Antibiograma Bacterio práctica

COORDINACION PRACTICA 2006-2007COORDINACION PRACTICA 2006-2007 11

Los antibiogramas o antibioticograma, son
métodos de laboratorio que estudian la
sensibilidad de un microorganismo a la
acción de los ANTIBIOTICOS. El término
sensible es muy usado como sinónimo de
susceptible.
Susceptible significa que un microorganismo
es inhibido o muerto en las pruebas in vitro
por una concentración del antibiótico
accesible en la sangre, cuando ese mismo
antibiótico se utiliza in vivo.

Un "ANTIBIOGRAMA" consiste en
poner en contacto al germen que
hemos cultivado con distintos
antibióticos para ver cual de ellos
es el que mejor va como
tratamiento.

-Medir la sensibilidad de una cepa-Medir la sensibilidad de una cepa
bacteriana que se sospecha que esbacteriana que se sospecha que es
la responsable de una infección.la responsable de una infección.
-Seguir la evolución de las-Seguir la evolución de las
resistencias bacterianas.resistencias bacterianas.
OBJETIVOS:OBJETIVOS:

¿CUANDO DEBEMOS SOLICITAR UN ANTIBIOGRAMA?
A) El microorganismo aislado, causante de la patología, no es
uniforme en su comportamiento frente a los antibióticos usuales;
es decir, cuando la bacteria es de un tipo frecuentemente
resistente a los antimicrobianos. Ejemplo: bacilos Gram (-),
Mycobacterium tuberculosis.
B) En infecciones microbianas graves que comprometen
seriamente la salud del paciente; es decir, cuando es probable
que el proceso infeccioso sea mortal, a menos que sea tratado en
forma específica, por ejemplo: endocarditis, absceso cerebral,
septicemias, osteomielitis.
C) Si se desconoce la susceptibilidad del microorganismo aislado a
los antibióticos de uso frecuente.

 ¿TIPOS DE ANTIBIOGRAMA?¿TIPOS DE ANTIBIOGRAMA?
 Según las necesidades respiratorias de losSegún las necesidades respiratorias de los
microorganismos se pueden realizar dos tipos demicroorganismos se pueden realizar dos tipos de
estudios, como son:estudios, como son: el antibiograma para gérmenesel antibiograma para gérmenes
aeróbicos y el antibiograma para gérmenes anaerobios.aeróbicos y el antibiograma para gérmenes anaerobios.
 El antibiograma para gérmenes aeróbicos son los únicosEl antibiograma para gérmenes aeróbicos son los únicos
que se realizan en forma sistemática en muchosque se realizan en forma sistemática en muchos
laboratorios.laboratorios.
 El antibiograma es una prueba que se utiliza para medirEl antibiograma es una prueba que se utiliza para medir
la susceptibilidad de los microorganismos en presenciala susceptibilidad de los microorganismos en presencia
de sustancias antibióticas. Esta capacidad puede serde sustancias antibióticas. Esta capacidad puede ser
estimada ya sea, por el método de dilución o deestimada ya sea, por el método de dilución o de
difusión.difusión.

REQUISITOS QUE DEBE REUNIR UN ANTIBIOGRAMA:
Debe ser de amplio espectro nutritivo, para que permita el
crecimiento de la mayoría de microorganismos.
Debe tener un pH estable (7,2 - 7,4) y no sufrir oscilaciones
por acción de los microorganismos sobre los componentes
del medio; la acidez favorece la actividad de beta-
lactámicos, tetraciclina, y novobiocina; y la alcalinidad la
de los aminoglucósidos y macrólidos.
-No debe contener inhibidores de antimicrobianos como
son peptonas, sales de Ca++ y Mg++, o cualquier otro
antagonista por competencia.

Las pruebas de susceptibilidad pueden clasificarse en:
PRUEBAS CUANTITATIVAS (DILUCION)
PRUEBAS CUALITATIVAS (DIFUSION)

La Dilución en agarLa Dilución en agar es considerado el método dees considerado el método de
referencia. en este método, las placas contienen, unareferencia. en este método, las placas contienen, una
determinada concentración de un antibiótico y sondeterminada concentración de un antibiótico y son
inoculadas con el microorganismo en estudio y luegoinoculadas con el microorganismo en estudio y luego
incubadas por 16 a 18 horas. Después de la incubación, seincubadas por 16 a 18 horas. Después de la incubación, se
examina si el organismo crece o no en cada una de lasexamina si el organismo crece o no en cada una de las
placas, con lo cual se determina la concentraciónplacas, con lo cual se determina la concentración
inhibitoria mínima (CIM) para el antibiótico.inhibitoria mínima (CIM) para el antibiótico.
 MIC (Concentración Mínima Inhibitoria).-MIC (Concentración Mínima Inhibitoria).- Es laEs la
concentración más baja que inhibe el desarrollo de lasconcentración más baja que inhibe el desarrollo de las
bacterias después de la incubación nocturna. El valorbacterias después de la incubación nocturna. El valor
MIC es entonces comparado con las concentracionesMIC es entonces comparado con las concentraciones
conocidas de la droga obtenidas del suero del paciente oconocidas de la droga obtenidas del suero del paciente o
de los fluidos orgánicos del mismo, para en esta formade los fluidos orgánicos del mismo, para en esta forma
sentar la respuesta clínica probable.sentar la respuesta clínica probable.

En los métodos de dilución en caldo, base de
casi todos los métodos utilizados en la
actualidad, se colocan concentraciones
decrecientes del agente antimicrobiano,
generalmente diluciones 1:2, en tubos con un
caldo de cultivo que sostendrá el desarrollo
del microorganismo.
El caldo más comúnmente usado para estas
pruebas es el de Mueller-Hinton
suplementado con los cationes magnesio y
calcio.

Sobre el agar uniformemente sembrado con el organismoSobre el agar uniformemente sembrado con el organismo
de ensayo, se colocan discos de papel filtro impregnadode ensayo, se colocan discos de papel filtro impregnado
de antibiótico.de antibiótico.
Por difusión se forma un gradiente de concentración delPor difusión se forma un gradiente de concentración del
antibiótico desde el disco hacia la periferia y elantibiótico desde el disco hacia la periferia y el
desarrollo de microorganismos es inhibido a ciertadesarrollo de microorganismos es inhibido a cierta
distancia del disco cuyo diámetro está relacionado, entredistancia del disco cuyo diámetro está relacionado, entre
otros factores, a la mayor susceptibilidad delotros factores, a la mayor susceptibilidad del
microorganismomicroorganismo

•Es el método de difusión en discos, y se lo ha
catalogado como un método de referencia en la
susceptibilidad antimicrobiana y podrá ser
utilizado como una técnica rutinaria en el
laboratorio. Este método es apropiado
particularmente en pruebas con bacterias de la
familia Enterobacteriaceae, pero puede ser
también recomendado como un método general
para todos los patógenos de crecimiento fácil y
rápido, exceptuando los anaerobios estrictos.

Interpretación: En éste método la interpretación de los
resultados está basado sobre la relación entre la
concentración inhibitoria mínima (MCI) y el diámetro de
la zona de inhibición
El sistema más simple comprende solamente dos
categorías susceptibles y resistentes, ésta clasificación
aunque ofrece muchas ventajas para los propósitos
estadísticos epidemiológicos es demasiado inflexible
para la utilización del clínico.
En el método de Kirby Bauer modificado se reconocen
tres categorías de susceptibilidad que son sensible,
resistente e intermedio

 Cuando se prepara él inoculo a partir de un cultivoCuando se prepara él inoculo a partir de un cultivo
primario, se tocan con el asa de inoculación 4 o 5primario, se tocan con el asa de inoculación 4 o 5
colonias bien aisladas y de apariencia morfológicacolonias bien aisladas y de apariencia morfológica
idéntica. Este crecimiento se transfiere a un tuboidéntica. Este crecimiento se transfiere a un tubo
con caldo nutritivo o caldo de Muller Hinton.con caldo nutritivo o caldo de Muller Hinton.
 Se incuba de 2 a 5 horas en general a unaSe incuba de 2 a 5 horas en general a una
temperatura de 35°C, luego se hace unatemperatura de 35°C, luego se hace una
comparación del caldo cultivado con elcomparación del caldo cultivado con el
nefelómetro, se ajusta la turbidez del caldonefelómetro, se ajusta la turbidez del caldo
diluyéndolo con caldo estéril o solución salinadiluyéndolo con caldo estéril o solución salina
estéril, este ajuste es necesario para asegurar elestéril, este ajuste es necesario para asegurar el
desarrollo resultante sea confluente.desarrollo resultante sea confluente.

--Las cajas son inoculadas mojando laLas cajas son inoculadas mojando la
torunda estéril en él inoculo (ésta torundatorunda estéril en él inoculo (ésta torunda
debe ser de madera), desechar el excesodebe ser de madera), desechar el exceso
de caldo por presión y rotación de lade caldo por presión y rotación de la
torunda contra las paredes del tubo.torunda contra las paredes del tubo.
-- Extender entonces él inoculo sobre elExtender entonces él inoculo sobre el
agar, debe pasar la torunda 2 a 3 vecesagar, debe pasar la torunda 2 a 3 veces
sobre la superficie del medio, girandosobre la superficie del medio, girando
cada vez la caja 60 grados, para asegurarcada vez la caja 60 grados, para asegurar
una siembra uniforme.una siembra uniforme.

-Dejar secar la caja sin sobrepasar los 15-Dejar secar la caja sin sobrepasar los 15
minutos antes de aplicar los discos.minutos antes de aplicar los discos.
--La caja debe ser colocada en elLa caja debe ser colocada en el
incubador a 35°C, dentro de los 30incubador a 35°C, dentro de los 30
minutos posteriores a su preparación.minutos posteriores a su preparación.
--Después de la incubación se mide elDespués de la incubación se mide el
diámetro de cada zona de inhibición,diámetro de cada zona de inhibición,
anotándolo en mm.anotándolo en mm.

Existen diversos factores técnicos que influirán en el tamaño
de la zona de inhibición, entre los cuales tenemos:
Densidad del inóculo.
Tiempo de espera para la aplicación de disco
Temperatura de incubación
Tamaño de las cajas, fondo del agar y espacio entre discos
Potencia de los discos de antibióticos

Zona De InhibiciónZona De Inhibición.-.- Se considera así al círculoSe considera así al círculo
alrededor del disco en el que hay ausencia total dealrededor del disco en el que hay ausencia total de
crecimiento bacteriano.crecimiento bacteriano.
Lectura.-Lectura.- Hay algunas formas de interpretar lasHay algunas formas de interpretar las
zonas de inhibición, las más comunes son:zonas de inhibición, las más comunes son:
Usando una reglaUsando una regla;; en éste caso la zona deen éste caso la zona de
inhibición son medidas en mm, y los diámetros soninhibición son medidas en mm, y los diámetros son
interpretados de acuerdo al antibiótico y suinterpretados de acuerdo al antibiótico y su
concentración en mg.concentración en mg.
La tendencia actual; es la de que los técnicos haganLa tendencia actual; es la de que los técnicos hagan
interpretaciones binarias es decir, sensible ointerpretaciones binarias es decir, sensible o
resistente, quedando incluida la respuestaresistente, quedando incluida la respuesta
intermedia en la resistente.intermedia en la resistente.

 Sensible.-Sensible.- Un microorganismo es llamado sensible a unUn microorganismo es llamado sensible a un
antimicrobiano cuando la infección causada por él es probable queantimicrobiano cuando la infección causada por él es probable que
responda favorablemente al tratamiento con éste agente a las dosisresponda favorablemente al tratamiento con éste agente a las dosis
usuales recomendadas.usuales recomendadas.
 Intermedia.-Intermedia.- Cuando la infección es probable que respondaCuando la infección es probable que responda
favorablemente el tratamiento a dosis inusualmente altas delfavorablemente el tratamiento a dosis inusualmente altas del
antimicrobiano.antimicrobiano.
 Resistente.-Resistente.- Es término que implica la expectativa de que elEs término que implica la expectativa de que el
microorganismo no responda a una droga dada, independientementemicroorganismo no responda a una droga dada, independientemente
de la dosis y localización de la infección.de la dosis y localización de la infección.
 La última decisión para usar un antibiótico en particular y la dosis aLa última decisión para usar un antibiótico en particular y la dosis a
ser administrada dependerán no solamente del resultado de laser administrada dependerán no solamente del resultado de la
prueba de susceptibilidad, sino también de su interpretaciónprueba de susceptibilidad, sino también de su interpretación..

Resistente:Resistente:
Sensible:Sensible:
Intermedia:Intermedia:Intermedia:Intermedia:
Sensible:Sensible:
RESISTENTERESISTENTE

MÉTODO DE E-TESTMÉTODO DE E-TEST
 Es uno de los métodos másEs uno de los métodos más
recientes que se hanrecientes que se han
presentado en el mercado ypresentado en el mercado y
resulta de una curiosaresulta de una curiosa
combinación de característicascombinación de características
de los métodos anteriores.de los métodos anteriores.
 Se trata de una técnicaSe trata de una técnica
cuantitativa en placa quecuantitativa en placa que
permite obtener una lecturapermite obtener una lectura
directa de CMI en µg/ml, ya quedirecta de CMI en µg/ml, ya que
se emplean tiras plásticasse emplean tiras plásticas
impregnadas enimpregnadas en
concentraciones crecientes deconcentraciones crecientes de
antibiótico indicadas en unaantibiótico indicadas en una
escala graduada sobre laescala graduada sobre la
propia tira.propia tira.
 El microorganismo a investigarEl microorganismo a investigar
se inocula en una placa yse inocula en una placa y
sobre ella se deposita la tirasobre ella se deposita la tira
del antibiótico (o antibióticos) adel antibiótico (o antibióticos) a
ensayarensayar
 Tras la incubación de 16-24Tras la incubación de 16-24
horas a 35ºC se observan lashoras a 35ºC se observan las
placas y se valora la zona deplacas y se valora la zona de
inhibición,inhibición, de forma elíptica,de forma elíptica,
alrededor de cada tira.alrededor de cada tira.

MÉTODO DE E-TESTMÉTODO DE E-TEST

MÉTODOS AUTOMATIZADOSMÉTODOS AUTOMATIZADOS
 Estos novedosos métodosEstos novedosos métodos
utilizan sistemas de microutilizan sistemas de micro
dilución en medio líquidodilución en medio líquido
sobre microplacas consobre microplacas con
pocillos en "U“.pocillos en "U“.
 Interpretan el crecimientoInterpretan el crecimiento
bacteriano en los diferentesbacteriano en los diferentes
pocillos por medio de unpocillos por medio de un
autoanalizador.autoanalizador.

Antibiograma Bacterio práctica

Más contenido relacionado

La actualidad más candente

Similar a Antibiograma Bacterio práctica

Más de Gabriëla Bëlën

Último

Antibiograma Bacterio práctica