El antibiograma es un método in vitro que determina la susceptibilidad de microorganismos a agentes antimicrobianos, utilizando conceptos como la concentración mínima inhibitoria (CIM) y la concentración bactericida mínima (CBM). Los métodos empleados incluyen la dilución y la difusión en agar, siendo este último el más común en laboratorios. Los antibióticos se clasifican en varias categorías, y el proceso de antibiograma implica seleccionar colonias de microorganismos, estandarizar el inóculo y medir la inhibición del crecimiento en función de la eficacia de los antibióticos.

1. ANTIBIOGRAMA
UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ANALISIS CLINICOS II

2. Conceptos
• Antibiograma: son métodos in Vitro que determinan la
susceptibilidad de los microorganismos a una variedad de agentes
antimicrobianos, bajo condiciones de laboratorio específica y
estandarizada.
• Concentración Mínima Inhibitoria (CIM): Es la menor
concentración de una gama de diluciones de antibiótico que provoca
una inhibición de cualquier crecimiento bacteriano visible.
• Antibióticos: Son sustancias químicas producidas por organismos
vivientes, o sintetizados en el laboratorio capaces de inhibir en
pequeñas cantidades los procesos vitales de microorganismos,
destruyendo e impidiendo su desarrollo y reproducción.
SENSIBLE RESISTENTE

3. Clasificación de los Antibióticos
• ß-lactámicos: Penicilinas, Monobactam.
• Glicopéptidos: Vancomicina.
• Aminoglicòsidos: Gentamicina, Amikacina.
• Macrólidos: Eritromicina, Azitromicina, Claritromicina.
• Quinolonas: Ciprofloxacino, Levofloxacino.
• Tetraciclinas
• Sulfonamidas y trimetoprim: bactrin , exazol.

4. OBJETIVOS
ANTIBIOGRAMA
 Establecer planes terapéuticos
individuales
 Elaborar programas orientados
al uso racional de AB´S

5. MÉTODOS - ANTIBIOGRAMA
MÉTODOS
CUANTITATIVO
(Método de dilución)
CUALITATIVO
(Método de difusión en
agar)

6. La sensibilidad de
un ATB
está dada por:
CIM
(Concentración
Inhibitoria Mínima)
CBM
(Concentración
Bactericida Mínima)

7. CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA
• Es la mínima concentración de
un antimicrobiano que inhibe
la multiplicación y crecimiento
visible de una cepa bacteriana
en un medio de cultivo.

8. CONCENTRACIÓN BACTERICIDA
MÍNIMA
• Para determinar la CBM se seleccionan tubos
donde no haya turbidez y se siembra el
contenido en un medio de cultivo sólido y se
observa si hay o no crecimiento.
• LA CBM corresponde a aquella dilución
donde no hay crecimiento bacteriano.

9. CIM Y CBM
S/C S/C
S/C S/C S/C S/C
AB AB AB AB AB CONTROL
SIN AB
C/C C/C
C/C C/C C/C
C/C

10. MÉTODO DE DILUCION
• Consiste en determinar el crecimiento de una bacteria en presencia de
concentraciones decrecientes de un mismo antibiótico.
• Se observa el crecimiento de los microorganismos mediante la aparición
de turbidez

11. MÉTODO DE DIFUSIÓN
• Es el método más empleado en el
laboratorio.
• Se trabaja a partir de un
microorganismo debidamente aislado
e identificado (CULTIVO PURO)

12. MÉTODO DE DIFUSIÓN
PRINCIPIO DEL MÉTODO

14. SELECCIÓN DE LAS COLONIAS
• Es el paso más importante.
• Se selecciona de 3 a 5
colonias del microorganismo.

15. PREPARACIÓN DEL INÓCULO Y
ESTANDARIZACIÓN DE LA SUSPENSIÓN
• En ambos métodos, la turbidez de la suspensión debe ser estandarizada
al estándar 0,5 de McFarland (que corresponde a aproximadamente 1,5
X 10 -8
CFU/ml).
PREPARACIÓN DEL
INÓCULO
Suspensión directa
de las colonias
Fase logarítmica
de crecimiento

16. SUSPENSIÓN DIRECTA DE LAS COLONIAS
• Se trabaja con cultivos jóvenes.
• En esta técnica se estandariza el inóculo al mismo tiempo que se prepara
la suspensión.
3 A 5 COLONIAS SS ó CALDO COMÚN
AJUSTAR TURBIDEZ
0,5 ESCALA DE McFARLAND
ESTABILIZAR 15 MIN.

17. FASE LOGARÍTMICA DE CRECIMIENTO
• Se usa para la mayoría de microorganismos de rápido crecimiento.
3 A 5 COLONIAS SS ó CALDO COMÚN
INCUBACIÓN A 35 0
C 2-6 HORAS
AJUSTAR TURBIDEZ
0,5 ESCALA DE McFARLAND

18. PREPARACIÓN PARA LA INOCULACIÓN
• Los discos deben permanecer a temperatura ambiente
durante 1-2 horas.
• El agar de elección para esta prueba es el agar Mueller-
Hinton (MHA).

19. INOCULACIÓN DE LA PLACA
1 2
3

20. INOCULACIÓN DE LA PLACA
1ml de
inóculo

21. APLICACIÓN DE LOS DISCOS DE
ANTIBIÓTICOS
MÉTODO MANUAL

22. APLICACIÓN DE LOS DISCOS DE
ANTIBIÓTICOS
1
2
3
4
5
6
7
8
9

23. Método de Difusiòn en Disco (Baeur-Kirby)
• Es el mas difundido.
• Prueba la inhibición o resistencia de los
microorganismos, enfrentándolos con los
medicamentos que se encuentran impregnados en
pequeños discos.

24. Medio de cultivo utilizado
Mueller Hinton
• Su reproducibilidad aceptable.
• Baja concentración de
inhibidores, condición crítica
para evaluar sulfonamidas,
trimetoprim y tetraciclina.
• El crecimiento satisfactorio de
patógenos no exigentes.
• Existir ya gran experiencia en
estudios de susceptibilidad.

25. Factores que influyen en el Agar
*pH: El rango de pH va de 7,2 a 7,4.
variación de cationes divalentes:
*Ca y Mg: Afectan los halos de inhibición para
aminoglucósidos y tetraciclinas en
Pseudomonas aeruginosa.
*Profundidad del Agar: La profundidad
recomendada de la capa de agar es de 3 a 5
mm.

26. Preparación del Inóculo
Se prepara el inóculo con ajuste a la
turbidez McFarland 0,5 que corresponde
aun diámetro de1.5 x10 UFC/ML, directo
en caldo de colonias frescas en agar no
selectivo.

27. Inoculación de la placa
• Con un hisopo
estéril en tres
direcciones
inocule toda la
placa (giros de
60°).

28. Aplicación de sensidiscos
separación: los discos
deben de estar
separados24 mm (del
centro de un sensidisco
al otro más cercano).
Cantidad:
12 unidades en placas
de 150mm y 5
unidades en placas se
100mm.

29. Lectura e interpretación de los resultados
Categorías de interpretaron:
Sensible: El microorganismo
presenta un gran área de inhibición
causada por el fármaco. 95% éxito
Intermedio: Se presenta un halo de
inhibición mas reducido.
Resistente: Presenta muy poco o
casi nada de halo.

30. Medición de los halos
Después de incuba las placas del
antibiograma se procederá a la
lectura de este.
Se usa una regla y se mide el
radio del halo de inhibición
partiendo de desde donde está el
disco de antibiótico hasta donde
se inhibió el crecimiento.
La longitud obtenida después se
compararán con estándares que
nos dirán si el medicamento será
efectivo o no en el tratamiento.

31. Antibiótico Resistente Intermedia Susceptible
Ampicilina ≤ 13 14 - 16 ≥ 17
Amikacina ≤ 14 15 – 16 ≥ 17
Sulfisoxasol ≤ 12 13 - 16 ≥ 17
Gentamicina ≤ 12 13 – 14 ≥ 15
Cloranfenicol ≤ 12 13 - 17 ≥ 18
Ceftriaxona ≤ 12 14 – 20 ≥ 21
Ciprofloxacina ≤ 15 16 - 20 ≥ 21
Tetraciclina ≤ 14 15 - 18 ≥ 19
Acido
Nalidixico
≤ 13 14 – 18 ≥ 19
Estrptomicina ≤ 11 12 – 14 ≥ 15
anamicina ≤ 13 14 - 17 ≥ 18
Trimetroprim/
Sulfametoxasol
≤ 10 11 – 15 ≥ 16

32. Otros métodos
• Dilución en Caldo: En el método de
dilución en caldo, base de casi todos los
métodos utilizados en la actualidad, se
colocan concentraciones decrecientes del
agente antimicrobiano, generalmente
diluciones 1:2, en tubos con un caldo de
cultivo que sostendrá el desarrollo del
microorganismo

33. • Método de E-test:
Consiste en aplicar sobre un
medio de cultivo, donde se
encuentra el microorganismo
a ensayar, tiras plásticas que
llevan incluidas un gradiente
de concentración de un
determinado ATB. Luego se
incuba adecuadamente y se
observa la formación de una
elipse de inhibición de
crecimiento.

34. Método Automatizado:
Este método se basa
en micro diluciones
sobre micro tubos. El
crecimiento bacteriano
se va a observar por la
turbidez o
fluorescencia de los
micro tubos.
Es útil para examinar
una gran cantidad de
muestras.