2. Concepto de cromatografía.
Según la definición dada por Keulemans, es un método de separación en el que los
componentes a desglosar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye un lecho
estacionario de amplio desarrollo superficial y la otra es un fluido que pasa a través o a lo largo del
lecho estacionario.
3. Fases de los Métodos Cromatograficos:
La adsorción:
Es la retención de
una especie química por
parte de los puntos
activos de la superficie
de un sólido quedando
delimitado el fenómeno
a la superficie que
separa las fases o
superficie interfacial.
La absorción
Es la retención de una
especie química por
parte de una masa,
debido a la tendencia
que esta tiene a
formarse. Se entiende
como un fenómeno
másico y no superficial.
4. Análisis Cualitativo
Un análisis cromatográfico puede dar una amplia información cualitativa si se escoge el
sistema de detección adecuado para determinar y evaluar los analitos separados, así si se utiliza un
detector que permita obtener un espectro de cada compuesto separado y a su vez contenga una
base de datos que pueda realizar su comparación con una biblioteca de espectros se podría, de
una forma muy precisa, establecer la identidad de los componentes de una muestra, de hecho
esto se logra fácilmente con cromatógrafos que contienen sistema de detección como el Infrarrojo
(IR), el de Resonancia Magnética Nuclear (RMN) o el espectrómetro de Masas (MS). Las
condiciones cromatográficas como: flujo, temperatura, tipo de fase estacionaria en el caso de
gases o composición química de la fase móvil además de las otras variables mencionadas
anteriormente para el caso de cromatografía de liquida, además de que se debe tener
conocimiento de los posibles compuestos de la muestra y una amplia variedad de patrones para
realizar comparaciones.
5. Análisis Cuantitativo
El uso de la cromatografía se ha extendido en todo el mundo, en las ultimas cuatro
décadas, no solo por su capacidad de separar compuestos sino porque se puede realizar un
análisis cuantitativo de las especies proporcionadas.
En la cromatografía en columna, el análisis cuantitativo se basa en la comparación de la
altura, o del área, del pico del analito con la de uno o más patrones inyectados bajo las mismas
condiciones cromatográficas. El uso de una u otro termino dependerá de las características de
la banda obtenida, aunque en la actualidad con el uso de sistemas de integración de área
computarizados, la precisión es muy alta para el calculo de área, sin embargo siempre es
importante conocer las otras herramientas a utilizar para calcular el área de una banda y en
que momento es mejor usar altura en vez de área por si llega a faltar el sistema
computarizado.
6. Clasificaciones
Según el procedimiento de separación
El principio básico de la separación de las sustancias que componen una
mezcla se fundamenta en una serie de sucesivos equilibrios entre la fase
estacionaria y la fase móvil. El equilibrio dependerá de la partición o diferente
adsorción que tengan la fase estacionaria y los componentes de la mezcla.
La diferencia dependerá de las propiedades físicas y químicas de los
componentes. El mayor o menor avance en el sistema cromatográfico
dependerá de la afinidad del componente y la fase estacionaria. El
componente con menor afinidad por la fase estacionaria en presencia de una
fase móvil llamada eluyente será eluido en primer lugar, y por tanto se
desplazará con mayor velocidad por el sistema cromatográfico.
7. Según el proceso de desarrollo
Desarrollo por elusión: Representa el concepto básico de la separación
cromatográfica y es la técnica más usada en los distintos métodos cromatográficos
(gaseosa, líquido-gas, líquido-líquido, sólido-líquido).
Para describir esta técnica se considera una mezcla de solo dos componentes.
Dicha mezcla se introduce en el extremo superior de una columna adsorbente y sus
componentes se separan en zonas, al pasar uno o más eluyentes a través de la
columna, debido a las distintas afinidades entre los componentes y ambas fases.
8. Según el proceso de desarrollo
Desarrollo por desplazamiento: Consiste en desarrollar
con un disolvente que sea adsorbido por la fase
estacionaria con mayor fuerza con que adsorbe a los
componentes de la mezcla, al contrario que el desarrollo
por elución. A medida que el disolvente pasa a lo largo de
la columna, desplaza a la mezcla, que al mismo tiempo se
separa parcialmente.
Parte del material menos fuertemente adsorbido se
recupera de forma pura, seguido por una mezcla
(interfase) y seguido posteriormente del otro componente
en forma pura. Es un método preparativo útil.
9. Según el proceso de desarrollo
Análisis frontal: Consiste en la aplicación continua de una mezcla en el
origen. En principio el componente menos fuertemente adsorbido fluye
a lo largo de la columna, mientras que el más fuertemente adsorbido se
acumula cerca del origen. Sin embargo existe un límite en la capacidad
del adsorbente y, cuando este límite se alcanza, también el componente
más fuertemente adsorbido empieza a desplazarse a lo largo de la
columna. Por esto, las primeras fracciones contendrán el material
menos fuertemente adsorbido; más tarde aparecerá una mezcla de
ambos componentes. Es una técnica preparativa más que analítica.