores con letras diferentes son significativamente diferentes,
pag < 0,05).
Figura 1 --- Contenido fenólico total de cuatro algas marinas diferentes
(recolectadas a principios de junio de 2008).
vol. 75, núm. 3, 2010—REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS H99
mg/g
Peso
seco
mg/g
Peso
fresco
mg/g
Peso
fresco
H:
Salud,
Nutrición
y
Comida
A. nudoso --inhibición de la glucosidasa. . .
α-ensayo de inhibición de glucosidasa Además, nuestros resultados sugieren que esta actividad inhibitoria se
debe a los compuestos fenólicos presentes en A. nudoso aunque en este
estudio no se evaluó la especificidad del efecto inhibitorio. Es importante
señalar que la acarbosa es un fármaco químico diseñado específicamente
paraα-inhibición de la glucosidasa y tiene varios efectos secundarios
(Bischoff y otros 1985).
α-Se observó actividad inhibidora de la glucosidasa en todas las muestras
analizadas (Figura 5). Más específicamente, elα-actividad inhibidora de la
glucosidasa (IC50) aumentó a medida que aumentó la temperatura de extracción.
La actividad inhibidora más baja se observó con 20◦Extracto C (IC50
208 mgramo fresco A. nudoso) mientras que el 80 ◦El extracto C tuvo
el más alto (IC50 55 mgramo fresco A. nudoso) (Figura 4). El aumento
de α-La actividad inhibidora de la glucosidasa se correlacionó bien con
el contenido fenólico total (r = −0,99) (Figura 5). Además, el CI50 de A.
nudoso extraer a 80 ◦do (0,24 mg fenólicos) fue menor en
comparación con el compuesto acarbosa, un fármaco para la diabetes
tipo 2 (0,37 mg) (Figura 6).
Informes anteriores han demostrado que los fitoquímicos fenólicos de
fuentes vegetales podrían ser efectivos α-inhibidores de la glucosidasa
(Apostolidis y otros 2006; Kwon y otros 2006). Además, una fracción
purificada de extracto etanólico al 50% deA. nudoso tenido α-valores de
actividad inhibidora de la glucosidasa (IC50 22 mgramo A. nudoso) que se
correlacionó con el contenido fenólico del extracto (Zhang y otros 2007).
Los resultados anteriores sugieren que incluso la fracción soluble en agua
deA. nudoso tiene potencial para el control de la hiperglucemia y puede
incorporarse fácilmente a las matrices alimentarias.
α-ensayo de inhibición de amilasa
α-Se observó actividad inhibidora de la amilasa en todas las muestras
analizadas. CI50 aumentó a medida que aumentó la temperatura de
extracción, de manera similar a α-Actividad inhibidora de la glucosidasa. La
actividad más baja se observó con el extracto a 20◦C (IC50 2088 mgramo
fresco A. nudoso) mientras se extrae a 80 ◦C tenía IC50 311 mgramo fresco
A. nudoso (Figura 7). Similar a α-actividad inhibidora de la glucosidasa, αLa
actividad inhibidora de la -amilasa aumentó con un aumento en el
contenido fenólico total (r = −0,88), aunque en este estudio no se evaluó la
especificidad del efecto inhibitorio. el CI50 de A. nudoso extracto de agua a
80 ◦do (1,34 mg de fenoles) es superior a la de la acarbosa (0,68 mg) (Figura
8). Esto sugiere que elα-Actividad inhibidora de la amilasa de A. nudoso
parece ser mucho menor que α-Actividad inhibidora de la glucosidasa.
Teixeira y otros (2007) informaron el potencial del extracto de
acetona de algas pardas (Spatoglossum schroederi) por
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
6,25 mg/ml
12,5 mg/ml
25 mg/ml
a
0.8
CI50 (µg Acarbosa)
IC50 (µg Fenólicos)
0,68
0.7
0,61
a 0.6
a a 0.52
0.5
acarbosa
B 0.4
0.377
0.24
C 0.3
D C C
mi mi 0.2
mi
0.1
20 40
Temperatura de extracción (oC)
60 80 0
20 40
Temperatura de extracción (oC)
60 80
Figura 4 --- Efecto de la temperatura de extracción en la actividad
de eliminación de radicales libres de 1, 1-difenil-2-picrilhidrazilo
(DPPH) de Ascophyllum nudoso a diferentes diluciones del
extracto. El extracto resultante (25 mg/mL) se diluyó en serie para
dar 12,5 y 6,25 mg/mL y estudiar la respuesta dependiente de la
dosis (a, b, c, d, e: los valores con letras diferentes son
significativamente diferentes,pag < 0,05).
Figura 6 --- Comparación de acarbosa y Ascophyllum nodosum α
-glucosidasa IC50 valores a diferentes temperaturas de extracción.
(Para la comparación con el compuesto de fármaco único
acarbosa, elegimos usar la base fenólica IC50
valor de A. nudoso, para que la comparación sea apropiada.)
r = - 0,99 Figura 5 --- Relación entre α-inhibición de
la glucosidasa (IC50) de A. nudoso (mg peso
fresco) y contenido de fenoles totales (mg/
g) (a, b, c, d, e, f: los valores con letras
diferentes son significativamente
diferentes, pag < 0,05).
250 5
4.5
4
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
CI50 (µg FW)
PT mg/g C
D
200 B B
a
mi mi
150
100
50 F
0 0
20 40
Temperatura de extracción (oC)
60 80
H100 REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS—vol. 75, núm. 3, 2010
CI
50
µg
Peso
fresco
%
inhibición
CI
50
µg
Peso
fresco
PT
mg/g
Peso
Fresco
H:
Salud,
Nutrición
y
Comida
A. nudoso --inhibición de la glucosidasa. . .
2500 5 Figura 7 --- Relación entre α-inhibición
de la amilasa (IC50) de UNA.
nodoso (mg peso fresco) y contenido de
fenoles totales (mg/g) (a, b, c, d, e, f, g: los
valores con letras diferentes son
significativamente diferentes, pag < 0,05).
r = - 0,88
D
CI50 (µg FW)
PT mg/g
F 4.5
C
2000 B 4
B
a 3.5
1500 3
mi
2.5
1000 2
1.5
500 1
gramo
0.5
0 0
20 40
Temperatura de extracción (oC)
60 80
9 8.53 Figura 8 --- Comparación de acarbosa y
Ascophyllum nodosum α-amilasa CI50
valores a diferentes temperaturas de
extracción. (Para la comparación con el
compuesto de fármaco único acarbosa,
elegimos usar la base fenólica IC50 valor de
A. nudoso, para que la comparación sea
apropiada.)
CI50 (µg Acarbosa)
CI50 (ug fenólicos)
8
7 6.81
6 5.41
5
4
3
2
1.34
acarbosa
0,68
1
0
20 40
Temperatura de extracción (oC)
60 80
α-inhibición de la amilasa (IC50 580 mg/mL). Informes anteriores han indicado
que los fitoquímicos fenólicos derivados de plantas tienen menorα- actividad
inhibidora de la amilasa y una actividad de inhibición más fuerte contra α
-glucosidasa (Apostolidis y otros 2006; Kwon y otros 2006). Los principales
efectos secundarios de los medicamentos para el control de la diabetes tipo 2,
como la acarbosa, son distensión abdominal, flatulencia, meteorismo y
posiblemente diarrea (Bischoff y otros 1985). Se ha sugerido que tales efectos
adversos podrían ser causados por la inhibición excesiva de la función
pancreática.α-amilasa que resulta en la fermentación bacteriana anormal de
carbohidratos no digeridos en el colon. (Bischoff y otros 1985; Horii y otros 1987).
En nuestro estudio, aunque observamos una menorα-actividad inhibitoria de la
amilasa que la acarbosa, no podemos descartar posibles efectos secundarios. Sin
embargo, cuanto más bajoalfa in vitroLa actividad inhibidora de la -amilasa
sugiere que la extensión de los efectos secundarios será menor que la de la
acarbosa.
que contenía la mayor cantidad de fitoquímicos fenólicos. Además,A.
nudoso los extractos de agua también podrían proporcionar un alivio
antioxidante contra el estrés oxidativo inducido por la glucosa alta. Fuerteα
-inhibición de la glucosidasa y leve α-inhibición de la amilasa, podría ofrecer
potencialmente una terapia complementaria eficaz para la hiperglucemia
posprandial con menos efectos secundarios. Este estudio proporciona una
fuertein vitro evidencia de potencial α-inhibición de la glucosidasa de A.
nudoso que potencialmente podría conducir a la prevención de la diabetes
tipo 2 y necesita una mayor caracterización y en vivo estudios clínicos.
Expresiones de gratitud
Contribución nr 5212 de la Facultad de Medio Ambiente y Ciencias de
la Vida, Univ. de Rhode Island con el apoyo de la Estación
Experimental Agrícola de Rhode Island.
Referencias
Conclusiones
T
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Disponible en: www.cdc.gov/diabetes/statistics/. Consultado el 4 de abril de 2009.
El examen inicial mostró que las algas pardas A. nudoso El extracto de
agua tiene el contenido fenólico total más alto entre las algas marinas
recolectadas localmente estudiadas. A. nudoso Los extractos de agua
tienen un buen potencial inhibidor de las enzimas que metabolizan los
carbohidratos, especialmente α-glucosidasa. Estas actividades inhibidoras
aumentaron con el contenido fenólico y el mejor potencial inhibidor se
observó con el extracto acuoso a 80ºC.◦C,
vol. 75, núm. 3, 2010—REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS H101
CI
50
µg
Peso
fresco
CI
50
µg
Peso
fresco
PT
mg/g
Peso
Fresco
H:
Salud,
Nutrición
y
Comida
A. nudoso --inhibición de la glucosidasa. . .
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H102 REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS—vol. 75, núm. 3, 2010
H:
Salud,
Nutrición
y
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  • 1. JFS H: Salud, Nutrición y Alimentación in vitro Potencial de Ascophyllum nudoso Mediado por antioxidantes fenólicos α-Glucosidasa y α -Inhibición de la amilasa EAPOSTOLIDIS Y CM LEE.UU. ABSTRACTO: Ascophyllum nudoso es un alga parda que crece abundantemente en la región costera del Nordeste. En este estudio, el potencial deA. nudoso para el control de la diabetes tipo 2 a través de antioxidantes α-glucosidasa y αSe investigó la inhibición de -amilasa. Después de la selección inicial de 4 algas recolectadas localmente,A. nudoso fue elegido por su mayor contenido fenólico y fue sometido a extracción con agua. Entre las proporciones de extracción de 50 g a 100 a 1000 ml a temperatura ambiente, 50 g/400 ml produjeron el contenido fenólico más alto de 4,5 mg/g de peso húmedo. Para la evaluación de la temperatura de extracción de 20 a 80◦C, se eligió 50 g/400 mL como cantidad mínima de extractante. Entre las temperaturas estudiadas, la extracción a 80◦C dio como resultado los contenidos fenólicos totales más altos (4,2 mg/g de peso húmedo). Todos los extractos tenían niveles similares de actividad antioxidante en el rango de 60% a 70% en términos de actividad de eliminación de radicales libres de 1, 1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH). los 80◦El extracto C tuvo la mayorα-glucosidasa y α -actividad inhibidora de la amilasa con IC50 de 0,24 y 1,34mg fenoles, respectivamente, en comparación con el IC50 de acarbosa, inhibidor de referencia, siendo 0,37 y 0,68mgramo. Los resultados muestran que frescoA. nudoso tiene fuerteα-glucosidasa y leveα-actividades inhibidoras de la amilasa que se correlacionaron con los contenidos fenólicos. Este estudio sugiere un potencial nutracéutico deA. nudoso basado en actividades fitoquímicas antioxidantes y antihiperglucemiantes. Palabras clave: antioxidantes,Ascophyllum nudoso, α-inhibición de la glucosidasa, fitoquímicos fenólicos, diabetes tipo 2 Introducción El principal inconveniente de la acarbosa son sus efectos secundarios, como distensión abdominal, flatulencia, meteorismo y posiblemente diarrea (Bischoff y otros 1985). Se ha sugerido que tales efectos adversos podrían ser causados por la inhibición excesiva de la función pancreática. α-amilasa que resulta en la fermentación bacteriana anormal de carbohidratos no digeridos en el colon (Bischoff y otros 1985; Horii y otros 1987). Ciertos extractos de plantas, como el arándano rojo, la rodiola, el orégano y el romero, demostraron tener un efecto inhibidor más bajo contraα-actividad de amilasa y más fuerte α-tiene un efecto inhibidor de la glucosidasa y, por lo tanto, puede usarse potencialmente como una terapia eficaz para la hiperglucemia posprandial con efectos secundarios mínimos (Horii y otros 1987; Apostolidis y otros 2006; Kwon y otros 2006). Los datos estadísticos recientes muestran que la diabetes tipo 2 es un desafío para la salud mundial. Los estudios indican que la prevalencia total de diabetes solo en Estados Unidos es de 20,8 millones (casi el 7% de la población total), cuando en 1980 y 2003 esta cifra era de 5,8 y 13,8 millones, respectivamente (Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades 2005). El manejo de esta enfermedad requerirá estrategias multipropósito, incluida la quimioprevención dietética como parte de la solución. Ascophyllum nudoso es una especie de alga parda intermareal rocosa dominante que pertenece a la clase Phaeophyceae. Se encuentra comúnmente en la costa noreste de América del Norte y la costa noroeste de Europa (Taylor 1962) y se usa ampliamente como alimento, cosmético, fertilizante y recientemente como ingrediente alimentario funcional (Chan y otros 2006). Durante los últimos 3 años, los desembarques de algas marinas en el Golfo de Maine aumentaron de 5 millones de libras en 2005 a 7 millones de libras en 2006 y 2007, con un precio constante (alrededor de 4¢/Lb) durante los últimos 10 años (Maine Seaweed Council, comunicación personal) A. nudoso contiene fucoxantina (Marais y Joseleau 2001), un carotenoide que tiene potencial antiobesidad (Maeda y otros 2006) y antioxidante (Yan y otros 1999), florotaninos Dla diabetes mellitus es una enfermedad crónica importante causada por el equilibrio inadecuado de la homeostasis de la glucosa (Rosetti y otros 1990). Actualmente se conocen dos tipos de diabetes mellitus, uno es la diabetes mellitus insulinodependiente (tipo 1) y el otro es la diabetes mellitus no insulinodependiente (tipo 2). Si bien la diabetes tipo 1 se puede controlar de manera eficaz mediante la administración de insulina, es difícil encontrar un tratamiento eficaz para la diabetes tipo 2, debido a su naturaleza no insulinodependiente, que consiste en más del 90 % de la población diabética. La hiperglucemia, una condición caracterizada por un aumento posprandial anormal en el nivel de glucosa en sangre, se ha relacionado con la aparición de diabetes tipo 2 y se ha asociado con disfunción oxidativa e insuficiencia de varios órganos, especialmente los ojos, los riñones, los nervios, el corazón y los vasos sanguíneos. , y se ha demostrado que también está relacionado con la hipertensión (Haffner 1998). La hidrólisis de los carbohidratos de la dieta, como el almidón, es la principal fuente de glucosa en la sangre. Esta hidrólisis se lleva a cabo por un grupo de enzimas hidrolíticas que incluye pancreáticasα-amilasa e intestinal α-glucosidasas (Harris y Zimmer 1992; Bischoff 1994). Se cree que la inhibición de estas enzimas puede ser una estrategia importante para el control de la diabetes tipo 2 (Krentz y Bailey 2005), en la queαLos inhibidores de la glucosidasa podrían retrasar la rápida utilización de los carbohidratos de la dieta y suprimir la hiperglucemia posprandial (Watanabe y otros 1997). Actualmente, se ha demostrado que los fármacos terapéuticos, como la acarbosa, reducen eficazmente la absorción intestinal de azúcares en humanos (Jenkins y otros 1981; Cheng y Fantus 2005). MS 20090846 Presentado el 1 de septiembre de 2009, aceptado el 10 de enero de 2010. Los autores pertenecen al Departamento de Nutrición y Ciencias de la Alimentación, Centro de Investigación de Ciencias de la Alimentación y Nutrición, Univ. de Rhode Island, Kingston, RI 02881, EE. UU. Consultas directas al autor Apostolidis (E-mail: emanos@mail.uri.edu ). © C 2010 Instituto de Tecnólogos de Alimentos© doi: 10.1111/j.1750-3841.2010.01544.x R vol. 75, núm. 3, 2010—REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS H97 Prohibida la reproducción posterior sin autorización H: Salud, Nutrición y Comida Traducido del inglés al español - www.onlinedoctranslator.com
  • 2. A. nudoso --inhibición de la glucosidasa. . . (Ragan y Glombitza 1986), fenoles de gran peso molecular que tienen potencial antioxidante (Yan y otros 1996) y antidiabético (Zhang y otros 2007), y fenoles simples, como catequinas (Yoshie y otros 2000), ácido hidroxibenzoico, ácido cumárico, ácido cinámico y ácido cafeico (Dumay y otros 2004), que tienen potencial antioxidante y antidiabético (Apostolidis y otros 2006; Kwon y otros 2006). Estudios previos han determinado que los extractos solventes de A. nudoso tienen un alto contenido fenólico y que este contenido fenólico se correlaciona con la reducción de los niveles de glucosa en sangre en ratas (Zhang y otros 2007). Los solventes utilizados en este estudio fueron etanol, butanol, metanol y ácido acético. Sin embargo, para los sistemas alimentarios y la aplicación de alimentos funcionales, sería más deseable un sistema de extracción a base de agua debido a la ausencia de residuos de disolventes. Los objetivos de nuestro estudio fueron inicialmente identificar un alga marina local con el contenido fenólico más alto y determinar las condiciones óptimas de extracción de agua en términos de relación alga/ agua y temperatura de extracción en contenido fenólico y α-amilasa y α -inhibición de la glucosidasa. Este estudio ayudaría a orientar el uso deA. nudoso extracto acuoso como remedio natural para el tratamiento de la diabetes tipo 2. se transfirió a un tubo de ensayo y se mezcló con 1 ml de etanol al 95 % y 5 ml de agua destilada. A cada muestra se le añadieron 0,5 mL de reactivo de Folin-Ciocalteu al 50 % (v/v) y se mezcló en vortex. Después de 5 min, 1 ml de Na al 5 %2CO3 Se añadió a la mezcla de reacción y se dejó reposar durante 60 min. La absorbancia se leyó a 725 nm utilizando un espectrofotómetro Perkin-Elmer Lambda 4b (Waltham, MA, EE. UU.). Los valores de absorbancia se convirtieron a fenoles totales y se expresaron en mg de ácido gálico/g de peso fresco de muestra (FW). La curva estándar se estableció usando varias concentraciones de ácido gálico en etanol. Actividad antioxidante por ensayo de inhibición de radicales 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH) La actividad antioxidante por inhibición de la captación de radicales libres de DPPH se determinó siguiendo el procedimiento modificado de Shetty y otros (1995). Hasta 0,8 ml 60mM DPPH en etanol, 200 mL (25 mg fresco A. nudoso) de cada extracto, se monitoreó la disminución de la absorbancia a 517 nm, utilizando un espectrofotómetro Perkin-Elmer Lambda 4b (Waltham) hasta obtener una lectura constante. Las lecturas se compararon con los controles, que contenían 200mL de agua en lugar del extracto. El porcentaje de inhibición se calculó por Materiales y métodos F ( ) − Abdominalesmuestra × 100 refresca A. nudoso, Ceramium virgatum, Ulva lactuca, y Saccharina latissima fueron recolectados de la bahía de Narragansett 3 veces (principios de junio de 2008, fines de junio de 2008 y septiembre de 2008). α-Amilasa (pancreática porcina, EC 3.2.1.1), α-glucosidasa (levadura, EC 3.2.1.20) y acarbosa (levadura, EC 260.030.7) se adquirieron de Sigma Chemical Co. (St. Louis, Missouri, EE. UU.). La acarbosa es un conocidoα -glucosidasa y α-inhibidor de la amilasa utilizado actualmente para el tratamiento de la diabetes tipo 2. A menos que se especifique lo contrario, todos los productos químicos también se compraron a Sigma Chemical Co. Abdominalescontrol Abdominalescontrol % inhibición = α-ensayo de inhibición de amilasa Una mezcla de 500mL extracto o acarbosa y 500mL Tampón de fosfato de sodio 0,02 M (pH 6,9 con cloruro de sodio 0,006 M) que contieneα-solución de amilasa (13U/mL) se incubaron a 25◦C durante 10 min. Después de la preincubación, 500mSe añadieron l de solución de almidón soluble al 1% en tampón de fosfato de sodio 0,02 M (pH 6,9 con NaCl 0,006 M) a cada tubo a intervalos de tiempo. A continuación, las mezclas de reacción se incubaron a 25◦C durante 10 min seguido de la adición de 1 ml de reactivo de color de ácido dinitrosalicílico. Luego, los tubos de ensayo se colocaron en un baño de agua hirviendo durante 5 minutos para detener la reacción y se enfriaron a temperatura ambiente. Luego, la mezcla de reacción se diluyó con 10 ml de agua destilada y se leyó la absorbancia a 540 nm. ( ) preparación de la muestra En la proyección inicial, A. nodosum, C. virgatum, U. lactuca, y S. latissima (cosechadas a principios de junio de 2008) se secaron durante la noche a 100 ◦C en horno. A continuación, las algas secas se trituraron durante 2 min a alta velocidad utilizando un Stephan UM5 (Alemania). El polvo seco resultante (5 g) se extrajo con 100 mL de agua a 90◦C utilizando un condensador de reflujo durante 30 min. Se recolectó el sobrenadante y se centrifugó a 7200× gramo utilizando una microcentrífuga Fisher Scientific MicroV (Pittsburgh, Pa., EE. UU.) para determinar el contenido fenólico total. Para el siguiente paso, decidimos usar un método de extracción más simple usando agua fresca A. nudoso, por su mayor contenido fenólico entre las algas analizadas. Los extractos se prepararon a partir de 50 g deA. nudoso (cosechado a finales de junio de 2008) con 100, 200, 400, 800 y 1000 mL de agua a temperatura ambiente mezclando durante 1 min en una licuadora Osterizer de 1,25 L. El producto mezclado se filtró a través de un tamiz nr 25 (710mm) con 15 kg de peso de presión encima durante 5 min y el filtrado se centrifugó a 7200 × gramo y luego se utiliza para determinar la relación de extracción óptima. Para estudiar el efecto de la temperatura media de extracción, 50 g de agua frescaA. nudoso (cosecha en septiembre de 2008) se extrajo con 400 mL de agua a diferentes temperaturas (20, 40, 60 y 80 ◦C) batiendo durante 1 min en una licuadora Osterizer. El filtrado se obtuvo como se describió anteriormente. Después de la extracción, todas las muestras se almacenaron en un -18 ◦C congelador y todos los experimentos se realizaron dentro de las 3 semanas. - Abdominalescontrol − -Abdominalesmuestra × 100 - Abdominalescontrol % inhibición = La actividad inhibitoria se expresó como la mitad de la concentración inhibitoria máxima (IC50), que es una medida de la eficacia de un compuesto para inhibir la función biológica o bioquímica. α-ensayo de inhibición de glucosidasa una mezcla de 50 mL extracto o solución de acarbosa y 100 mL de tampón fosfato 0,1 M (pH 6,9) que contiene α-La solución de glucosidasa (1,0 U/ml) se incubó en placas de 96 pocillos a 25 ◦C durante 10 min. Después de la preincubación, 50ml de p-nitrofenil- 5 mMαSe añadió solución de -D-glucopiranósido en tampón de fosfato 0,1 M (pH 6,9) a cada pocillo a intervalos de tiempo. Las mezclas de reacción se incubaron a 25◦C durante 5 min. Antes y después de la incubación, se registró la absorbancia a 405 nm mediante un lector de microplacas (VMax, Molecular Device Co., Sunnyvale, California, EE. UU.) y se comparó con la del control que tenía 50 mL solución tampón en lugar del extracto. Elα-La actividad inhibidora de la glucosidasa se expresó como porcentaje de inhibición y se calculó de la siguiente manera: Ensayo de fenoles totales ( ) Los fenoles totales se determinaron siguiendo el procedimiento modificado de Shetty y otros (1995). Brevemente, 1 mL de extracto fue - Abdominalescontrol − -Abdominalesmuestra × 100 - Abdominalescontrol % inhibición = H98 REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS—vol. 75, núm. 3, 2010 H: Salud, Nutrición y Comida
  • 3. A. nudoso --inhibición de la glucosidasa. . . Los resultados inhibitorios se expresaron como la mitad de la concentración inhibitoria máxima (IC50), que es una medida de la eficacia de un compuesto para inhibir la función biológica o bioquímica. polisacáridos y desnaturaliza las proteínas de la pared celular permitiendo la extracción de fenoles atrapados en la matriz de la pared celular. Actividad antioxidante por ensayo de eliminación de radicales DPPH análisis estadístico Todas las muestras analizadas tenían actividades antioxidantes altas similares (Figura 4). Sin embargo, extraer a 20◦C tuvo una mayor actividad de eliminación de radicales libres que los de 40, 60 y 80 ◦C. Estos resultados sugieren que otros componentes no fenólicos de A. nudoso fueron extraídos e interfirieron con el ensayo DPPH. Estudios previos con calabaza y frijoles han demostrado que la extracción de agua a 100 ◦El C aumenta el contenido fenólico pero reduce en algunas ocasiones la actividad depuradora de radicales libres (Kwon y otros 2007). Además, los estudios en algas pardas extraídas en agua en un rango de 40 a 60◦C, han demostrado que la actividad de eliminación de radicales libres de DPPH no se correlacionó bien con el contenido fenólico total (Heo y otros 2005). Un estudio anterior mostró que A. nudoso también contiene carotenoides no fenólicos, como la fucoxantina, que tiene una fuerte actividad antioxidante (Yan y otros 1999), por lo que es probable que el perfil de los antioxidantes fenólicos y no fenólicos individuales, como los carotenoides o las xantofilas en los extractos, también pueda tener influencia. Todos los experimentos se realizaron dos veces y el análisis de cada experimento se realizó por triplicado. Se extrajeron dos lotes de muestras de la misma cosecha. Medias, desviaciones estándar, el grado de significancia (pag < 0.05: análisis de varianza de una vía [ANOVA] y t-test) y correlación (r—coeficiente de correlación de Pearson) se determinaron utilizando Microsoft Excel XP. CI50 los valores se calcularon utilizando ED50plus vol.1 desarrollado por Vargas (http://www.softlookup.com/display.asp?id=2972, consultado en mayo de 2009). Resultados y discusión Contenido fenólico total La selección inicial de las diferentes algas mostró que A. nudoso tuvo el mayor contenido de fenoles totales (6,8 mg/g de peso seco) y los de los otros 3 oscilaron entre 1,3 y 1,6 mg/g de peso seco (Figura 1). Por lo tanto, la evaluación adicional se centró en atribuir la actividad antioxidante además de los fenoles. A. nudoso. La extracción del contenido fenólico soluble total se determinó a diferentes niveles de agua. Los 50 g de algas marinas frescas a 100 ml tuvieron el rendimiento más bajo (3,5 mg/g de peso húmedo), mientras que los de 50 g a 400, 800 y 1000 ml tuvieron rendimientos más altos en el rango de 4,5 a 4,1 mg/g de peso húmedo, 50 g /400 mL siendo el más alto (Figura 2). Para una extracción eficiente, se requirió una cantidad suficiente de medio de extracción como se ve con 400 a 1000 mL. Entre las proporciones de extracción, se encontró que 50 g a 400 ml era la más efectiva en la extracción de compuestos fenólicos solubles en un volumen mínimo y se usó como una proporción de extracción óptima. Los resultados del efecto de la temperatura en la extracción de compuestos fenólicos indican una correlación entre las temperaturas de extracción y el contenido fenólico total (r = 0,92) (Figura 3). Extracción a 80◦C produjo el contenido fenólico total más alto, 4,2 mg/g de algas marinas frescas, mientras que el 20 ◦C produjo el más bajo (3,2 mg/g). Los resultados anteriores confirman informes anteriores que afirman que una temperatura más alta resultó en la extracción de mayores cantidades de fenoles de A. nudoso en etanol (Zhang y otros 2007), de cohosh negro en metanol al 60% (Mukhopadhyay y otros 2006) y de camote en etanol al 20% (Padda y Picha 2007). Esto podría deberse al hecho de que una temperatura más alta debilita el 6 5 4 3 2 1 0 50 g/ 100 ml 50 g/ 200 ml 50 g/ 400 ml 50 g/ 800 ml 50 g/ 1000 ml Temperatura de extracción (oC) Figura 2 --- Efecto de la relación de extracción en el contenido fenólico total de Ascophyllum nudoso (cosecha a finales de junio de 2008). 5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 r = 0,92 C 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 B B a 20 40 Temperatura de extracción (oC) 60 80 cerámica virgatum ulva lactuca Ascófilo nodoso Saccharina latissima Figura 3 --- Efecto de la temperatura de extracción sobre el contenido de fenoles totales en base al peso fresco de Ascophyllum nudoso (cosecha en septiembre de 2008) (a, b, c: los valores con letras diferentes son significativamente diferentes, pag < 0,05). Figura 1 --- Contenido fenólico total de cuatro algas marinas diferentes (recolectadas a principios de junio de 2008). vol. 75, núm. 3, 2010—REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS H99 mg/g Peso seco mg/g Peso fresco mg/g Peso fresco H: Salud, Nutrición y Comida
  • 4. A. nudoso --inhibición de la glucosidasa. . . α-ensayo de inhibición de glucosidasa Además, nuestros resultados sugieren que esta actividad inhibitoria se debe a los compuestos fenólicos presentes en A. nudoso aunque en este estudio no se evaluó la especificidad del efecto inhibitorio. Es importante señalar que la acarbosa es un fármaco químico diseñado específicamente paraα-inhibición de la glucosidasa y tiene varios efectos secundarios (Bischoff y otros 1985). α-Se observó actividad inhibidora de la glucosidasa en todas las muestras analizadas (Figura 5). Más específicamente, elα-actividad inhibidora de la glucosidasa (IC50) aumentó a medida que aumentó la temperatura de extracción. La actividad inhibidora más baja se observó con 20◦Extracto C (IC50 208 mgramo fresco A. nudoso) mientras que el 80 ◦El extracto C tuvo el más alto (IC50 55 mgramo fresco A. nudoso) (Figura 4). El aumento de α-La actividad inhibidora de la glucosidasa se correlacionó bien con el contenido fenólico total (r = −0,99) (Figura 5). Además, el CI50 de A. nudoso extraer a 80 ◦do (0,24 mg fenólicos) fue menor en comparación con el compuesto acarbosa, un fármaco para la diabetes tipo 2 (0,37 mg) (Figura 6). Informes anteriores han demostrado que los fitoquímicos fenólicos de fuentes vegetales podrían ser efectivos α-inhibidores de la glucosidasa (Apostolidis y otros 2006; Kwon y otros 2006). Además, una fracción purificada de extracto etanólico al 50% deA. nudoso tenido α-valores de actividad inhibidora de la glucosidasa (IC50 22 mgramo A. nudoso) que se correlacionó con el contenido fenólico del extracto (Zhang y otros 2007). Los resultados anteriores sugieren que incluso la fracción soluble en agua deA. nudoso tiene potencial para el control de la hiperglucemia y puede incorporarse fácilmente a las matrices alimentarias. α-ensayo de inhibición de amilasa α-Se observó actividad inhibidora de la amilasa en todas las muestras analizadas. CI50 aumentó a medida que aumentó la temperatura de extracción, de manera similar a α-Actividad inhibidora de la glucosidasa. La actividad más baja se observó con el extracto a 20◦C (IC50 2088 mgramo fresco A. nudoso) mientras se extrae a 80 ◦C tenía IC50 311 mgramo fresco A. nudoso (Figura 7). Similar a α-actividad inhibidora de la glucosidasa, αLa actividad inhibidora de la -amilasa aumentó con un aumento en el contenido fenólico total (r = −0,88), aunque en este estudio no se evaluó la especificidad del efecto inhibitorio. el CI50 de A. nudoso extracto de agua a 80 ◦do (1,34 mg de fenoles) es superior a la de la acarbosa (0,68 mg) (Figura 8). Esto sugiere que elα-Actividad inhibidora de la amilasa de A. nudoso parece ser mucho menor que α-Actividad inhibidora de la glucosidasa. Teixeira y otros (2007) informaron el potencial del extracto de acetona de algas pardas (Spatoglossum schroederi) por 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 6,25 mg/ml 12,5 mg/ml 25 mg/ml a 0.8 CI50 (µg Acarbosa) IC50 (µg Fenólicos) 0,68 0.7 0,61 a 0.6 a a 0.52 0.5 acarbosa B 0.4 0.377 0.24 C 0.3 D C C mi mi 0.2 mi 0.1 20 40 Temperatura de extracción (oC) 60 80 0 20 40 Temperatura de extracción (oC) 60 80 Figura 4 --- Efecto de la temperatura de extracción en la actividad de eliminación de radicales libres de 1, 1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH) de Ascophyllum nudoso a diferentes diluciones del extracto. El extracto resultante (25 mg/mL) se diluyó en serie para dar 12,5 y 6,25 mg/mL y estudiar la respuesta dependiente de la dosis (a, b, c, d, e: los valores con letras diferentes son significativamente diferentes,pag < 0,05). Figura 6 --- Comparación de acarbosa y Ascophyllum nodosum α -glucosidasa IC50 valores a diferentes temperaturas de extracción. (Para la comparación con el compuesto de fármaco único acarbosa, elegimos usar la base fenólica IC50 valor de A. nudoso, para que la comparación sea apropiada.) r = - 0,99 Figura 5 --- Relación entre α-inhibición de la glucosidasa (IC50) de A. nudoso (mg peso fresco) y contenido de fenoles totales (mg/ g) (a, b, c, d, e, f: los valores con letras diferentes son significativamente diferentes, pag < 0,05). 250 5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 CI50 (µg FW) PT mg/g C D 200 B B a mi mi 150 100 50 F 0 0 20 40 Temperatura de extracción (oC) 60 80 H100 REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS—vol. 75, núm. 3, 2010 CI 50 µg Peso fresco % inhibición CI 50 µg Peso fresco PT mg/g Peso Fresco H: Salud, Nutrición y Comida
  • 5. A. nudoso --inhibición de la glucosidasa. . . 2500 5 Figura 7 --- Relación entre α-inhibición de la amilasa (IC50) de UNA. nodoso (mg peso fresco) y contenido de fenoles totales (mg/g) (a, b, c, d, e, f, g: los valores con letras diferentes son significativamente diferentes, pag < 0,05). r = - 0,88 D CI50 (µg FW) PT mg/g F 4.5 C 2000 B 4 B a 3.5 1500 3 mi 2.5 1000 2 1.5 500 1 gramo 0.5 0 0 20 40 Temperatura de extracción (oC) 60 80 9 8.53 Figura 8 --- Comparación de acarbosa y Ascophyllum nodosum α-amilasa CI50 valores a diferentes temperaturas de extracción. (Para la comparación con el compuesto de fármaco único acarbosa, elegimos usar la base fenólica IC50 valor de A. nudoso, para que la comparación sea apropiada.) CI50 (µg Acarbosa) CI50 (ug fenólicos) 8 7 6.81 6 5.41 5 4 3 2 1.34 acarbosa 0,68 1 0 20 40 Temperatura de extracción (oC) 60 80 α-inhibición de la amilasa (IC50 580 mg/mL). Informes anteriores han indicado que los fitoquímicos fenólicos derivados de plantas tienen menorα- actividad inhibidora de la amilasa y una actividad de inhibición más fuerte contra α -glucosidasa (Apostolidis y otros 2006; Kwon y otros 2006). Los principales efectos secundarios de los medicamentos para el control de la diabetes tipo 2, como la acarbosa, son distensión abdominal, flatulencia, meteorismo y posiblemente diarrea (Bischoff y otros 1985). Se ha sugerido que tales efectos adversos podrían ser causados por la inhibición excesiva de la función pancreática.α-amilasa que resulta en la fermentación bacteriana anormal de carbohidratos no digeridos en el colon. (Bischoff y otros 1985; Horii y otros 1987). En nuestro estudio, aunque observamos una menorα-actividad inhibitoria de la amilasa que la acarbosa, no podemos descartar posibles efectos secundarios. Sin embargo, cuanto más bajoalfa in vitroLa actividad inhibidora de la -amilasa sugiere que la extensión de los efectos secundarios será menor que la de la acarbosa. que contenía la mayor cantidad de fitoquímicos fenólicos. Además,A. nudoso los extractos de agua también podrían proporcionar un alivio antioxidante contra el estrés oxidativo inducido por la glucosa alta. Fuerteα -inhibición de la glucosidasa y leve α-inhibición de la amilasa, podría ofrecer potencialmente una terapia complementaria eficaz para la hiperglucemia posprandial con menos efectos secundarios. Este estudio proporciona una fuertein vitro evidencia de potencial α-inhibición de la glucosidasa de A. nudoso que potencialmente podría conducir a la prevención de la diabetes tipo 2 y necesita una mayor caracterización y en vivo estudios clínicos. Expresiones de gratitud Contribución nr 5212 de la Facultad de Medio Ambiente y Ciencias de la Vida, Univ. de Rhode Island con el apoyo de la Estación Experimental Agrícola de Rhode Island. Referencias Conclusiones T Apostolidis E, Kwon YI, Shetty K. 2006. Potencial de las sinergias herbales a base de arándanos para el control de la diabetes y la hipertensión. Asia Pac J Clin Nutr 15:433–41. Bischoff H. 1994. Farmacología de la inhibición de alfa-glucosidasa. Eur J Clin Invest 24:3–10. Bischoff H, Puls W, Krause HP, Schutt H, Thomas G. 1985. Propiedades farmacológicas de los nuevos inhibidores de glucosidasa BAY m 1099 (miglitol) y BAY o 1248. Diabetes Res Clin Pract 1:53–62. Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades, Centro Nacional de Estadísticas de Salud. 2005. División de Estadísticas de Entrevistas de Salud, datos de la Encuesta Nacional de Entrevistas de Salud. Oficina del Censo de los Estados Unidos, censo de población y estimaciones de población. Disponible en: www.cdc.gov/diabetes/statistics/. Consultado el 4 de abril de 2009. El examen inicial mostró que las algas pardas A. nudoso El extracto de agua tiene el contenido fenólico total más alto entre las algas marinas recolectadas localmente estudiadas. A. nudoso Los extractos de agua tienen un buen potencial inhibidor de las enzimas que metabolizan los carbohidratos, especialmente α-glucosidasa. Estas actividades inhibidoras aumentaron con el contenido fenólico y el mejor potencial inhibidor se observó con el extracto acuoso a 80ºC.◦C, vol. 75, núm. 3, 2010—REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS H101 CI 50 µg Peso fresco CI 50 µg Peso fresco PT mg/g Peso Fresco H: Salud, Nutrición y Comida
  • 6. A. nudoso --inhibición de la glucosidasa. . . Chan CX, Ho CL, Phang SM. 2006. Tendencias en la investigación de algas. Tendencias Plant Sci 11:165–6. Cheng AY, Fantus IG. 2005. Tratamiento antihiperglucémico oral para la diabetes tipo 2 tus Can Med Assoc J 172:213–26. Dumay O, Costa J, Desjobert JM, Pergent G. 2004. Variaciones en la concentración de Compuestos fenólicos en los pastos marinos. Posidonia oceánica bajo condiciones de competencia. Fitoquímica 65:3211–20. HaffnerSM. 1998. La importancia de la hiperglucemia en el estado sin ayuno para el desarrollo de enfermedades cardiovasculares. Endocr Rev 19:583–92. Harris MI, Zimmer P. 1992. Clasificación de la diabetes mellitus y otras categorías de Intolerante a la glucosa. En: Alberti KGMM, Zimmet P, DeFronzo RA, editores. Libro de texto internacional de diabetes mellitus. Londres, Reino Unido: John Wiley. págs. 3–18. Heo SJ, Park EJ, Lee KW, Jeon YJ. 2005. Actividades antioxidantes de extractos enzimáticos. de algas marrones. Biores Tech 96:1613–23. Horii S, Fukasse K, Matrua T, Kameda K, Asano N, Masui Y. 1987. Síntesis y α-D- actividad inhibidora de la glucosidasa de los derivados de valiolamina sustituidos en N como potentes agentes antidiabéticos orales. J Med Chem 29:1038–46. Jenkins DJ, Taylor RH, Goff DV, Fielden H, Misiewicz JJ, Sarson DL, Bloom SR, Alberti KG. 1981. Alcance y especificidad de la acarbosa para retardar la absorción de carbohidratos en el hombre. Diabetes 30:951–95. Krentz AJ, Bailey CJ. 2005. Agentes antidiabéticos orales: papel actual en la diabetes tipo 2 mellitus. Drogas 65:385–411. Kwon YI, Vattem DA, Shetty K. 2006. Hierbas clonales de lamiáceas especies contra dia- betas e hipertensión. Asia Pac J Clin Nutr 15:107–18. Kwon YI, Apostolidis E, Kim YC, Shetty K. 2007. Beneficios para la salud del maíz tradicional, frijoles y calabaza; in vitro estudios para el manejo de la hiperglucemia y la hipertensión. J Med Food 10:266–75. Maeda H, Hosokawa M, Sashima T, Takahashi N, Kawada T, Miyashita K. 2006. Fu- la coxantina y su metabolito, el fucoxantinol, suprimen la diferenciación de los adipocitos en las células 3T3-L1. Int J Mol Med 18:147–52. Marais MF, Joseleau JP. 2001. Una fracción de fucoidan deAscophyllum nudoso. Carro- bohydr Res 336:155–9. Mukhopadhyay S, Robbins RJ, Luthria DL. 2006. Optimización del proceso de extracción para compuestos fenólicos del cohosh negro (Cimicifuga racemosa) por extractor de líquidos a presión. J Sci Food Agric 86: 156–62. Padda MS, PichaDH. 2007. Optimización de metodología para la cuantificación de feno- nólicos y ácidos fenólicos individuales en camote (Ipomoea batatas L.) raíces. J Food Sci 72: C412–6. Ragan MA, Glombitza KW. 1986. Florotaninos, polifenoles de algas pardas. En: Ronda FE, Chapman DJ, editores. Avances en la investigación ficológica. Bristol, Reino Unido: Biopress Ltd. p 129–41. Rosetti L, Giacarri A, Defronzo RA. 1990. Toxicidad de la glucosa. Cuidado de la diabetes 13:610–30. Shetty K, Curtis OF, Levin RE, Witkowsky R, Ang W. 1995. Prevención de la vitrificación como- asociado con cultivo in vitro de brotes de orégano (Origanum vulgare) por Pseudomonas spp . J Plant Physiol 147: 447–51. Taylor W.R. 1962. Algas marinas de la costa noreste de América del Norte. Ann Arbor, Michigan: Univ. de Michigan Press. ISBN 0-472-04904-6. Teixeira VL, Rocha FD, Houghton PJ, Auxiliadora M, Kaplan C, Pereira RC. 2007.α- Inhibidores de amilasa de algas marinas brasileñas y su potencial hipoglucemiante. Fitoterapia 78:35–6. Yan XJ, Li XC, Zhou CX, Fan X. 1996. Prevención de la rancidez del aceite de pescado por florotaninos desde Sargazo kjellmanianum. J Appl Phycol 8:201–3. Yan XJ, Chuda Y, Suzuski M, Nagata T. 1999. Fucoxanthin as the major antioxidant in Hijikia fusiformis, un alga comestible común. Biosci Biotechnol Biochem 63:605–7. Yoshie Y, Wang W, Petillo D, Suzuki T. 2000. Distribution of catechins in Japanese sea- malas hierbas. Fisher Sci 66:998–1000. Watanabe J, Kawabata J, Kurihara H, Niki R. 1997. Aislamiento e identificación de α – Inhibidores de la glucosidasa de Tochu – cha (Eucommia ulmoides). Biosci Biotech Biocehm 61:177–8. Zhang J, Tiller C, Shen J, Wang C, Girouard GS, Dennis D, Barrow CJ, Miao M, Ewart S. 2007. Propiedades antidiabéticas de las fracciones enriquecidas de polisacáridos y polifenoles de las algas pardas Ascophyllum nudoso. Can J Physiol Pharmacol 85:1116–23. H102 REVISTA DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS—vol. 75, núm. 3, 2010 H: Salud, Nutrición y Comida