Este documento presenta una visión general de las acetogeninas de Anonáceas y su potencial contra el cáncer avanzado. Brevemente describe que las acetogeninas son moléculas aisladas de plantas de la familia Annonaceae que son capaces de matar células malignas de manera selectiva actuando sobre el complejo I mitocondrial. Además, propone protocolos para verificar sus efectos citotóxicos e inhibición del complejo I mediante ensayos in vitro y evaluar su toxicidad y eficacia contra tumores en modelos animales mediante ens

1. Acetogeninas de Anonáceas
contra el Cáncer avanzado Botánica, Química y Biología:
una visión general
Ben Rockefeller, Pierre Dardenne (CRA-W),
Jean-Michel Romnee (CRA-W), Dioni Franco (ES),
Johan Van Driessche, Usted - ?
© BWR 2011
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2. Resumen de investigaciones publicadas
• La familia de plantas anonáceas se encuentran fundamentalmente
en el trópico. Existen más de 2.500 especies, la mayoría de ella con
un fruto dulce, abundantes semillas, alcaloides y acetogeninas.
• Las Acetogeninas poseen largas cadenas de carbono (C35 – C39)
con 0-3 anillos tetrahidrafuránicos (THF), así como una anillo
lactónico en uno de sus extremos (C=O).
• Se han identificado más de 450 moléculas específicas. Las más
activas son la esquamocina, asimicina, trilobacina, y la bullatacina
(isorolliniastatina-2), todas isómeros de C37H66O7.
• Estas moléculas son capaces de matar células malignas de
manera selectiva. Actúan sobre el complejo I mitocondrial,
reduciendo los niveles de ATP y stimulando la apoptosis.
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3. Cómo verificar las conclusiones
Base de Datos
Elsevier
PubMed
Springerlink
Wiley
Página Web
www.sciencedirect.com
www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/
www.springerlink.com
www.interscience.wiley.com
Palabras Clave: Acetogeninas Anonáceas, in vitro, in
vivo, mecanismo de acción, asimicin, squamocin,
bullatacin, complex I, ATP, apoptosis, mitochondria.
N.B. Las moléculas acetogeninas se han encontrado en
numerosas partes (raíces, corteza, semillas, hojas, etc.)
de diversas especies.
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4. Anonácea – Localización Mundial
Esta familia de plantas ha sido objeto de estudio de los botánicos
desde el año 1700. Ninguna de sus partes es venenosa, pero nunca
se comen las semillas. Su fruto se ha consumido desde siempre. 4

5. Este es el fruto de la
Annona cherimolia,
comúnmente conocida
como chirimoya.
Es cultivada en Perú,
Ecuador, Chile, Taiwán,
China y en el sur de
España.
Esta fruta es un producto
perecedero, sensible a
sufrir daños durante su
transporte, y continúa
madurando después de
su recolección, lo que
dificulta su venta, salvo a
nivel local.
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6. Esta es la fruta de la
Annona senegalensis
(de Senegal). Crece
salvaje en África. La
fruta es apreciada, pero
la planta tiene también
otros usos tradicionales.
En Benín, Togo, Mali,
Costa de Marfil y Kenia,
las raíces en polvo se utilizan para tratar el veneno de la
mordedura de serpiente. En la República Demócrática del
Congo (RDC), es usado para tratar la anemia. Las hojas secas se
encuentran en los mercados de Kinshasa. La base de datos
Preludio del Museo de África, Tervuren, Bélgica, enumera los
múltiples usos tradicionales de esta planta – metrafo.be/prelude.
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7. Compuesto a Cuantificar - C37H66O7
• específico, clave analítica para la cuantificación (PM = 622,9) &
aprobación reglamentaria (y control de calidad de un producto),
• probablemente, el pico base (mayor % - porcentaje del área en
los extractos de papaya, la chirimoya, y otros) de un cromatograma
("huella digital"),
• cuenta con ocho núcleos quirales y muchos isómeros naturales
• muy complicado de sintetizar debido a los múltiples núcleos
quirales.
• isómeros específicos identificados utilizando 1H y 13C RMN
(resonancia magnética nuclear), como anonacina I (patentado por
Bayer como biopesticida en 1987) y también conocido como
esquamocina), asimicina, bullatacin (rolliniastatina-2), trilobacin,
senegalina, xylomaticina (anogalene) y molvizarina,
• cera blanca resinosa con bajo punto de fusión en estado aislado.
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8. Acetogeninas en Annona Squamosa
ref.: Univ. París (Châtenay-Malabry)
Acetogenins from the Seeds of the Custard Apple (Annona squamosa L.) and
their Health Outcomes, Nuts and Seeds in Health and Disease Prevention, chapter 51,
Pierre Champy, Uni. Paris-Sud, Elsevier, 2011 ; N.B. Riesgo de toxicidad crónica.
(ACG-008)
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9. Intentos de Síntesis
Durante años, muchos investigadores
han tratado de sintetizar las moléculas
de acetogenina. Con múltiples núcleos
quirales, esta síntesis es tan compleja
que prácticamente no es posible
automatizar y ampliar. En 2004, un
consorcio de GSK, Novartis & Pfizer
recibió una subvención de Fondos
Europeos para contratar al Profesor
Steven Ley de la Univ. de Cambridge
(R.U.) para sintetizar la asimicina.
Síntesis podría conllevar también
complejos talidomina-como riesgos.
(ACG-221)
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10. 1987 Bayer US Patenta C37H66O7
Bayer AG patentó la
annonina I
(esquamocina) como un
biopesticida. La patente
caducada es una molécula
ID, incluyendo la
vibración del infrarrojo
extendida a cm-1:
~3450(OH),
~2950(CH2), y
~1750(OC=O)
(ACG-200).
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11. Extracción – Solvente No Tóxico
La extracción a alta presión (CO2 comprimido) ha sido utilizada durante treinta años para
descafeinar el café y el té y también para fabricar los extractos vegetales de lúpulo.
Esta técnica es también usada para fabricar los extractos del ajo, jengibre, menta, manteca
de cacao, y muchos otros. Este proceso relativamente sencillo no tiene solventes tóxicos y
se puede incrementar el rendimiento, comparándolo con el m/etanol u otros solventes
orgánicos. El proceso tiene cinco parámetros clave – el tamaño de la partícula (molida
ej.: 8 mm), presión (250 bar.... máximo), proporción solvente/alimentación (40),
temperatura (35ºC) y tiempo de extracción (1h). Su factibilidad se ha documentado.
Un fraccionamiento del los extractos del aceite es también possible.
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12. Encapsulación →Producto Acabado
Lista de materiales (formulación):
Cápsula (o gel suave)
Extracto de aceite (cuantificado por ACG-622)
Excipiente (aditivo, aceite de oliva) a diluir
Materiales de embalaje
La FAMHP (AGEMED-equivalente
belga) y la EMEA/HMPC aceptan el
concepto de cuantificación del
producto acabado (de un extracto de
hierbas) de una específica molécula,
como 50 ug (cincuenta
microgramos) de esquamocina por
cápsula. En otras palabras, la
sustancia farmacológica es una mezcla
(extracto), mientras que el
medicamento contiene una
determinada cantidad de una molécula
específica. Por cada lote finalizado,
dependiendo del volumen de carga
teórica, la concentración de
esquamocina en el aceite extraído, y
la densidad, llenaríamos un volumen
determinado de aceite extraído,
para añadir después otro aceite,
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como aceite de oliva, para diluir la
cápsula.

13. Reglas del juego –
Requisitos Jurídicos Aplicables
BPAR (Buenas Prácticas de Agricultura y Recolección ) –
trabajar solamente cuando tiene salud, lavar las manos antes
de la recolección, analizar y trazar el origen de la biomasa..
BPM (Buenas Prácticas de Manufacturación)– método claro
para limpiar los recipientes de extracción y tubos,
certificación de fábrica, personal cualificado, lote
registro/expediente, etiquetado del lote clínico.
BPL (Buenas Prácticas de Laboratorio)– laboratorio
acreditado, método validado, +/- 5% desviación estándar,
aprobación comité ético para experimentos en vivo,
pruebas de seguridad alimentaria.
BPC (Buenas Prácticas Clínicas)– protocolo, formulario de
consentimiento, seguro, informe de pruebas adversas,
informe finalización de ensayo, E6, responsabilidad
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contingente para suministro continuo.

14. C37H66O7 – BioAssays re: PubChem
Se puede verificar estos datos consultando PubChem (pubchem.ncbi.nlm.nih.gov),
buscando información del compuesto ID 441612 (C37H66O7), haciendo click en Bio..
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15. Planificación de ensayos In Vitro
Equipos (y proveedores)
se encuentran para probar
y verificar:
Citotoxicidad
(Abcam, Sigma,
Promega,…),
Detección de apoptosis
(Abcam, Sigma, Becton
Dickinson,…),
Actividad Complejo I
(Abcam/Mitosciences).
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16. In Vitro – Propuesta Protocolo de Proyecto
Objetivo: verificar la citotoxicidad selectiva, inducción a apoptosis, inhibición de la
captación de FDG, y reducción de la actividad del complejo I, usando un extracto
cuantificado, concentraciones de 0, 0.1, 1, 10, 20, 100 µg/ml de esquamocina, las líneas
celulares y equipos de medición CI50 e inducción de apoptosis. Doxorrubicina y cisplatino
(citotoxicidad y apoptosis) y rotenona (actividad del complejo I) se usarán para el control
positivo.
Prueba
Técnica
Puntos finales
Citotoxicidad
Selectividad
MTT colorimétrico/ XTT
+ células sanas comparadas
CI50
CI50
Detección Apoptosis
Anexina V/PI y citometría de flujo,
V -/PI-…V+/PI+
FDG Captación
Actividad del Complejo I
Con/sin esquamocina, contador gamma TEP uso – S/N
Sistema OXPHOS (NADH- > NAD+) % de Actividad
El procedimiento incluye líneas celulares de carcinoma MCF-7/ Adr (pecho), HT-29
(colom), A-549 (pulmón), GBM8401(cerebro), Huh-7 (hígado), A2780 (ovarios) y HeLa
(cuello del útero); cultivos definidos; concentraciones de 0,0.1, 1, 10, 20, 100 µg/ml (ref.:
McLaughlin, Zeng); ? - ó 0, 15, 30, 60 µM (Wu, 2011); después de 2, 8, 24, 48, 72 h.
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17. In Vivo – Propuesta Protocolo de Proyecto
Objetivo: testar la toxicidad y eficacia, especialmente calcular la DL50 (dosis letal media),
de una sola dosis (aguda) (con aceite de oliva como medida de control), dosis efectivas durante 23 semanas, y dosis tóxicas & NOEL (Nivel sin efecto adverso observable) repetidas durante 13
semanas en ratones, con aceite de oliva y cisplatino para el control (curvas dosis – reacción), con
tumores metastásicos para ser evaluados en función de los primeros ensayos in vitro.
Prueba
Agudo tox
Números de Ratones/dosis
5M/5H, 2 únicas dosis + 2 dosis control = 40
200,2000 mg/kg, 1 día
Eficacia
5M/5H, 3+2 ctrl. dosis diarias, 2–3 semanas = 50 DE50, SUVmax,
10, 1, 0.1 mg/kg (dosis ref.: Ahammadsahib, Wu) Volumen de la lesión (TAC)
Diámetro de la lesión.
Crónico tox
5M/5H, 3+2 ctrl. dosis diarias, 13 semanas = 50
100, 10, 1 mg/kg
Oral bioutilidad 5M/5H, 10 mg/kg, después +/-, 13 semanas = 30
Puntos finales
DL50– dosis oral,
plasma %, necropsia
DL50– dosis oral,
plasma %, necropsia
NOEL (P/sangre)
Los tumores son inducidos, y luego medido su tamaño (por calibradores), a continuación son
registrados por micro TEP/TAC (SUVmáx). Posteriormente se suministra la esquamocina por sonda
durante 2-3 semanas, luego la micro TEP/TAC, pues durante 13 semanas. El uso de TEP depende
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de los resultados de la prueba in vitro FDG.

18. Sugerencia: Prueba Clínica Propuesta
Objetivo: medir la dosis máxima tolerada (DMT) y la eficacia (cualquier % de reducción
en el tamaño de los tumores), con la hipótesis de que el tamaño de los tumores puede
reducirse, pero la dosis es individual. La duración de la prueba puede ser 1 a 3 meses.
Elegibilidad
Régimen
Incluye 20 pacientes (n=20)
Dosis diaria,
Con metástasis en el pecho,
registro semanal de
pulmón, colom, cerebro,
reacción, y
o leucemia, todos pacientes
tomografía TEP/TAC &
externos y ambulatorios;
análisis de sangre al
pacientes
Excluye la quimioterapia previa inicio y al final de
(aplicar otra a 30 días lavado), la prueba; dosis inicial
CoQ10, baja presión arterial,
a ser 0,1 x DL50 dosis en ratas
algunos otros tratamientos
(mg/kg)
(“polifarmacia”), embarazo, o
intención de quedarse embarazada.
Puntos finales
SUVmax,
volumen de la lesión,
diámetro de la lesión
resultados de dolor
comunicados por
movilidad, energía; (o
elección de
continuar tratamiento
después de 1 mes (S/N)
N.B. Λ página 40-50 protocolo que requiere de aprobación por el comité ético.
El proveedor tiene la obligación contingente de suministro continuo. Esta es la Fase I.
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19. Riesgos de la Neurotoxicidad Crónica
Este riesgo fue descrito por primera vez en clínicas de Guam y Guadalupe
(Antillas Francesas) en los últimos diez años. Entre los pacientes que habían
comido al menos una pieza de fruta de anona al día durante treinta a cincuenta
años, la clínica notificaron un mayor índice de temblores, también llamado
“Parkinson atípico”. La causa-efecto de las acetogeninas en la “patología tau”
(neurotoxicidad, probablemente debido a priones) fue después confirmada in
vitro y reflejada en un informe por investigadores de Francia y Alemania (cerca
de la industria). La neurotoxicidad puede o no puede ser reversible, si la persona
deja de comer esta fruta. El efecto secundario es coherente con el mecanismo de
acción, dado que, al igual que un tumor maligno, el cerebro (y el corazón) tiene
un metabolismo de la glucosa superior a la media.
Otro efecto secundario, de acuerdo con el Dr. McLaughlin, es la reducción de la
presión arterial. En Sumatra e Indonesia se usa tradicionalmente la anona para la
reducción de la presión arterial.
La neurotoxicidad es un riesgo crónico. No parece ser un bonita prueba
pendiente. Ha existido un mayor uso tradicional de estas plantas en medicina,
como el polvo de raíz contra las mordeduras venenosas de serpientes (en Benín,
…).
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20. Hipócrates (c. 460 – c. 370 AC)
La escuela hipocrática en la antigua
Grecia separaba la medicina de la
superstición y el pensamiento
filosófico, situándolo en un plano
estrictamente científico, basado en la
observación objetiva y razonamiento
crítico.
“Que tu alimento sea tu medicina.”
- Hipócrates
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