Este documento describe los diferentes métodos para el diagnóstico de VIH, incluyendo métodos directos como la detección de ácidos nucleicos y métodos indirectos como las pruebas de detección y confirmación de anticuerpos. Explica el período ventana y las características de las pruebas rápidas. También analiza los resultados indeterminados en el Western Blot y los factores que afectan la sensibilidad y especificidad de las pruebas.

1. Aspectos técnicos del diagnóstico
de VIH
David Dalmau* y Piedad Arazo**
* Hospital Mutua Terrassa. Barcelona
** Hospital Miguel Servet. Zaragoza

2. Contenido
 Métodos indirectos o serológicos
 Métodos directos o virológicos
 Pruebas de detección rápida
 Pruebas de cribado o screening y pruebas de
confirmación
 Período ventana

3. CICLO DE REPLICACIÓN DEL VIH

4. VIH-1. DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA

5. DNA PCR
RNA PCR
p24 Ag
Anti-HIV
MOLECULAR BIOLOGY OF HIV
Plasma HIV RNA
Anti-HIV Ab
p24 antigen
Meses Años después infección VIH
Dias
Historia natural del VIH y cinética de sus marcadores
8-17 días*
12-26 días*
20-45 días*
* from ANAES Report January 2000

6. Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Métodos directos
 Cultivo viral
 Antigenemia p24
 Detección de ácidos nucléicos
 Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado
 Pruebas de detección rápida
 Pruebas de confirmación

7.  Métodos directos
 Cultivo viral
 Procedimiento complejo con sensibilidad muy
variable en los distintos estadios de la infección
y en distintos laboratorios.
 Antigenemia p24
 Detección del antígeno p24 del virus.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

8.  Métodos directos
 Detección de ácidos nucléicos
 Detección de material genético del virus
mediante amplificación por PCR
 Carga viral plasmática: cantidad de ARN
del virus por mL de plasma.
 Las técnicas ultrasensibles pueden llegar a
detectar hasta 25-40 copias/mL.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

9.  Métodos directos
 Detección de ácidos nucléicos
 Indicaciones de uso:
 Monitorización del tratamiento
antirretroviral
 Predicción de la progresión
 Valoración del riesgo de transmisión
 Diagnóstico de la infección aguda
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

10.  Métodos indirectos
Detectan la respuesta inmunitaria
(humoral o celular) del huésped,
bien mediante la detección de
anticuerpos específicos del
virus o bien mediante la
investigación de la inmunidad
celular
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

11.  Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado
 Son las que primero se realizan y sirven
para descartar los resultados negativos
 Precisan confirmación aquellas que han
sido positivas
 El enzimoinmunoensayo (EIA) es el
método más utilizado como método de
cribado
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

12. indirectos
VIH-1. Diagnóstico

13.  Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado
 EIA 3ª generación detecta todas las
subclases de anticuerpos y no sólo las
IgG  mayor sensibilidad para reconocer
la primoinfección (IgM) y para el
diagnóstico de la infección pediátrica
(IgM e IgA).
 EIA 4ª generación detecta al mismo
tiempo al antígeno p24 y a los Ac frente
al VIH  acortamiento del período
ventana.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

14.  Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado
 Emplean antígenos similares a los EIA
 Obtención del resultado entre 1 y 20 minutos
 Algunas pueden hacerse en saliva o en sangre
completa
 Sensibilidad comparable a las técnicas de cribado,
especificidad algo menor
 Inconveniente: LECTURA SUBJETIVA
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

15. indirectos
VIH-1. Diagnóstico
PRUEBAS
RÁPIDAS

16. 5
NEGATIVO POSITIVO INVÁLIDO
LECTURA INMEDIATA E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
1 PUNTO DE CONTROL: RESULTADO NEGATIVO = NO INFECTADO
1 PUNTO DE CONTROL + 1 PUNTO DEL TEST*: RESULTADO POSITIVO = INFECTADO
AUSENCIA DEL PUNTO DE CONTROL: PRUEBA INVÁLIDA
*EL COLOR DE LOS PUNTOS DE CONTROL Y DE TEST PUEDE SER DE DIFERENTE INTENSIDAD, HECHO QUE NO INVALIDA EL RESULTADO.
Procedimiento de la prueba instantánea INSTITM (IV)

17. Para ser ideal debería reunir los siguientes criterios:
 Alta sensibilidad y especificidad (>99%)
 Ser reproducible
 Ser fácil de aprender, realizar e interpretar
 Ser precisa
 Ser de fácil almacenamiento
 No requerir equipamiento adicional
 No tener carácter invasivo
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
PRUEBAS DE DETECCIÓN RÁPIDA

18. Resultado
negativo
Resultado
reactivo
Resultado
indeterminado
Negativo
definitivo
(salvo periodo
ventana)
Debe
confirmarse
mediante EIA o
Western Blot
Repetir la
prueba en un
mes
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
PRUEBAS DE DETECCIÓN RÁPIDA

19. VIH-1. Diagnóstico indirectos
Pruebas de Detección. EIA
Causas de Falsos Positivos
Relativas al Suero
• Congelación-descongelación
• Almacenamiento a tª subóptima
• Aspecto lipídico, turbio o hemolizado
• Contaminación microbiana
• Tratamiento con calor >60ºC
• Error de extracción o identifiación

20. VIH-1. Diagnóstico indirectos
Pruebas de Detección. EIA
Causas de Falsos Positivos
Relativas a la Presencia de Autoanticuerpos
• Anticuerpos anti-HLA-DR4, DQw3
• Enfermedades reumatoideas
• Polimiositis
• Lupus eritematoso
• Multitrasfundidos
• Trasplantados renales
• Multíparas

21. VIH-1. Diagnóstico indirectos
Pruebas de Detección. EIA
Causas de Falsos Positivos
Relativas a Otras Condiciones
• Hemodializados
• Sd. Stevens-Johnson
• Administración previa de inmunoglob
• Vacunación previa (gripe, hepatitis B)
• Enf. Hepática alcohólica grave
• Cadáver

22.  Métodos indirectos
 Pruebas de confirmación: Western Blot
 Es la más utilizada
 Es altamente específica
(1/20.000 falsos positivos y
1/250.000 falsos negativos)
 Puede dar tres tipos de
resultados
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

23.  Métodos indirectos
 Pruebas de confirmación: Western Blot
 Positivo: presencia de ciertas
bandas
 Negativo: ninguna banda
presenta reacción
 Indeterminado: ni positivo, ni
negativo
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

24.  Un resultado indeterminado en el Western Blot del VIH-1
suele corresponder, por lo menos, a siete situaciones
distintas:
 Infección por el VIH-2.
 Durante el proceso de seroconversión por el VIH-1.
 Enfermedad avanzada.
 Niños nacidos de madres seropositivas.
 Individuos africanos (divergencia genética de las cepas).
 Reactividad inespecífica o cruzada con otros anticuerpos.
 Individuos tratados con antirretrovirales con cargas virales
indetectables.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

25.  Si aparece un resultado indeterminado en el Western Blot:
 Interrogar sobre potenciales fuentes de exposición recientes al
VIH
 Repetir EIA y Western Blot a los 3-6 meses
 Realizar pruebas específicas para VIH-2 en suero inicial más
pruebas suplementarias (PCR) para el VIH-1
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

26. VIH-1. Diagnóstico indirectos
Pruebas de Confirmación
Western Blot (WB)
Line Immune Assay (LIA)

27. VIH-1. Diagnóstico indirectos

28.  Sensibilidad: Es la probabilidad de que para un sujeto
enfermo se obtenga en la prueba un resultado positivo.
 Especificidad: Es la probabilidad de que para un sujeto
sano se obtenga un resultado negativo.
 Valor predictivo positivo: Es la probabilidad de padecer
la enfermedad si se obtiene un resultado positivo en el test.
 Valor predictivo negativo: Es la probabilidad de que un
sujeto con un resultado negativo en la prueba esté
realmente sano.
Características operacionales de las pruebas de detección
de Ac frente al VIH

29. VIH-1. Diagnóstico
Sensibilidad (>98%)
Especificidad (98%)
 Valor Predictivo Positivo
 Valor Predictivo Negativo
> Prevalencia > VPP y < VPN
< Prevalencia < VPP y > VPN

30. VIH-1. Diagnóstico Primoinfección
Seguimiento. Acs. Basal – 3 meses – 6 meses
 CV > 10.000 copias RNA-VIH-1/ml plasma
 Falsos (+) (4%) / Falsos (-) (var. Genética)
 Anticuerpos negativos o débilmente positivos
 Western Blot negativo o indeterminado
RNA-VIH-1 NO ES DIAGNÓSTICO

31. VIH-1. Diagnóstico indirectos
Pruebas de Confirmación. Western Blot
Criterios de Positividad
OMS. 2 gp: gp160, gp120, gp41
CRA. 1 de cada gen estructural (env, pol y gag)
FAD. P24 + p32 + (gp41 o gp120 o gp160)
CRSS. P24 + (gp41 o gp120 o gp160) o
p32 + (gp41 o gp120 o gp160)
CDC. P24 + (gp41 o gp120 o gp160) o
gp41 + (gp120 o gp160)

32. VIH-1. Diagnóstico indirectos