1. Amino acid variants in tha human glucose-dependent
insulinotropic polypeptide (GIP) receptor
The impact on the pancreatic ß cell response and functional expression

2.  INTRODUCCIÓN
 SUJETOS, MATERIALES Y MÉTODOS
 RESULTADOS
 DISCUSIÓN
 CONCLUSIONES

3. INTRODUCCIÓN
INCRETINAS

6.  Determinar la organización exon-intron del
receptor GIP humano
 Variabilidad genética del receptor GIP afecta la
respuesta de las células ß pancreáticas
 Receptores GIP alterados exhiben
modificaciones en la respuesta a la producción
de cAMP

7. SUJETOS, MATERIALES Y
MÉTODOS
SUJETOS
RECEPTOR GIP
ALTERACIONES EN LA ESTRUCTURA DE GIP

8.  Organización Exon-Intron en
receptor GIP humano
Análisis de la conformación del
MATERIALES

polimorfismo de cadena sencilla
Y MÉTODOS  Ensayos de detección de
mutaciones identificadas en
receptor GIP
 Ensayos para medición de
variables en sangre
 Construcción de receptor GIP
 Análisis de cAMP
 Análisis de acoplamiento

9. MATERIALES Y MÉTODOS
Organización Exon-Intron en
receptor GIP humano
• Expand High Fidelity PCR System
• Taq polimerasa
Análisis de la conformación del
polimorfismo de cadena sencilla
• 100 ng DNA genómico- 25µl

10. MATERIALES Y MÉTODOS
Ensayos de detección de mutaciones
identificadas en receptor GIP
• A207V (GcGGTG) 268 bp
• E354Q (GAGCAG) 217 bp
Ensayos para medición de variables en
sangre
• Glucosa, Insulina y Péptido C
• GIP  Detección Radioinmunológica

11. MATERIALES Y MÉTODOS
Construcción de receptor GIP
• Sitio de mutagénesis
• Vector pcDNA-3
Análisis de cAMP
• Las células fueron lisadas y el AMPc intracelular
fragmentado con tripsina se separó en Sephadex
y columnas de alúmina.
Análisis de acoplamientos
• No aumento la concentración competitiva de GIP
no radioactivo

12. SEPHADEX
Gel Dextrano utilizado para
filtración y cromatografías

13. RESULTADOS

14.  Caracterización del gen del
receptor GIP
 SSCP primarios de exploración
de los receptores GIP
RESULTADOS  Estudios de asociación de las
variantes de aminoácidos en el
receptor GIP.
 Características de sujetos
tolerantes a la glucosa que
poseen alteraciones en el
receptor GIP
 GIP estimula la producción de
cAMP
 Unión de GIP al receptor GIP

15. MATERIALES Y MÉTODOS
Caracterización del gen del receptor GIP
• 14 exones + exon 5´no traducido
• 100 bp secuencias intronicas en ambos sitios de los exones
Análisis de la conformación del polimorfismo de
cadena sencilla
• GCG heterocigotos GTG para la sustitución en el exón 7 en el
codón 207 cambia una alanina a valina (A207V)
• Polimorfismo en el exón 12 en el codón 354 en el que GAG
cambia a CAG provocando una sustitución de ácido glutámico por
glutamina (E354Q).

16. MATERIALES Y MÉTODOS
Estudios de asociación de las variantes de
aminoácidos en el receptor GIP.
• Grupo control: 23.2%
• Pacientes DM II: 24.9%
Características de sujetos tolerantes a la glucosa
que poseen alteraciones en el receptor GIP
• Homocigotos 25%+ en ayuno
• Ambos grupos aumento después de la ingesta de glucosa
(75 grs.)

18. MATERIALES Y MÉTODOS
GIP estimula la producción de cAMP
• Sujeto con alteración en codon 354 en receptor GIP
muestra disminución de 11% de niveles de GIP en
comparación de receptores normales o variante
A207V
• Aunque los niveles de GIP aumenten, receptores con
mutación 354 reduce su efecto.
Unión de GIP al receptor GIP
• La unión a receptores normales y mutados se mostro
similar.

20. DISCUSIÓN

21.  Mutaciones en el receptor GIP no confiere mayor
riesgo
 25% + concentración de GIP en homocigotos 354
 La producción de cAMP fue menor en sujetos con
mutación 354
 El efecto dosis-Respuesta no mostró alteración
relevante.
 No se evidencia alteraciones de la unión a receptor
mutado 354