Pasos a seguir en una exposición de Tesis, De la misma manera los métodos de estudios.

1. TESIS
Elaborado por:
Bach. KATHERINE ROSMERY BALDEON OSORIO
Huancayo – Perú
2015
“ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA IN VITRO DEL ACEITE ESENCIAL DE
LAS HOJAS DE Schinus molle L. “Molle” FRENTE A Trichophyton
rubrum Y Trichophyton mentagrophytes”

2. INTRODUCCIÓN
Desde tiempos muy antiguos los pobladores del distrito de
Chinchihuasi (Churcampa - Huancavelica) usan las hojas y tallos del
“Molle” en infusión para poder curar las micosis de los pies, las cuales
generalmente son causadas por hongos dermatofitos.
Es por ello que la presente investigación se planteó como problema:
¿Existe actividad antimicótica in vitro del aceite esencial de las hojas de
Schinus molle L. “Molle” frente a Trichophyton rubrum y Trichophyton
mentagrophytes?

3. • Determinar la actividad antimicótica In vitro del aceite esencial de las
hojas de Schinus molle L. “Molle” frente a Trichophyton rubrum y
Trichophyton mentagrophytes.
General.-
Específicos.-
• Obtener aceite esencial de las hojas de Schinus molle L. “Molle”
mediante la Técnica de destilación por arrastre con vapor.
• Evaluar la actividad In vitro del aceite esencial obtenido frente a
cepas de Trichophyton rubrum y Trichophyton mentagrophytes mediante
la Técnica de Kirby-Bauer.
OBJETIVOS

4. A. Antecedentes de estudio.-
• Rivero y col. (1997), evaluaron la actividad anti fúngica In vitro del
extracto alcohólico de hojas de Pinus caribaea sobre hongos como
Trichophyton mentagrophytes, T. rubrum y Microsporum canis.
• Shin y Lim (2004), determinaron que el aceite esencial de Pelargonium
graveolens inhibe significativamente a Trichophyton spp.
• Huamaní y Ruiz (2005), evaluaron la actividad antifúngica de 10
extractos etanólicos de plantas medicinales, incluyendo a Schinus
molle L. contra levaduras y mohos.
• Cano (2008), estudio los metabolitos del aceite esencial de hojas de
Minthostachys molli y demostró que no ejerce actividad antimicótica
frente a dermatofitos como: T. mentagrophytes, T. rubrum y M. canis.
MARCO TEÓRICO

5. B.- Bases teóricas.-
1. Schinus molle.-
a) Ubicación taxonómica.-
REINO Vegetal
DIVISIÓN Fanerógama
CLASE Dicotiledónea
ORDEN Sapindales
FAMILIA Anacardiácea
GÉNERO Schinus
ESPECIE Schinus molle L.
NOMBRE COMÚN «Molle»
b) Características morfológicas.-
c) Distribución geográfica.-
d) Estudios fitoquímicos.-
e) Propiedades farmacológicas.-
MARCO TEÓRICO

6. B.- Bases teóricas.-
2. Hongos dermatofitos.-
a) Trichophyton rubrum.-
b) Trichophyton mentagrophytes.-
MARCO TEÓRICO
c) Epidemrophyton floccosum.-
d) Patogenicidad.- «Tiñas»
• Del cuero cabelludo
• De la barba
• Del cuerpo
• Inguinal
• De los pies
• De las uñas

7. B.- Bases teóricas.-
3.- Aceite esencial.-
a) Definición.-
b) Métodos de extracción.-
• Destilación por arrastre con vapor
• Extracción con solventes volátiles
• Dilución
• Estrujado
MARCO TEÓRICO
4.- Actividad antimicótica.-
a) Fungicida y fungistático.-
b) Métodos de evaluación.-
• Dilución en agar
• Difusión en placa
• Dilución en caldo
• Pozo en difusión

8. A. Método científico.- Observacional
B. Tipo y nivel de investigación.- Básico, prospectivo, transversal y
de Nivel descriptivo.
C. Diseño de investigación.- Descriptivo correlacional.
D. Población.- Aceite esencial de las hojas de S. molle L. “Molle” de
arbustos procedentes de las chacras del distrito de Chinchihuasi
(Churcampa – Huancavelica).
E. Muestra.- Cinco extractos de aceite esencial obtenidos mediante la
Técnica de destilación por arrastre con vapor.
MÉTODO

9. F. Técnicas de Recolección de datos.-
a) Obtención de muestras.-
• Hojas de S. molle L. “Molle” colectadas de la flora silvestre de Chinchihuasi (Churcampa
– Huancavelica).)
• Cultivos de T. rubrum y T. mentagrophytes obtenidos del Laboratorio Corporación YLV
S.A.C. (Lima)
MÉTODO

10. F. Técnicas de Recolección de datos.-
a) Obtención del aceite esencial.-
MÉTODO
5 kg. de hojas frescas
de “Molle”
Agua y aceite
esencial, en estado
líquido
Desecación y filtración del
aceite esencial obtenido
Cinco muestras de aceite
esencial

11. F. Técnicas de Recolección de datos.-
b) Determinación de la sensibilidad antifúngica.-
• Método de Difusión en Placa (Técnica de Kirby-Bauer).-
• Método de Pozo en difusión.-
MÉTODO
Dermatofitos
incubados a 25°C x
7 días
Colocación de discos de
sensibilidad
Observación de halos
de sensibilidad
Esporas en el agar
licuado (45-50°C)
Perforaciones de 0.6
mm de diámetro
Colocación de 30
µl/pocillo

12. NÚMERO DE
ENSAYO
PESO DE HOJAS DE
Schinus molle L. (Kg)
VOLUMEN DE
AGUA (L)
TIEMPO DE
OBTENCIÓN
(H)
ACEITE
ESENCIAL
OBTENIDO (mL)
1 5.0 10.0 3.5 12.0
2 5.0 10.0 3.5 11.0
3 5.0 10.0 3.5 10.0
4 5.0 10.0 3.5 12.0
5 5.0 10.0 3.5 12.0
PROMEDIO 5.0 10.0 3.5 11.4
A.- OBTENCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL.-
RESULTADOS
Cuadro N°1.- Volumen de aceite esencial de Schinus molle L. obtenido mediante la
Técnica de destilación de arrastre con vapor
Fuente: Elaboración propia, junio 2013

13. No se evidenció formación de halo de inhibición
No se evidenció formación de halo de inhibición
Fotografía N°1.- Evaluación de la actividad
antimicótica del aceite esencial de S. molle
L. frente a Trichophyton rubrum mediante la
Técnica de Kirby-Bauer
Fotografía N°2.- Evaluación de la actividad
antimicótica del aceite esencial de S. molle
L. frente a Trichophyton mentagrophytes
mediante la Técnica de Kirby-Bauer
B.- EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA IN VITRO.-
RESULTADOS
Fuente: Elaboración propia, junio 2013

14. B.- EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA IN VITRO.-
RESULTADOS
Fuente: Elaboración propia, junio 2013
Concentración
Problema
Control
positivo
Control
negativo
Aceite esencial de Schinus molle
L. Terbinafina Aceite vegetal
M1 M2 M3 M4 M5
30 µl/pocillo
(150 µl/placa)
NC NC NC NC NC NC C
NC NC NC NC NC NC C
NC NC NC NC NC NC C
Cuadro N°2.- Evaluación de la actividad antimicótica del
aceite esencial de S. molle L. frente a Trichophyton rubrum
mediante la Técnica de pozo en difusión
Fotografía N°3.- Evaluación de la actividad antimicótica del
aceite esencial de S. molle L. frente a Trichophyton rubrum
mediante la Técnica de pozo en difusión (30 µl/pocillo)
No creció
Control positivo:
Pocillos con Terbinafina
(30 µL/pocillo)
No creció
Problema:
Pocillos con aceite esencial
(30 µL/pocillo)
Creció
Control negativo:
Pocillos con Aceite vegetal
(30 µL/pocillo)

15. B.- EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA IN VITRO.-
RESULTADOS
Fuente: Elaboración propia, junio 2013
Cuadro N°3.- Evaluación de la actividad antimicótica del
aceite esencial de S. molle L. frente a Trichophyton
mentagrphytes mediante la Técnica de pozo en difusión
Fotografía N°4.- Evaluación de la actividad antimicótica del aceite
esencial de S. molle L. frente a Trichophyton mentagrophytes
mediante la Técnica de pozo en difusión (30 µl/pocillo)
Concentración
Problema
Control
positivo
Control
negativo
Aceite esencial de Schinus molle
L. Terbinafina Aceite vegetal
M1 M2 M3 M4 M5
30 µl/pocillo
(150 µl/placa)
NC NC NC NC NC NC C
NC NC NC NC NC NC C
NC NC NC NC NC NC C
No creció
Control positivo:
Pocillos con Terbinafina
(30 µL/pocillo)
No creció
Problema:
Pocillos con aceite esencial
(30 µL/pocillo)
Creció
Control negativo:
Pocillos con Aceite vegetal
(30 µL/pocillo)

16. En este estudio se ha verificado la actividad antimicótica del aceite
esencial obtenido, probablemente debido a que los monoterpenos (β-
felandreno, α-felandreno y carvacrol) serían responsables del efecto fungicida.
Por otro lado, el mecanismo de acción específico del aceite esencial
aún no ha sido dilucidado, pero Llanos (2012) lo atribuyó a la gran variedad de
compuestos químicos presentes y posiblemente su actividad antimicótica sea
atribuible a la acción combinada de varios de ellos.
Es posible que la mezcla y concentración de los componentes volátiles
del aceite alteren la permeabilidad de la membrana plasmática de la célula
fúngica. Así mismo, los aceites esenciales provocan la modificación del pH del
medio, impidiendo el normal desarrollo del micelio.
Para explicar esta actividad biológica es necesario considerar la gran
variedad de compuestos químicos presentes dichos aceites; lo cual quedó en
evidencia en esta investigación, ya que no se observó desarrollo micelial en
ninguna de las especies de dermatofitos expuestas al contacto con los aceites
obtenidos.
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN

17. Ante la dificultad de la Técnica de Kirby-Bauer, se empleó el Método de
pozos en difusión, que evalúa la actividad antimicótica cualitativamente, ya que
para los dermatofitos es imposible evaluar la susceptibilidad antimicótica
cuantitativamente.
Esta técnica trabajó con tres grupos de ensayo: control negativo
(aceite vegetal), control positivo (terbinafina) y prueba (aceite esencial); para
cada una de las especies de hongos.
Tras el vertido de las distintas sustancias en los pocillos se notó que
aquellas especies en contacto con el aceite esencial, así como las que
estuvieron en contacto con la terbinafina no desarrollaron absolutamente; lo
cual demostró una vez más que existe un efecto fungicida del aceite esencial de
S. molle semejante al efecto que ejerció el control negativo (terbinafina).
La evaluación del efecto antimicótico del aceite esencial pudo verse
influenciada por diversos factores, (Colella, 1997) como tipo y tamaño del
inoculo, manejo, recuento, dilución y transferencia de hifas. Fernández y Gehrt
señalan que la estandarización de la técnica se ve dificultada por otros factores
como temperatura de crecimiento, composición del medio, pH y tiempo de
incubación.
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN

18. 1. Se determinó que existe actividad antimicótica In vitro del aceite
esencial de las hojas de Schinus molle L. “Molle” frente a Trichophyton
rubrum y Trichophyton mentagrophytes.
2. Se obtuvo un promedio de 11.4 mL de aceite esencial a partir de 5:0
Kg de hojas de Schinus molle L. “Molle” mediante la Técnica de
destilación por arrastre con vapor trabajando con 10.0 L de agua
durante 3.3 horas.
3. Se evaluó cualitativamente la actividad In vitro del aceite esencial
obtenido frente a cepas de Trichophyton rubrum y Trichophyton
mentagrophytes mediante las Técnicas de Kirby-Bauer y Pozo en
difusión.
CONCLUSIONES

19. 1. A los estudiantes de ciencias de la salud, deben valorar la actividad
antimicótica del aceite esencial de Schinus molle L. “Molle” frente a
otros hongos de importancia médica.
2. Relacionar los resultados obtenidos con las dosis tolerables en
futuras pruebas biológicas, lo que podría permitir formular un
producto de uso comercial que se encuentre al alcance de la
población.
3. Realizar estudios sobre los principios activos y concentración
mínima inhibitoria de aceites esenciales de plantas de las diferentes
regiones del Perú.
RECOMENDACIONES