Este documento describe una investigación sobre la composición química y la actividad antimicrobiana de fracciones ricas en aceite esencial obtenidas de Rosmarinus officinalis L. a través de extracción con fluidos supercríticos de CO2. Se identificaron 33 compuestos en las fracciones, con α-pineno, 1,8-cineol, alcanfor, verbenona y borneol como los principales componentes. Las fracciones mostraron actividad antimicrobiana contra bacterias Gram-positivas, Gram-negativas, levaduras y hongos. La

1. 790
Revista de Protección de Alimentos, vol. 68, núm. 4, 2005, páginas 790–795
Derechos de autor Q, Asociación Internacional para la Protección de los Alimentos.Derechos de autor Q, Asociación Internacional para la Protección de los Alimentos.Derechos de autor Q, Asociación Internacional para la Protección de los Alimentos.
Composición química y actividad antimicrobiana de RosmarinusComposición química y actividad antimicrobiana de Rosmarinus
of fi cinalis L. Aceite esencial obtenido mediante supercríticoof fi cinalis L. Aceite esencial obtenido mediante supercrítico
Extracción de fluidos
S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1S. SANTOYO 1 * S. CAVERO 1 L. JAIME 1 E. IBAN˜ EZ, 2 FJ SEN˜ ORA´ NS, 1 Y G. REGLERO 1
1 A´ rea de Tecnologı1 A´ rea de Tecnologı ´a de Alimentos, Universidad Auto´noma de Madrid, Ciudad Universitaria de Cantoblanco, 28049 Madrid, España; y 2 Instituto de´a de Alimentos, Universidad Auto´noma de Madrid, Ciudad Universitaria de Cantoblanco, 28049 Madrid, España; y 2 Instituto de´a de Alimentos, Universidad Auto´noma de Madrid, Ciudad Universitaria de Cantoblanco, 28049 Madrid, España; y 2 Instituto de
Fermentaciones Industriales, CSIC, Juan de la Cierva 3, 28006 Madrid, España
MS 04-356: recibido el 5 de agosto de 2004 / aceptado el 20 de octubre de 2004
RESUMEN
La composición química y la actividad antimicrobiana de las fracciones ricas en aceites esenciales obtenidas por CO supercrítico 2 extracción de Rosmarinus of fi cinalis L.La composición química y la actividad antimicrobiana de las fracciones ricas en aceites esenciales obtenidas por CO supercrítico 2 extracción de Rosmarinus of fi cinalis L.La composición química y la actividad antimicrobiana de las fracciones ricas en aceites esenciales obtenidas por CO supercrítico 2 extracción de Rosmarinus of fi cinalis L.La composición química y la actividad antimicrobiana de las fracciones ricas en aceites esenciales obtenidas por CO supercrítico 2 extracción de Rosmarinus of fi cinalis L.La composición química y la actividad antimicrobiana de las fracciones ricas en aceites esenciales obtenidas por CO supercrítico 2 extracción de Rosmarinus of fi cinalis L.
fueron investigados. El análisis por cromatografía de gases y espectroscopía de masas de estas fracciones dio como resultado la identificación de 33 compuestos del aceite
esencial. Los principales componentes de estas fracciones fueron una- pineno, 1,8-cineol, alcanfor, verbenona y borneol, que constituyen ca. 80% del total del petróleo. La actividadesencial. Los principales componentes de estas fracciones fueron una- pineno, 1,8-cineol, alcanfor, verbenona y borneol, que constituyen ca. 80% del total del petróleo. La actividadesencial. Los principales componentes de estas fracciones fueron una- pineno, 1,8-cineol, alcanfor, verbenona y borneol, que constituyen ca. 80% del total del petróleo. La actividad
antimicrobiana fue investigada por los métodos de difusión del disco y dilución del caldo contra seis especies microbianas, incluidas las bacterias grampositivas ( Staphylococcusantimicrobiana fue investigada por los métodos de difusión del disco y dilución del caldo contra seis especies microbianas, incluidas las bacterias grampositivas ( Staphylococcus
aureus
y Bacillus subtilis), Bacterias Gram-negativo ( Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa), una levadura Candida albicans),y Bacillus subtilis), Bacterias Gram-negativo ( Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa), una levadura Candida albicans),y Bacillus subtilis), Bacterias Gram-negativo ( Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa), una levadura Candida albicans),y Bacillus subtilis), Bacterias Gram-negativo ( Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa), una levadura Candida albicans),y Bacillus subtilis), Bacterias Gram-negativo ( Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa), una levadura Candida albicans),y Bacillus subtilis), Bacterias Gram-negativo ( Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa), una levadura Candida albicans),y Bacillus subtilis), Bacterias Gram-negativo ( Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa), una levadura Candida albicans),y Bacillus subtilis), Bacterias Gram-negativo ( Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa), una levadura Candida albicans),
y un hongo Aspergillus niger). Todas las fracciones ricas en aceites esenciales obtenidas mostraron actividad antimicrobiana contra todos los microorganismosy un hongo Aspergillus niger). Todas las fracciones ricas en aceites esenciales obtenidas mostraron actividad antimicrobiana contra todos los microorganismosy un hongo Aspergillus niger). Todas las fracciones ricas en aceites esenciales obtenidas mostraron actividad antimicrobiana contra todos los microorganismos
analizados, con zonas de inhibición y valores mínimos de concentración bactericida y fungicida en el rango de 17 a 33 mm y 2.25 a 0.25 mg / ml, respectivamente. La
fracción más activa fue la obtenida en el experimento 4 (4% de etanol como modificador; presión de extracción, 25 MPa; temperatura de extracción, 60 8 C). S. aureus sefracción más activa fue la obtenida en el experimento 4 (4% de etanol como modificador; presión de extracción, 25 MPa; temperatura de extracción, 60 8 C). S. aureus sefracción más activa fue la obtenida en el experimento 4 (4% de etanol como modificador; presión de extracción, 25 MPa; temperatura de extracción, 60 8 C). S. aureus sefracción más activa fue la obtenida en el experimento 4 (4% de etanol como modificador; presión de extracción, 25 MPa; temperatura de extracción, 60 8 C). S. aureus sefracción más activa fue la obtenida en el experimento 4 (4% de etanol como modificador; presión de extracción, 25 MPa; temperatura de extracción, 60 8 C). S. aureus se
descubrió que era la bacteria más sensible a los extractos de romero, mientras que la menos susceptible era A. niger. una- Los estándares de pineno, 1,8-cineol,descubrió que era la bacteria más sensible a los extractos de romero, mientras que la menos susceptible era A. niger. una- Los estándares de pineno, 1,8-cineol,descubrió que era la bacteria más sensible a los extractos de romero, mientras que la menos susceptible era A. niger. una- Los estándares de pineno, 1,8-cineol,descubrió que era la bacteria más sensible a los extractos de romero, mientras que la menos susceptible era A. niger. una- Los estándares de pineno, 1,8-cineol,
alcanfor, verbenona y borneol también mostraron actividad antimicrobiana contra todos los microorganismos probados, siendo el borneol el más efectivo seguido por
alcanfor y verbenona. De esa manera, se confirmó que el aceite esencial del experimento 4, con la mejor actividad antimicrobiana, presentaba la mayor cantidad de
alcanfor, borneol y verbenona.
El creciente interés en la sustitución de los "conservantes tradicionales de
alimentos" por productos naturales ha fomentado la investigación sobre fuentes
vegetales, con el objetivo de identificar nuevos componentes activos. Desde la
antigüedad, se sabe que las plantas y especias aromáticas, así como sus aceites
esenciales, tienen diversos grados de actividad antimicrobiana ( 4, 5, 26);esenciales, tienen diversos grados de actividad antimicrobiana ( 4, 5, 26);
Por esta razón, los extractos de estas plantas pueden usarse para retrasar o inhibir el
crecimiento de microorganismos patógenos o de descomposición ( 19) La mayoría decrecimiento de microorganismos patógenos o de descomposición ( 19) La mayoría decrecimiento de microorganismos patógenos o de descomposición ( 19) La mayoría de
estos aceites esenciales se clasifican como ingredientes generalmente reconocidos
como seguros (GRAS) ( 10)como seguros (GRAS) ( 10)
Entre las hierbas y especias, el romero ( Rosmarinus of fi cinalis L.) es unaEntre las hierbas y especias, el romero ( Rosmarinus of fi cinalis L.) es unaEntre las hierbas y especias, el romero ( Rosmarinus of fi cinalis L.) es una
planta doméstica común que se cultiva en muchas partes del mundo. Se utiliza
para dar sabor a los alimentos, en cosméticos y en medicina tradicional por sus
actividades coreoréticas, hepatoprotectoras y antitumorales ( 23) También seactividades coreoréticas, hepatoprotectoras y antitumorales ( 23) También seactividades coreoréticas, hepatoprotectoras y antitumorales ( 23) También se
sabe que el romero exhibe actividades antioxidantes y antimicrobianas. Aunque
sus propiedades antioxidantes se han informado ampliamente ( 2, 6, 8, 25), solosus propiedades antioxidantes se han informado ampliamente ( 2, 6, 8, 25), solosus propiedades antioxidantes se han informado ampliamente ( 2, 6, 8, 25), solo
unos pocos estudios han evaluado el papel potencial del aceite esencial de
romero como agente antimicrobiano ( 1, 16, 18).romero como agente antimicrobiano ( 1, 16, 18).
La extracción de fluido supercrítico (SFE) es un método de fraccionamiento
que explota las propiedades únicas de los gases por encima de sus puntos críticos
para extraer componentes solubles de una materia prima. El dióxido de carbono es
un solvente ideal para
* * Autor para correspondencia. Fax: 34 91 4973778; Correo electrónico:
susana.santoyo@uam.es.
extracción de productos naturales porque no es tóxico, no es explosivo, está
fácilmente disponible y es fácil de eliminar de los productos extraídos. La
calidad de los extractos de fluidos supercríticos es mayor que la obtenida por
extracción con solventes orgánicos o por destilación de agua y vapor porque
estos métodos pueden inducir degradación térmica o presentar el problema del
solvente tóxico residual en los productos. En estas condiciones, CO
comprimido 2 es capaz de solubilizar hidrocarburos y mono y sesquiterpenoscomprimido 2 es capaz de solubilizar hidrocarburos y mono y sesquiterpenoscomprimido 2 es capaz de solubilizar hidrocarburos y mono y sesquiterpenos
oxigenados, los principales componentes de los aceites esenciales ( 13) Unaoxigenados, los principales componentes de los aceites esenciales ( 13) Unaoxigenados, los principales componentes de los aceites esenciales ( 13) Una
separación de dos etapas acoplada al proceso de extracción permite la
separación de las ceras cuticulares y aceites volátiles ( 20)separación de las ceras cuticulares y aceites volátiles ( 20)
Los objetivos de este estudio fueron determinar la actividad antimicrobiana
de los extractos de SFE, obtenidos por CO 2 y compañía 2 más una extracción dede los extractos de SFE, obtenidos por CO 2 y compañía 2 más una extracción dede los extractos de SFE, obtenidos por CO 2 y compañía 2 más una extracción dede los extractos de SFE, obtenidos por CO 2 y compañía 2 más una extracción dede los extractos de SFE, obtenidos por CO 2 y compañía 2 más una extracción de
cosolvente (etanol) en diferentes condiciones del romero, y para establecer una
relación entre la actividad del extracto y la composición. Por lo tanto, este estudio
se realizó para determinar las condiciones de extracción y fraccionamiento
necesarias para obtener un aceite esencial con una actividad antimicrobiana
óptima.
MATERIALES Y MÉTODOS Muestras y productos químicos. LaMATERIALES Y MÉTODOS Muestras y productos químicos. La
muestra de romero ( R. of fi cinalismuestra de romero ( R. of fi cinalis
L.) consistió en hojas secas de romero obtenidas de una herbolaria (Murcia,
España). Las hojas de romero se recolectaron durante septiembre y se secaron de
acuerdo con un método tradicional descrito anteriormente ( 9) La moliendaacuerdo con un método tradicional descrito anteriormente ( 9) La moliendaacuerdo con un método tradicional descrito anteriormente ( 9) La molienda
criogénica de la muestra se realizó bajo dióxido de carbono. El tamaño de la
partícula (entre 999 y
Descargadodesdehttp://meridian.allenpress.com/jfp/article-pdf/68/4/790/1676224/0362-028x-68_4_790.pdfporinvitadoel21demayode2020

2. J. Food Prot., Vol. 68, N ° 4 Actividad antimicrobiana de extractos de romero SFE 791
TABLA 1. Condiciones utilizadas para los experimentos de SFE realizados en una planta a escala piloto unaTABLA 1. Condiciones utilizadas para los experimentos de SFE realizados en una planta a escala piloto unaTABLA 1. Condiciones utilizadas para los experimentos de SFE realizados en una planta a escala piloto una
Experimentar EtOH
(%)
PAGS extPAGS ext
(MPa)
T extT ext
( 8 C)( 8 C)( 8 C)
r extr ext
(g / ml)
PAGS S1PAGS S1
(MPa)
T S1T S1
( 8 C)( 8 C)( 8 C)
r S1r S1
(g / ml)
PAGS S2PAGS S2
(MPa)
T S2T S2
( 8 C)( 8 C)( 8 C)
r S2r S2
(g / ml)
1
2
3
4
0
0
4
4
35
35
25
25
40
60
40
60
0.934
0.860
0.875
0,777
14
14
10
10
40
60
40
60
0,709
0.465
0.623
0.292
2
2
2
2
20
20
20
20
0,041
0,041
0,041
0,041
5
6
7
7
7
0
15
15
15
40
60
60
0,731
0,507
0,507
7.5
7.5
7.5
40
60
60
0.240
0,173
0,173
2
2
2
20
20
20
0,041
0,041
0,041
una PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presiónuna PAGS ext, presión de extracción; T ext, distribución de extracción; r ext, densidad de extracción; PAGS S1 presión en el separador 1; T S1 temperatura en el separador 1; r S1 densidad en el separador 1; PAGS S2 presión
en el separador 2; T S2 temperatura en el separador 2; r S2 densidad en separador 2.en el separador 2; T S2 temperatura en el separador 2; r S2 densidad en separador 2.en el separador 2; T S2 temperatura en el separador 2; r S2 densidad en separador 2.en el separador 2; T S2 temperatura en el separador 2; r S2 densidad en separador 2.en el separador 2; T S2 temperatura en el separador 2; r S2 densidad en separador 2.en el separador 2; T S2 temperatura en el separador 2; r S2 densidad en separador 2.en el separador 2; T S2 temperatura en el separador 2; r S2 densidad en separador 2.
500 metro m) se determinó pasando el material vegetal molido a través de tamices de500 metro m) se determinó pasando el material vegetal molido a través de tamices de500 metro m) se determinó pasando el material vegetal molido a través de tamices de
tamaño apropiado. Toda la muestra se almacenó en destellos ámbar a 2 20 8 C hasta sutamaño apropiado. Toda la muestra se almacenó en destellos ámbar a 2 20 8 C hasta sutamaño apropiado. Toda la muestra se almacenó en destellos ámbar a 2 20 8 C hasta sutamaño apropiado. Toda la muestra se almacenó en destellos ámbar a 2 20 8 C hasta sutamaño apropiado. Toda la muestra se almacenó en destellos ámbar a 2 20 8 C hasta su
uso (un máximo de 2 meses).
una- El pineno, el 1,8-cineol, el alcanfor, la verbenona y el borneol se compraron enuna- El pineno, el 1,8-cineol, el alcanfor, la verbenona y el borneol se compraron en
Sigma (Madrid, España). CO 2 ( la calidad de la cromatografía de fluido supercrítico) fueSigma (Madrid, España). CO 2 ( la calidad de la cromatografía de fluido supercrítico) fueSigma (Madrid, España). CO 2 ( la calidad de la cromatografía de fluido supercrítico) fue
donada amablemente por AL Air Liquide España SA (Madrid, España).
Método de extracción Todas las extracciones se llevaron a cabo en un extractor deMétodo de extracción Todas las extracciones se llevaron a cabo en un extractor de
líquido supercrítico a escala piloto (líquido Iber, Madrid, España) con una celda de extracción de
285 ml, como se describió anteriormente ( 22) La celda de extracción estaba hecha de acero 316 y285 ml, como se describió anteriormente ( 22) La celda de extracción estaba hecha de acero 316 y285 ml, como se describió anteriormente ( 22) La celda de extracción estaba hecha de acero 316 y
estaba equipada con un
0.5- metro m frita en la entrada y un 2- metro m frita en la salida. La presión de extracción0.5- metro m frita en la entrada y un 2- metro m frita en la salida. La presión de extracción0.5- metro m frita en la entrada y un 2- metro m frita en la salida. La presión de extracción0.5- metro m frita en la entrada y un 2- metro m frita en la salida. La presión de extracción0.5- metro m frita en la entrada y un 2- metro m frita en la salida. La presión de extracción
se controló mediante válvulas micrométricas, y la bomba de dióxido de carbono era de
Bran-Luebbe (Norderstedt, Alemania). El fraccionamiento se logró en dos separadores
diferentes, con control independiente de la temperatura y la presión, ya sea por una
disminución de la presión o tanto en la presión como en la temperatura.
Para cada experimento, la celda de extracción se llenó con 60 g de romero molido y
90 g de arena de mar lavada (Panreac, Madrid, España). Las extracciones dinámicas se
realizaron en las condiciones experimentales que se muestran en la Tabla 1. La presión de
extracción varió de 35 a 15 MPa, y las presiones de fraccionamiento se establecieron en una
primera etapa al 40% de la presión de extracción y en la segunda etapa a un valor fijo de 2
MPa . Las temperaturas se mantuvieron por debajo de 60 8 C en todas las condiciones. ElMPa . Las temperaturas se mantuvieron por debajo de 60 8 C en todas las condiciones. ElMPa . Las temperaturas se mantuvieron por debajo de 60 8 C en todas las condiciones. El
tiempo de extracción fue de 1 h.
Para las extracciones con etanol como modificador, la adición comenzó después de
haber alcanzado la presión seleccionada durante la mitad del tiempo de extracción. Todos
los extractos se hicieron bajo N 2, a 2 20 8 C en la oscuridad, y el etanol, cuando estabalos extractos se hicieron bajo N 2, a 2 20 8 C en la oscuridad, y el etanol, cuando estabalos extractos se hicieron bajo N 2, a 2 20 8 C en la oscuridad, y el etanol, cuando estabalos extractos se hicieron bajo N 2, a 2 20 8 C en la oscuridad, y el etanol, cuando estabalos extractos se hicieron bajo N 2, a 2 20 8 C en la oscuridad, y el etanol, cuando estabalos extractos se hicieron bajo N 2, a 2 20 8 C en la oscuridad, y el etanol, cuando estabalos extractos se hicieron bajo N 2, a 2 20 8 C en la oscuridad, y el etanol, cuando estaba
presente como modificador, se eliminó a los 35 8 C en un evaporador rotativo al vacío. Lospresente como modificador, se eliminó a los 35 8 C en un evaporador rotativo al vacío. Lospresente como modificador, se eliminó a los 35 8 C en un evaporador rotativo al vacío. Los
experimentos antimicrobianos se llevaron a cabo solo con la fracción recogida en la segunda
celda de separación (fracción 2).
Cromatografía de gases: análisis de espectroscopía de masas. La fracciónCromatografía de gases: análisis de espectroscopía de masas. La fracción
que contiene el aceite esencial (fracción 2) se analizó con un cromatógrafo de gases
Varian 3400 (Varian, Walnut Creek, California) equipado con un inyector dividido /
dividido 1177 (Varian) y acoplado a un espectrómetro de masas Saturn 2000 (Varian). El
sistema se acopló a un sistema de software de cromatografía-espectrometría de masas
Saturn 2000 (Varian).
Una columna capilar de sílice fundida (30 m por 250 metro m de diámetro interior)Una columna capilar de sílice fundida (30 m por 250 metro m de diámetro interior)Una columna capilar de sílice fundida (30 m por 250 metro m de diámetro interior)
recubierto con un 0.25- metro Se usó una capa m de fase estacionaria SE-54. El helio era elrecubierto con un 0.25- metro Se usó una capa m de fase estacionaria SE-54. El helio era elrecubierto con un 0.25- metro Se usó una capa m de fase estacionaria SE-54. El helio era el
gas portador a 18 lb en2 2 calibre.gas portador a 18 lb en2 2 calibre.gas portador a 18 lb en2 2 calibre.gas portador a 18 lb en2 2 calibre.
Se prepararon soluciones de 500 mg / kg disolviendo los extractos de fluido
supercrítico en acetona. Se inyectaron tres microlitros de cada solución en un modo
dividido (relación de división 1:10) a 200 8 C. La temperatura del horno se programódividido (relación de división 1:10) a 200 8 C. La temperatura del horno se programódividido (relación de división 1:10) a 200 8 C. La temperatura del horno se programó
desde 40 8 C (10 minutos con-desde 40 8 C (10 minutos con-desde 40 8 C (10 minutos con-
temperatura constante) a 250 8 C a las 5 8 C / min; La temperatura final se mantuvo durantetemperatura constante) a 250 8 C a las 5 8 C / min; La temperatura final se mantuvo durantetemperatura constante) a 250 8 C a las 5 8 C / min; La temperatura final se mantuvo durantetemperatura constante) a 250 8 C a las 5 8 C / min; La temperatura final se mantuvo durantetemperatura constante) a 250 8 C a las 5 8 C / min; La temperatura final se mantuvo durante
10 minutos.
Se usó un espectrómetro de masas (EI 70 eV) con un retraso de disolvente de 5
minutos y con un rango de masa de 45 a 650 unidades de masa atómica. Los compuestos
se identificaron tentativamente comparando los espectros con los almacenados en una
biblioteca general (Instituto Nacional de Estándares y Tecnología). Algunos compuestos
también se identificaron comparando el tiempo de retención y los espectros con los de los
patrones inyectados en las mismas condiciones.
Cepas microbianas. Las fracciones ricas en aceites esenciales SFE y lasCepas microbianas. Las fracciones ricas en aceites esenciales SFE y las
sustancias puras se probaron individualmente contra un panel de microorganismos,
incluidos Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonasincluidos Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonasincluidos Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonasincluidos Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonasincluidos Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonasincluidos Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas
aeruginosa ATCC 10145,aeruginosa ATCC 10145,
Escherichia coli ATCC 11775, Candida albicans ATCC 60193, y AspergillusEscherichia coli ATCC 11775, Candida albicans ATCC 60193, y AspergillusEscherichia coli ATCC 11775, Candida albicans ATCC 60193, y AspergillusEscherichia coli ATCC 11775, Candida albicans ATCC 60193, y AspergillusEscherichia coli ATCC 11775, Candida albicans ATCC 60193, y Aspergillus
niger ATCC 16404.niger ATCC 16404.
Los cultivos de cepas bacterianas se mantuvieron en agar nutritivo a 4ºC. 8 C, con laLos cultivos de cepas bacterianas se mantuvieron en agar nutritivo a 4ºC. 8 C, con laLos cultivos de cepas bacterianas se mantuvieron en agar nutritivo a 4ºC. 8 C, con la
excepción de S. aureus ( Trypticase agar de soja). C. albicans se mantuvo en agarexcepción de S. aureus ( Trypticase agar de soja). C. albicans se mantuvo en agarexcepción de S. aureus ( Trypticase agar de soja). C. albicans se mantuvo en agarexcepción de S. aureus ( Trypticase agar de soja). C. albicans se mantuvo en agarexcepción de S. aureus ( Trypticase agar de soja). C. albicans se mantuvo en agar
Sabouraud dextrosa a las 4 8 C. A. nigerSabouraud dextrosa a las 4 8 C. A. nigerSabouraud dextrosa a las 4 8 C. A. nigerSabouraud dextrosa a las 4 8 C. A. niger
Se obtuvieron esporas in vitro de cultivos monoconidiales después de la incubación (7 días,
24 8 C) en agar de dextrosa de patata, cosechado en agua destilada estéril que contiene24 8 C) en agar de dextrosa de patata, cosechado en agua destilada estéril que contiene24 8 C) en agar de dextrosa de patata, cosechado en agua destilada estéril que contiene
0.1% de Tween 80, y almacenado a 4 8 C hasta que se use como inóculo. Se usaron cepas0.1% de Tween 80, y almacenado a 4 8 C hasta que se use como inóculo. Se usaron cepas0.1% de Tween 80, y almacenado a 4 8 C hasta que se use como inóculo. Se usaron cepas
microbianas cultivadas durante la noche a la temperatura óptima en caldo de dextrosa
Mueller-Hinton o Sabouraud para las pruebas antimicrobianas.
Método de difusión de disco. Los extractos de plantas secas o sustancias purasMétodo de difusión de disco. Los extractos de plantas secas o sustancias puras
(estándares) se disolvieron en etanol hasta una concentración final de 36 mg / ml. Se
empleó el método de difusión en disco para la determinación de las actividades
antimicrobianas de los extractos.
(15). Brevemente, una suspensión del microorganismo probado (0.1 ml de 10 7 7 UFC / ml(15). Brevemente, una suspensión del microorganismo probado (0.1 ml de 10 7 7 UFC / ml(15). Brevemente, una suspensión del microorganismo probado (0.1 ml de 10 7 7 UFC / ml(15). Brevemente, una suspensión del microorganismo probado (0.1 ml de 10 7 7 UFC / ml
para bacterias y 0.1 ml de 10 6 6 UFC / ml para levaduras y hongos) se extendió sobre laspara bacterias y 0.1 ml de 10 6 6 UFC / ml para levaduras y hongos) se extendió sobre laspara bacterias y 0.1 ml de 10 6 6 UFC / ml para levaduras y hongos) se extendió sobre las
placas de medios sólidos (agar Mueller-Hinton para bacterias, agar Sabourard dextrosa para
levaduras y agar papa dextrosa para hongos). Los discos de papel de filtro (13 mm de
diámetro) se impregnaron con 200 metro l del extracto o las sustancias puras y luego sediámetro) se impregnaron con 200 metro l del extracto o las sustancias puras y luego sediámetro) se impregnaron con 200 metro l del extracto o las sustancias puras y luego se
coloca en las placas inoculadas. Estas placas, después de quedarse a las 4 8 C durante 2 h,coloca en las placas inoculadas. Estas placas, después de quedarse a las 4 8 C durante 2 h,coloca en las placas inoculadas. Estas placas, después de quedarse a las 4 8 C durante 2 h,
se incubaron a su temperatura óptima durante 24 h para bacterias y 48 h para levaduras y
hongos. Los diámetros de la zona de inhibición se midieron en milímetros. Los controles
negativos se prepararon con etanol, el disolvente utilizado para disolver tanto el extracto
vegetal como las sustancias puras. Cloranfenicol (30 metro g por disco) y anfotericina B (50 metrovegetal como las sustancias puras. Cloranfenicol (30 metro g por disco) y anfotericina B (50 metrovegetal como las sustancias puras. Cloranfenicol (30 metro g por disco) y anfotericina B (50 metrovegetal como las sustancias puras. Cloranfenicol (30 metro g por disco) y anfotericina B (50 metro
g por disco) (Sigma) se utilizaron como patrones de referencia positivos para determinar la
sensibilidad de las especies microbianas evaluadas. Todas las pruebas fueron realizadas por
triplicado.
Determinación de la MIC y mínima concentración bactericida y
fungicida. El método de dilución del caldo ( 14) se usó para determinar lafungicida. El método de dilución del caldo ( 14) se usó para determinar lafungicida. El método de dilución del caldo ( 14) se usó para determinar lafungicida. El método de dilución del caldo ( 14) se usó para determinar la
concentración inhibitoria mínima. Diferir de-
Descargadodesdehttp://meridian.allenpress.com/jfp/article-pdf/68/4/790/1676224/0362-028x-68_4_790.pdfporinvitadoel21demayode2020

3. J. Food Prot., Vol. 68, N ° 4792 SANTOYO Y AL.
diluciones ent en medios de cultivo (caldo Mueller-Hinton para bacterias y caldo
Sabourard dextrosa para levaduras y hongos) que contienen
Se preparó Tween 20 al 0,5% a partir de un extracto inicial o una solución de sustancia pura de
36 mg / ml. Una suspensión bacteriana (100 metro l, 10 7 736 mg / ml. Una suspensión bacteriana (100 metro l, 10 7 736 mg / ml. Una suspensión bacteriana (100 metro l, 10 7 736 mg / ml. Una suspensión bacteriana (100 metro l, 10 7 7
UFC / ml) u suspensión de hongos (100 metro l, 10 6 6 UFC / ml) se inoculó en 10 mlUFC / ml) u suspensión de hongos (100 metro l, 10 6 6 UFC / ml) se inoculó en 10 mlUFC / ml) u suspensión de hongos (100 metro l, 10 6 6 UFC / ml) se inoculó en 10 mlUFC / ml) u suspensión de hongos (100 metro l, 10 6 6 UFC / ml) se inoculó en 10 mlUFC / ml) u suspensión de hongos (100 metro l, 10 6 6 UFC / ml) se inoculó en 10 ml
de caldo de cultivo que contenía diferentes concentraciones de los extractos. Los
tubos se incubaron a la temperatura óptima durante 24 h para bacterias y 48 h para
levaduras y hongos. Después de la incubación, se determinó la MIC de cada extracto
mediante inspección visual de los tubos. El MIC del ingrediente activo se detectó por
falta de turbidez visual. La concentración mínima de bactericida y fungicida (MBC) se
determinó con subcultivos hechos de tubos transparentes que no mostraron ningún
crecimiento. Cada prueba se realizó por triplicado y se repitió dos veces.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Las extracciones de hojas de romero por dióxido de carbono supercrítico
se llevaron a cabo bajo diferentes condiciones de extracción. Además, la planta
piloto utilizada en este trabajo permitió obtener dos fracciones, dependiendo de
las diferentes condiciones de presión y temperatura en los recipientes de
separación. Las condiciones de separación fraccionada probadas cubrieron un
rango de densidad de 0,709 a 0,173 g / ml en el primer separador, mientras que
se logró una etapa de descompresión total en el segundo separador. Como se ha
descrito anteriormente ( 9, 22)descrito anteriormente ( 9, 22)
modificando las condiciones de fraccionamiento, es posible obtener selectivamente
extractos de diferentes características en términos de actividad y composición in
vitro. En este estudio, las fracciones ricas en aceites esenciales se precipitaron
selectivamente, como se esperaba, en el segundo separador, por lo que se puede
analizar su composición y actividad antimicrobiana.
Composición química de las fracciones ricas en aceites esenciales. LaComposición química de las fracciones ricas en aceites esenciales. La
composición de las fracciones ricas en aceites esenciales obtenidas mediante SFE se
analizó mediante cromatografía de gases - espectroscopía de masas y se informó en
la Tabla 2. En total, se han identificado 33 compuestos (80,5% del aceite total). Los
principales componentes de estas fracciones (excepto para el experimento
7) fueron una- pineno (7.07 a 20.95%), 1,8-cineol (18.03 a7) fueron una- pineno (7.07 a 20.95%), 1,8-cineol (18.03 a7) fueron una- pineno (7.07 a 20.95%), 1,8-cineol (18.03 a
22.23%), alcanfor (17.88 a 24.57%), verbenona (11.98 a
16,00%) y borneol (5,66 a 7,70%). Esta composición química no mostró
diferencias importantes con respecto a las reportadas previamente para el
aceite esencial de romero ( 12, 18). Por otro lado, el compuesto principal de laaceite esencial de romero ( 12, 18). Por otro lado, el compuesto principal de laaceite esencial de romero ( 12, 18). Por otro lado, el compuesto principal de la
fracción experimento 7 (etanol al 0%, 15 MPa, 60 8 C) fue una- pinenofracción experimento 7 (etanol al 0%, 15 MPa, 60 8 C) fue una- pinenofracción experimento 7 (etanol al 0%, 15 MPa, 60 8 C) fue una- pinenofracción experimento 7 (etanol al 0%, 15 MPa, 60 8 C) fue una- pinenofracción experimento 7 (etanol al 0%, 15 MPa, 60 8 C) fue una- pineno
(70,60%); Se detectaron menos compuestos en esta fracción.
Para evaluar la calidad de los aceites esenciales obtenidos bajo las
diferentes condiciones, los compuestos identificados se agruparon en
hidrocarburos monoterpenos, terpenos oxigenados e hidrocarburos
sesquiterpenos (Fig. 1). En general, la cantidad de terpenos oxigenados se ha
utilizado como parámetro de calidad de los aceites esenciales obtenidos. De
ese modo, el porcentaje de terpenos oxigenados en las fracciones obtenidas
en este trabajo osciló entre 64.42 y 77.75% (excepto en el experimento 7).
Estos resultados están de acuerdo con los obtenidos por Reverchon y
Senatore ( 21) cuya fracción de terpeno oxigenada con aceite de romero,Senatore ( 21) cuya fracción de terpeno oxigenada con aceite de romero,Senatore ( 21) cuya fracción de terpeno oxigenada con aceite de romero,
obtenida por SFE con separación fraccionada, fue del 74,5% de los
compuestos oxigenados. Sin embargo, cuando estos autores analizaron la
rosa-
En el aceite esencial de María obtenido por destilación al vapor, la cantidad de
terpenos oxigenados solo representaba el 61,3%.
En este trabajo, la fracción precipitó selectivamente en el segundo
separador en el experimento 4 (con 4% de etanol como modificador, 25 MPa
y 60 8 C) mostró la mayor cantidad de terpenos oxigenados (77.75%) y, eny 60 8 C) mostró la mayor cantidad de terpenos oxigenados (77.75%) y, eny 60 8 C) mostró la mayor cantidad de terpenos oxigenados (77.75%) y, en
consecuencia, la mejor calidad. Cuando la temperatura de extracción
disminuyó de 60 a 40 8 C (experimento 3) el porcentaje de compuestosdisminuyó de 60 a 40 8 C (experimento 3) el porcentaje de compuestosdisminuyó de 60 a 40 8 C (experimento 3) el porcentaje de compuestos
oxigenados también disminuyó a 73.36%. Entre todas las condiciones
probadas, la extracción se realizó a 15 MPa y 60 8 C en ausencia deprobadas, la extracción se realizó a 15 MPa y 60 8 C en ausencia deprobadas, la extracción se realizó a 15 MPa y 60 8 C en ausencia de
codisolvente (experimento 7) produjo una fracción de aceite esencial muy
diferente, sin terpenos oxigenados y con una alta cantidad de hidrocarburos
monoterpenos.
Actividad antimicrobiana de las fracciones ricas en aceites esenciales. SeisActividad antimicrobiana de las fracciones ricas en aceites esenciales. Seis
especies microbianas diferentes, incluidas las bacterias grampositivas ( S. aureus yespecies microbianas diferentes, incluidas las bacterias grampositivas ( S. aureus yespecies microbianas diferentes, incluidas las bacterias grampositivas ( S. aureus y
B. subtilis), Bacterias Gram-negativo ( E. coli y P. aeruginosa), una levadura C.B. subtilis), Bacterias Gram-negativo ( E. coli y P. aeruginosa), una levadura C.B. subtilis), Bacterias Gram-negativo ( E. coli y P. aeruginosa), una levadura C.B. subtilis), Bacterias Gram-negativo ( E. coli y P. aeruginosa), una levadura C.B. subtilis), Bacterias Gram-negativo ( E. coli y P. aeruginosa), una levadura C.B. subtilis), Bacterias Gram-negativo ( E. coli y P. aeruginosa), una levadura C.B. subtilis), Bacterias Gram-negativo ( E. coli y P. aeruginosa), una levadura C.
albicans),
y un hongo A. niger), se utilizaron para detectar la posible actividady un hongo A. niger), se utilizaron para detectar la posible actividady un hongo A. niger), se utilizaron para detectar la posible actividad
antimicrobiana de los extractos de fluidos supercríticos de romero (fracciones
ricas en aceites esenciales). La actividad antimicrobiana de estas fracciones
contra los microorganismos estudiados y su efectividad se evaluaron
cualitativa y cuantitativamente por la presencia o ausencia de zonas de
inhibición, incluido el diámetro de la zona y los MBC. Los resultados se dan
en la Tabla 3.
Todas las fracciones ricas en aceites esenciales mostraron actividad
antimicrobiana contra todos los microorganismos probados, con zonas de
inhibición y MBC en el rango de 17 a 33 mm y
2,25 a 0,25 mg / ml, respectivamente. La fracción más activa de todos los
microorganismos examinados fue la obtenida en el experimento 4 (21 a 33
mm, 2 a 0.25 mg / ml), seguida de fracciones de los experimentos 1, 2, 3, 5 y
6. No hubo diferencias significativas en los antimicrobianos. Se detectó
actividad contra los diferentes microorganismos entre estas fracciones (1, 2,
3, 5 y 6). Parece que una combinación de altas densidades de extracción con
bajas densidades de fraccionamiento en el primer separador proporcionó los
mejores resultados en términos de actividad antimicrobiana. Esto podría explicarse
por la precipitación selectiva en el primer separador, con la fracción que contiene
compuestos distintos de los aceites esenciales (ceras, resina) y un aceite esencial
puro en el segundo separador, con la fracción que contiene solo los compuestos
responsables del aroma de romero. Por otro lado, la fracción del experimento 7
mostró la actividad antimicrobiana más débil en todos los casos. Este
comportamiento puede explicarse por una densidad de extracción que fue la más
baja utilizada sin modificador.
S. aureus fue el microorganismo más sensible, con zonas de inhibiciónS. aureus fue el microorganismo más sensible, con zonas de inhibición
máxima (27 a 33 mm) y los MBC más bajos (0,75 a 0,25 mg / ml), mientras
que el hongo menos susceptible fue el hongo A. niger. C. albicans Tambiénque el hongo menos susceptible fue el hongo A. niger. C. albicans Tambiénque el hongo menos susceptible fue el hongo A. niger. C. albicans También
fue bastante sensible a las fracciones de romero SFE (19 a 25 mm, 1,85 a
1,5 mg / ml).
Los resultados obtenidos en este estudio están de acuerdo con los de
Pintore et al. ( 18) quien informó que R. of fi cinalisPintore et al. ( 18) quien informó que R. of fi cinalisPintore et al. ( 18) quien informó que R. of fi cinalisPintore et al. ( 18) quien informó que R. of fi cinalis
L. aceite esencial mostró mayor actividad antimicrobiana contra
S. aureus que en contra E. coli y P. aeruginosa, aunque los MIC reportadosS. aureus que en contra E. coli y P. aeruginosa, aunque los MIC reportadosS. aureus que en contra E. coli y P. aeruginosa, aunque los MIC reportadosS. aureus que en contra E. coli y P. aeruginosa, aunque los MIC reportadosS. aureus que en contra E. coli y P. aeruginosa, aunque los MIC reportadosS. aureus que en contra E. coli y P. aeruginosa, aunque los MIC reportados
por estos autores fueron mucho más altos que los obtenidos en este trabajo.
Esta discrepancia puede ser ex
Descargadodesdehttp://meridian.allenpress.com/jfp/article-pdf/68/4/790/1676224/0362-028x-68_4_790.pdfporinvitadoel21demayode2020

4. J. Food Prot., Vol. 68, N ° 4 Actividad antimicrobiana de extractos de romero SFE 793
TABLA 2. Cromatografía de gases: identificación de espectroscopía de masas y contribución del área de pico (%) de compuestos encontrados en los diferentes extractos de SFE de Rosmarinus of fiTABLA 2. Cromatografía de gases: identificación de espectroscopía de masas y contribución del área de pico (%) de compuestos encontrados en los diferentes extractos de SFE de Rosmarinus of fiTABLA 2. Cromatografía de gases: identificación de espectroscopía de masas y contribución del área de pico (%) de compuestos encontrados en los diferentes extractos de SFE de Rosmarinus of fi
cinalis L.cinalis L.
Compuesto
No.
Retencion
tiempo
(min) Compuesto
Experimentar unaExperimentar una
1 2 3 4 4 5 5 6 6 7 7
1
2
3
4
5
8.33
1,5
14,28
16,6
16,85
una- Pinenouna- Pineno
sol- Terpinenesol- Terpinene
Camphene
3-Octanone
si- Pinenosi- Pineno
8.11
4.84
2,24
1,83
0,48
7.07
7.83
2,88
2,22
0,53
13,44
0,49
-
0,56
0,56
8.28
-
-
0,45
0,90
20,95
0,35
-
1.14
-
19,67
0,75
-
0,93
-
70,60
-
2,60
-
-
6
7
8
9
10
17.3
17,7
18,1
18,37
18,68
Sabinene
una- Terpineneuna- Terpinene
si- Cimenosi- Cimeno
limoneno
1,8-cineol
0.28
0,32
0,91
2,03
18,03
0,50
0,38
1.09
2,43
21,28
-
-
0,55
0,88
21,98
-
-
0,37
0,42
19,07
-
-
0.28
0,86
22,23
-
-
-
0,73
21,68
-
-
-
-
-
11
12
13
14
20,87
21,55
22,32
23,08
una- Terpineneuna- Terpinene
Linalool
Biciclo [3,1,0] hexano,
6-iso-propilideno alcanfor
0,38
1,47
0,32
18,64
0,42
1,27
0,33
17,88
-
1,55
-
21,88
-
1,89
0,42
24,57
-
1,38
-
20,95
-
1,42
-
21.05
-
-
-
-
16
17
18
19
20
23,58
23,87
24,27
24,53
24,75
Isocampinona
borneol
terpinen-4-ol
pags- Cimen-9-olpags- Cimen-9-ol
una- Terpineoluna- Terpineol
0.25
6.18
1,70
0,31
4.50
0,22
5,66
1,39
0.24
3.72
-
6.79
1,64
-
4.38
0,14
7,70
1,93
0,36
4.91
-
6.08
1,49
-
3.83
-
6.45
1,49
-
4.04
-
-
-
-
-
21
22
23
24
25
25,52
26,4
27,6
30
31,4
Verbenona
Desconocida 1
Timol
una- Cubebeneuna- Cubebene
trans- cariofilenotrans- cariofileno
13,63
0,14
0,98
0.25
6.03
11,98
0,12
0,78
-
4.90
14,31
-
0,83
-
5.30
16.00
0,17
0,99
-
6.24
12,52
-
0,76
-
4.67
13,40
-
0,76
-
4.80
1,50
-
-
-
0,92
26
27
28
29
30
32,4
32,8
33
33,3
34,1
una- Cariofilenouna- Cariofileno
sol- Cuparenosol- Cupareno
Cadideno
si- Cubebenesi- Cubebene
re- Cadidenore- Cadideno
2,23
0,12
0,38
-
0,43
1,80
-
0,29
-
0,35
2.11
-
-
-
-
2,33
-
-
-
0,47
1,76
-
-
-
-
1,85
-
-
-
-
-
-
-
1.10
-
31
32
33
34
35
35,8
36,5
37,1
37,4
37,8
Desconocido 2
Desconocido 3
si- Cedrenosi- Cedreno
si- Guaienesi- Guaiene
Cadalene
0,39
0,34
0,34
0,41
0,30
0,17
0.28
0,32
0,32
0,31
0,50
-
-
-
1.13
0,40
0,41
0,29
0,35
0,13
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
1,15
1,17
2,59
36
37
38
39
40
41
38,1
43,2
43,7
45,9
462
469
Desconocido 4
Desconocido 5
Desconocido 6
Desconocido 7
Abietatriene
Desconocido 8
0,15
-
0,41
0,18
0,36
0,13
0.25
-
0,51
-
0,30
-
-
-
0,88
-
0,21
-
-
-
0,43
-
0,37
-
-
-
0,75
-
-
-
-
-
0,98
-
-
-
1.07
0,98
8.77
2,38
5.16
-
una -, no detectado.una -, no detectado.
FIGURA 1. Distribución de las diferentes clases de compuestos en fracciones de romeroFIGURA 1. Distribución de las diferentes clases de compuestos en fracciones de romero
ricas en aceites esenciales SFE.
explicado por las diferencias tanto en el origen del romero como en el método
de extracción; obtuvieron el aceite esencial de romero por hidrodestilación, lo
que resultó en la degradación térmica asociada con el proceso.
Para conocer los componentes de los extractos responsables de la
actividad antimicrobiana del romero, los cinco componentes principales de las
fracciones ricas en aceites esenciales ( una- pineno, 1,8-cineol, alcanfor,fracciones ricas en aceites esenciales ( una- pineno, 1,8-cineol, alcanfor,fracciones ricas en aceites esenciales ( una- pineno, 1,8-cineol, alcanfor,
borneol y verbenona) también se examinaron para determinar la actividad
antimicrobiana en las mismas condiciones (Tabla 3). Las cinco sustancias
mostraron actividad antimicrobiana contra todos los microorganismos
probados, aunque entre ellos, el borneol fue el más efectivo, seguido por el
alcanfor y la verbenona. Mientras tanto, 1,8-cineol
Descargadodesdehttp://meridian.allenpress.com/jfp/article-pdf/68/4/790/1676224/0362-028x-68_4_790.pdfporinvitadoel21demayode2020

5. J. Food Prot., Vol. 68, N ° 4794 SANTOYO Y AL.
TABLA 3. Actividades antimicrobianas de diferentes extractos de SFE de romero y estándares unaTABLA 3. Actividades antimicrobianas de diferentes extractos de SFE de romero y estándares unaTABLA 3. Actividades antimicrobianas de diferentes extractos de SFE de romero y estándares una
Muestra
E. coli
DD MBC
B. subtilis
DD MBC
P. aeruginosa
DD MBC
S. aureus
DD MBC
C. albicans
DD MBC
A. niger
DD MBC
Experimento 1
Experimento 2
Experimento 3
Experimento 4
Experimento 5
18
19
20
23
18
2
1,85
1,85
1.75 2
17
18
18
21
18
2,15
2.15 2
1,85
2,15 19 19 21 2320
1,85
1,85
1,85
1,75
1,85 29 29 30 3330
0,5
0,5
0,5
0.25
0,5
21
22
23
25
23
1,75
1,75
1,75
1,5
1,75 19 19 18 2220
2,25
2,25
2.25 2
2,15
Experimento 6
Experimento 7
Verbenona
Alcanfor Borneol
19
17
23
23
25
1,85
2,15
1.6
1.6
1,25 19 17 21 2225
2,15
2,25
1,85
1,75
1,25 21 19 23 2224
1.85 2
1.6
1,75
1,5
29
27
24
26
32
0,5
0,75
1,25
0,75
0.25 23 19 24 2628
1,75
1,85
1,25
1,25
. 75
19
18
19
20
23
2,25
2,25
2,25
2,15
1,85
1,8-cineol
una- Etanol deuna- Etanol de
pineno
Antibiótico de referencia
20
19
15
27
1,85
2,15
-
10
20
19
15
25
2
2,25
-
15
21
19
16
21
1,75
1,85
-
100
24
25
17
28
1,25
1,25
-
10
24
22
17
24
1,5
1,75
-
100
18
19
15
22
2,25
2,25
-
150
una DD, método de difusión de disco recomendado por NCCLS. El diámetro de la inhibición de zona (mm) incluye el diámetro del disco de 13 mm. Los MBC son miligramos poruna DD, método de difusión de disco recomendado por NCCLS. El diámetro de la inhibición de zona (mm) incluye el diámetro del disco de 13 mm. Los MBC son miligramos por
mililitro para muestras y microgramos por mililitro para el antibiótico.
y una- El pineno mostró un efecto antimicrobiano más débil contra todos losy una- El pineno mostró un efecto antimicrobiano más débil contra todos losy una- El pineno mostró un efecto antimicrobiano más débil contra todos los
microorganismos probados.
Estos datos parecen indicar que la actividad antimicrobiana de las
fracciones de SFE del romero podría estar asociada con la presencia de
estas cinco sustancias y muestran una correlación entre el efecto
antimicrobiano de las diferentes fracciones y su composición química. De
esa manera, la fracción del experimento 7, con una alta cantidad de una- pinenoesa manera, la fracción del experimento 7, con una alta cantidad de una- pinenoesa manera, la fracción del experimento 7, con una alta cantidad de una- pineno
(70%) y una pequeña cantidad de otros compuestos, mostraron la
actividad antimicrobiana más débil, con un MBC similar al obtenido para
el una- pineno estándar. La fracción más activa (experimento 4) presentóel una- pineno estándar. La fracción más activa (experimento 4) presentóel una- pineno estándar. La fracción más activa (experimento 4) presentó
la mayor cantidad de alcanfor, borneol y verbenona.
Además, S. aureus fue la bacteria más sensible con respecto a una- pineno,Además, S. aureus fue la bacteria más sensible con respecto a una- pineno,Además, S. aureus fue la bacteria más sensible con respecto a una- pineno,Además, S. aureus fue la bacteria más sensible con respecto a una- pineno,Además, S. aureus fue la bacteria más sensible con respecto a una- pineno,
1,8-cineol, alcanfor, borneol y verbenona, con MBC que van de 1 a 0.25 mg
/ ml, aunque el borneol fue la sustancia más activa contra esta bacteria,
seguido por el alcanfor. Estos datos están claramente correlacionados con
los resultados encontrados para las diferentes fracciones de SFE, en las
cuales la fracción del experimento 4 (con la mayor cantidad de alcanfor y
borneol) fue la más activa. Además, como se mostró anteriormente para las
fracciones SFE, el microorganismo menos sensible a estas sustancias puras
fue el hongo A. niger.fue el hongo A. niger.
Como se mencionó, otros investigadores han descrito previamente
actividades antimicrobianas fuertes de borneol y alcanfor ( 17, 24) mientras una-actividades antimicrobianas fuertes de borneol y alcanfor ( 17, 24) mientras una-actividades antimicrobianas fuertes de borneol y alcanfor ( 17, 24) mientras una-actividades antimicrobianas fuertes de borneol y alcanfor ( 17, 24) mientras una-
Se informó que el pineno exhibe una actividad antimicrobiana débil ( 18) OtrosSe informó que el pineno exhibe una actividad antimicrobiana débil ( 18) OtrosSe informó que el pineno exhibe una actividad antimicrobiana débil ( 18) Otros
autores concluyeron que si la contribución de los hidrocarburos terpénicos en
la actividad antimicrobiana no podía excluirse a priori, los terpenos
oxigenados presentaban una actividad mayor ( 3, 11).oxigenados presentaban una actividad mayor ( 3, 11).
Se ha descrito que, en general, el alcance del efecto inhibidor del
aceite puede atribuirse a la presencia de un núcleo aromático que
contiene grupos funcionales polares.
(7)
Como también se puede observar en la Tabla 3, los MBC obtenidos para todos
los extractos son, en general, muy bajos; es decir, los extractos mostraron una alta
eficiencia como antimicrobianos a baja
concentraciones, disminuyendo así los problemas organolépticos asociados con el
uso de estos extractos naturales en diferentes alimentos.
Los datos presentados en este estudio sugieren que todas las fracciones ricas
en aceites esenciales obtenidas por CO supercrítico 2en aceites esenciales obtenidas por CO supercrítico 2
La extracción de hojas de romero podría ser útil en el control efectivo de la
calidad microbiológica de los alimentos, mostrando actividad antimicrobiana
contra un amplio espectro de microorganismos. Entre todas las especies
examinadas, S. aureus, Una de las bacterias grampositivas más comunes queexaminadas, S. aureus, Una de las bacterias grampositivas más comunes queexaminadas, S. aureus, Una de las bacterias grampositivas más comunes que
causan intoxicación alimentaria, fue la más sensible a los extractos de romero
SFE.
En este estudio, desarrollamos un proceso para extraer selectivamente
fracciones ricas en aceites esenciales con el uso de una tecnología
ambientalmente limpia como SFE (las condiciones óptimas de SFE fueron las
del experimento 4: presión de extracción, 25 MPa; temperatura de extracción,
60 8 C; modificador, etanol al 4%; separador 1 presión, 10 MPa; separador 160 8 C; modificador, etanol al 4%; separador 1 presión, 10 MPa; separador 160 8 C; modificador, etanol al 4%; separador 1 presión, 10 MPa; separador 1
temperatura, 60 8 C; separador 2 presión, 2 MPa; separador 2 temperatura, 0 8 C).temperatura, 60 8 C; separador 2 presión, 2 MPa; separador 2 temperatura, 0 8 C).temperatura, 60 8 C; separador 2 presión, 2 MPa; separador 2 temperatura, 0 8 C).temperatura, 60 8 C; separador 2 presión, 2 MPa; separador 2 temperatura, 0 8 C).temperatura, 60 8 C; separador 2 presión, 2 MPa; separador 2 temperatura, 0 8 C).
La fracción recuperada en el segundo separador mostró la mejor actividad
antimicrobiana contra todos los microorganismos probados.
La relación entre la actividad antimicrobiana y la composición química
también se ha demostrado al probar estándares puros de los cinco
componentes principales de las fracciones SFE ( una- pineno, 1,8-cineol,componentes principales de las fracciones SFE ( una- pineno, 1,8-cineol,componentes principales de las fracciones SFE ( una- pineno, 1,8-cineol,
alcanfor, borneol y verbenona). Los resultados mostraron que todos los
componentes presentaban actividad antimicrobiana, siendo el borneol el
más efectivo, seguido de alcanfor y verbenona. Mientras tanto, 1,8-cineol y una-más efectivo, seguido de alcanfor y verbenona. Mientras tanto, 1,8-cineol y una-
El pineno mostró un efecto antimicrobiano más débil. En este estudio,
pudimos verificar que la fracción más activa (correspondiente al experimento
4) también presentó el mayor porcentaje de borneol, alcanfor y verbenona.
Estos resultados confirman el uso potencial de extractos de SFE de R. of fi cinalis L.Estos resultados confirman el uso potencial de extractos de SFE de R. of fi cinalis L.Estos resultados confirman el uso potencial de extractos de SFE de R. of fi cinalis L.
como conservantes de alimentos naturales en la industria alimentaria. Debido a que los
aceites esenciales de romero se clasifican como GRAS, podrían representar una
alternativa viable y segura a los antimicrobianos sintéticos.
Descargadodesdehttp://meridian.allenpress.com/jfp/article-pdf/68/4/790/1676224/0362-028x-68_4_790.pdfporinvitadoel21demayode2020

6. J. Food Prot., Vol. 68, N ° 4 Actividad antimicrobiana de extractos de romero SFE 795
EXPRESIONES DE GRATITUD
Esta investigación fue apoyada por el Ministerio de Ciencia y Tecnología.
´a, Proyecto AGL2000-0448. S. Cavero agradece al Ministerio de Educación y Cultura
por su beca.
Referencias
1. Baratta, MT, HJT Dorman, SG Decanos, AC Figueiredo, J.
G. Barroso y G. Ruberto. 1998. Propiedades antimicrobianas y antioxidantes de algunos
aceites esenciales comerciales. Sabor Fragr. J. 13: 235–244.aceites esenciales comerciales. Sabor Fragr. J. 13: 235–244.aceites esenciales comerciales. Sabor Fragr. J. 13: 235–244.
2. Bicchi, C., A. Binello y P. Rubinolo. 2000. Determinación de antioxidantes fenólicos de
diterpeno en romero ( Rosmarinus of fi cinalis L.) con diferentes métodos dediterpeno en romero ( Rosmarinus of fi cinalis L.) con diferentes métodos dediterpeno en romero ( Rosmarinus of fi cinalis L.) con diferentes métodos de
extracción y análisis. Fitoquímica Anal.extracción y análisis. Fitoquímica Anal.
11: 236–242.
3. Caccioni, DRL y M. Guizzardi. 1994. Inhibición de la germinación y crecimiento de hongos
patógenos postcosecha de frutas y verduras por componentes de aceites esenciales. J. Res.patógenos postcosecha de frutas y verduras por componentes de aceites esenciales. J. Res.
De aceites esenciales. 6: 173-179.De aceites esenciales. 6: 173-179.
4. Chang, H.-W. 1995. Efecto antibacteriano de especias y verduras.
Ind. De Alimentos (ROC) 27: 53–61.Ind. De Alimentos (ROC) 27: 53–61.
5. Dorman, HJD y SG Decanos. 2000. Agentes antimicrobianos de plantas: actividad
antibacteriana de aceites vegetales volátiles. J. Appl. Microbiolantibacteriana de aceites vegetales volátiles. J. Appl. Microbiol
88: 308–316.
6. Elgayyar, M., FA Draughon, DA Golden y JR Mount. 2001. Actividad antimicrobiana de
aceites esenciales de plantas contra microorganismos patógenos y saprófitos
seleccionados. J. Food Prot. 64: 1019–seleccionados. J. Food Prot. 64: 1019–seleccionados. J. Food Prot. 64: 1019–
1024.
7. Farag, RS, ZY Daw, FM Hewedi y GSA El-Baroty.
1989. Actividad antimicrobiana de algunos aceites esenciales de especias egipcias.
J. Food Prot. 52: 665–667.J. Food Prot. 52: 665–667.
8) Iban˜ez, E., A. Kuba´tova´, FJ Sen˜orans, S. Cavero, G. Reglero y
SB Hawthorne. 2003. Extracción subcrítica con agua de compuestos antioxidantes de
plantas de romero. J. Agric. Food Chem. 51: 375–plantas de romero. J. Agric. Food Chem. 51: 375–plantas de romero. J. Agric. Food Chem. 51: 375–
382.
9) Iban˜ez, E., A. Oca, G. De Murga, S. Lopez-Sebastian, J. Tabera, y
G. Reglero. 1999. Extracción de fluido supercrítico y fraccionamiento de diferentes
plantas de romero preprocesadas. J. Agric. Food Chem. 47: 1400-1404.plantas de romero preprocesadas. J. Agric. Food Chem. 47: 1400-1404.plantas de romero preprocesadas. J. Agric. Food Chem. 47: 1400-1404.
10. Kabara, JJ 1991. Fenoles y quelantes, p. 200-214. En NJ Rusell y GW Gould (ed.),10. Kabara, JJ 1991. Fenoles y quelantes, p. 200-214. En NJ Rusell y GW Gould (ed.),10. Kabara, JJ 1991. Fenoles y quelantes, p. 200-214. En NJ Rusell y GW Gould (ed.),
Conservantes de alimentos. Blackie, Londres.
11. Knobloch, K., A. Pauli, B. Iberl, N. Weis y H. Weigand. 1989. Propiedades antibacterianas y
antifúngicas de los componentes del aceite esencial.
J. Res. De aceites esenciales. 1: 119-128.J. Res. De aceites esenciales. 1: 119-128.
12. Lawrence, BM 1995. Progreso en el aceite esencial: aceite de romero. Por-12. Lawrence, BM 1995. Progreso en el aceite esencial: aceite de romero. Por-
fum. Sabor 20: 47–54.fum. Sabor 20: 47–54.
13. Marongiu, B., A. Piras, F. Pani, S. Porcedda y M. Ballero. 2003. Extracción, separación
y aislamiento de aceites esenciales de matrices naturales por CO supercrítico. 2) Sabory aislamiento de aceites esenciales de matrices naturales por CO supercrítico. 2) Sabory aislamiento de aceites esenciales de matrices naturales por CO supercrítico. 2) Sabor
Fragr. J. 18: 505–509.Fragr. J. 18: 505–509.
14. Murray, PR, EJ Baron, MA Pfaller, FC Tenover y RH Yolke. 1995. Manual de
microbiología clínica, 6ª ed. Mosby Year Book, Londres.
15. NCCLS. 1997. Normas de rendimiento para la prueba de susceptibilidad a los discos
antimicrobianos, 6ª ed. Norma aprobada M2-A6. NCCLS, Wayne, Pa.
16. Pandit, VA y LA Shelef. 1994. Sensibilidad de Listeria mono-16. Pandit, VA y LA Shelef. 1994. Sensibilidad de Listeria mono-
cytogenes al romero ( Rosmrinus of fi cinalis L.). Microbiol alimentario.cytogenes al romero ( Rosmrinus of fi cinalis L.). Microbiol alimentario.cytogenes al romero ( Rosmrinus of fi cinalis L.). Microbiol alimentario.cytogenes al romero ( Rosmrinus of fi cinalis L.). Microbiol alimentario.cytogenes al romero ( Rosmrinus of fi cinalis L.). Microbiol alimentario.
11: 57-63.
17. Pattnaik, S., VR Subramanyam, M. Bapaji y CR Kole. 1997. Actividad antibacteriana y
antifúngica de componentes aromáticos de aceites esenciales. Microbios 89: 39-46.antifúngica de componentes aromáticos de aceites esenciales. Microbios 89: 39-46.antifúngica de componentes aromáticos de aceites esenciales. Microbios 89: 39-46.
18. Pintore, G., M. Usai, P. Bradesi, C. Juliano, G. Boatto, F. Tomi, M. Chessa, R. Cerri y
J. Casanova. 2002. Composición química y actividad antimicrobiana de RosmarinusJ. Casanova. 2002. Composición química y actividad antimicrobiana de Rosmarinus
of fi cinalis L. aceites de Sardica y Córcega. Sabor Fragr. J. 17: 15-19.of fi cinalis L. aceites de Sardica y Córcega. Sabor Fragr. J. 17: 15-19.of fi cinalis L. aceites de Sardica y Córcega. Sabor Fragr. J. 17: 15-19.of fi cinalis L. aceites de Sardica y Córcega. Sabor Fragr. J. 17: 15-19.
19. Rauha, J.-P., S. Remes, M. Heinonen, A. Hopia, M. Ka¨hko¨nen, T. Kujala, K. Pihlaja, H.
Vuorela y P. Vourela. 2000. Efectos antimicrobianos de extractos de plantas finlandesas
que contienen flavonoides y otros compuestos fenólicos. En t. J. Food Microbiol. 56: 3–12.que contienen flavonoides y otros compuestos fenólicos. En t. J. Food Microbiol. 56: 3–12.que contienen flavonoides y otros compuestos fenólicos. En t. J. Food Microbiol. 56: 3–12.
20. Reverchon, E. 1997. Extracción de fluidos supercríticos y fraccionamiento de aceites esenciales y
productos relacionados. J. Supercrit. Fluidos 10: 1–37.productos relacionados. J. Supercrit. Fluidos 10: 1–37.productos relacionados. J. Supercrit. Fluidos 10: 1–37.
21. Reverchon, E. y F. Senatore. 1992. Aislamiento de aceite de romero: comparación
entre hidrodestilación y CO supercrítico 2 extracción.entre hidrodestilación y CO supercrítico 2 extracción.entre hidrodestilación y CO supercrítico 2 extracción.
Sabor Fragr. J. 7: 227–230.Sabor Fragr. J. 7: 227–230.
22. Sen˜orans, FJ, E. Iban˜ez, S. Cavero, J. Tabera y G. Reglero.
2000. Análisis LC / MS de extractos de fluidos supercríticos de plantas de romero. J.2000. Análisis LC / MS de extractos de fluidos supercríticos de plantas de romero. J.
Chromatogr. UNA 870: 491–499.Chromatogr. UNA 870: 491–499.
23. Slamenova´, D., K. Kuboskova´, E. Horva´thova´ y S. Robichova´.
2002. Reducción estimulada por romero de roturas de cadena de ADN y sitios sensibles a
FPG en células de mamífero tratadas con H 2 O 2 o azul de metileno excitado con luz visible. CáncerFPG en células de mamífero tratadas con H 2 O 2 o azul de metileno excitado con luz visible. CáncerFPG en células de mamífero tratadas con H 2 O 2 o azul de metileno excitado con luz visible. CáncerFPG en células de mamífero tratadas con H 2 O 2 o azul de metileno excitado con luz visible. CáncerFPG en células de mamífero tratadas con H 2 O 2 o azul de metileno excitado con luz visible. CáncerFPG en células de mamífero tratadas con H 2 O 2 o azul de metileno excitado con luz visible. Cáncer
Lett. 177: 145-153.Lett. 177: 145-153.
24. Tabanca, N., N. Kirimer, B. Demirci, F. Demirci y KHC Bac¸er.
2001. Composición y actividad antibacteriana de los aceites esenciales de
Micromeria cristata subsp. phyrgia y la distribución enantiomérica de borneol. J.Micromeria cristata subsp. phyrgia y la distribución enantiomérica de borneol. J.Micromeria cristata subsp. phyrgia y la distribución enantiomérica de borneol. J.Micromeria cristata subsp. phyrgia y la distribución enantiomérica de borneol. J.Micromeria cristata subsp. phyrgia y la distribución enantiomérica de borneol. J.
Agric. Food Chem. 49: 4300-4303.Agric. Food Chem. 49: 4300-4303.
25. Tena, MT, M. Valca´rcel, P. Hidalgo y JL Ubera 1997. Extracción de líquido supercrítico
de antioxidantes naturales del romero: comparación con sonicación con solvente
líquido. Anal. Chem 69: 521–526.líquido. Anal. Chem 69: 521–526.líquido. Anal. Chem 69: 521–526.
26. Zaika, LL 1988. Especias y hierbas: su actividad antimicrobiana y su determinación. J.26. Zaika, LL 1988. Especias y hierbas: su actividad antimicrobiana y su determinación. J.
Food Saf. 9: 97-118.Food Saf. 9: 97-118.
Descargadodesdehttp://meridian.allenpress.com/jfp/article-pdf/68/4/790/1676224/0362-028x-68_4_790.pdfporinvitadoel21demayode2020