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1. Universidad Cooperativa de Colombia. Aldana, Moreno, Rodríguez y Vásquez. Factores inhibidores de la actividad
enzimática.
La temperatura y el tiempo factores que inhiben
la actividad de las enzimas oxidativas.
Aldana, Juliana., Moreno, Daniela., Rodríguez, Laura y Vásquez, Antonio.
Universidad Cooperativa de Colombia
Resumen— El cuerpo humano es una máquina
que está controlada por diferentes proteínas,
bacterias, enzimas, coenzimas, etc. Es necesario
entender cómo trabaja cada una de las enzimas que
poseemos, entender cómo se activan y como se
inhiben, todo esto lo logramos por medio de la
práctica del pedazo del músculo de pollo, que nos
dimensiona y nos da una idea de cómo es el trabajo
de las enzimas oxidoreductasas que llevamos en
nuestro cuerpo.
Abstract—The human body is a complex machine
that is controlled by various proteins, bacteria ,
enzymes, coenzymes , etc. You need to understand
how to work each of the enzymes we have,
understand how they are activated and inhibited as
all we accomplish this through the practice of piece
of chicken muscle , which scales and gives us an
idea of what the oxidoreductases enzymes work we
carry in our body.
Key Words— Aerobia, Anaerobia, Coenzima,
Deshidrogenasa, Enzima, Inhibición,
Oxidoreductasa.
Palabras clave— Aerobic, Anaerobic, Coenzyme,
Dehydrogenase, Enzyme, Inhibition,
Oxidoreductase,
I.INTRODUCCIÓN
En el laboratorio se realizo una práctica donde se
desempeño conocimientos sobre las enzimas y
coenzimas, donde se detallara el cambio químico de
un sustrato a otro, es necesario saber que la enzima
es aquella proteína que funciona como catalizadora
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y produce un cambio químico en el cuerpo y que la
coenzima recibe o cede un fragmento,
químicamente activado, proveniente del sustrato. Se
desarrollo una actividad minuciosa y con un margen
de error alto ya que esta actividad es de una gran
precisión para que el resultado sea positivo y se dé
con éxito.
II. GENERALIDADES
Todas las enzimas que intervienen en los procesos
oxidativos son designadas como oxidoreductasas.
En la descripción siguiente se clasifican en cinco
grupos:
1. OXIDASAS: Enzimas que catalizan la remoción
de hidrogeno de un sustrato y usan solamente al
oxigeno como aceptor de hidrogeno. Ellas
contienen invariablemente cobre y forman agua
como un producto de la reacción (con la excepción
de la uricasa y la monoaminooxidasa que forman
H2O2, ej.: citocromo oxidasa).
2. DESHIDROGENASAS AEROBIAS: Enzimas
que catalizan la remoción de hidrogeno de un
sustrato pero que, a diferencia de las oxidasas,
pueden usar ya sea oxigeno u otras sustancias
artificiales como aceptores, ej.: el azul de metileno.
Se forma peróxido de hidrogeno en lugar de agua
como producto. En forma característica estas
deshidrogenasas son flavoproteínas.
3. DESHIDROGENASAS ANAEROBIAS:
Enzimas que catalizan la remoción del hidrogeno de
un substrato, pero que no son capaces de usar
oxigeno como aceptor de hidrogeno. Hay un gran
número de enzimas en esta clase. Ellas realizan dos
funciones principales:
a. Transferencia de hidrogeno de un sustrato a otro
en una reacción de óxido reducción acoplada que no
implica una cadena respiratoria. Estas
deshidrogenasas son específicas para sus substratos

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enzimática.
pero a menudo utilizan la misma coenzima o
transportador de hidrogeno que otras
deshidrogenasas. Como las reacciones son
reversibles, estas propiedades permiten que los
equivalentes reductores sean libremente transferidos
dentro de la célula. Este tipo de reacción, que
permite que un sustrato sea oxidado a expensas de
otro, es particularmente útil para permitir que
ocurran los procesos oxidativos en ausencia del
oxígeno. Ej.: deshidrogenasa láctica.
b. Como enzima inicial de una cadena respiratoria
de transporte de electrones desde el substrato al
oxígeno.
4. HIDROPEROXIDASAS: Enzimas que utilizan el
peróxido de hidrogeno como sustrato. Dos enzimas
pertenecen a esta categoría: la peroxidasa, que se
encuentra en la leche, en las plantas, en leucocitos y
eritrocitos, y la catalasa que se encuentra en los
animales y en las plantas.
5. OXIGENASAS: Enzimas que catalizan la
transferencia directa e incorporación del oxígeno a
una molécula de sustrato.
CITOCROMO OXIDASA: La citocromo oxidasa,
es una enzima de la cadena respiratoria por lo cual
se encuentra en todos los tejidos especialmente con
el miocardio. Esta enzima contiene Fe, que pasa
alternativamente de una forma reducida a una
oxidada. La función biológica de la citocromo
oxidasa es la catálisis de oxidación por O2 del
citocromo C. Esta enzima es inhibida por el cianuro
que se acopla a la forma oxidada del hierro,
bloqueando así a la enzima. En el laboratorio, la
actividad de la citocromo oxidasa (y su inhibición
por el cianuro) puede demostrarse mediante la
oxidación secundaria de sustancias tales como la p-fenilendiamina
que se vuelve roja o púrpura con la
oxidación.
Citocromo Reducido----Citocromo
oxidasa--Citocromo Oxidado ----p-fenilediamina
oxidada
En este caso, el cianuro inhibe la reacción,
acoplándose con el hierro oxidado de la citocromo
oxidasa, evitando de esta manera, el funcionamiento
ulterior de la enzima.
DESHIDROGENASA LÁCTICA: La enzima
deshidrogenasa láctica está ampliamente distribuida
en todo el organismo, pero se encuentra
especialmente en el músculo, hígado, corazón y
riñón. Su función es catalizar la oxidación
reversible del lactato a piruvato, removiendo o
adicionando dos H. Para efectuar tal función, es
necesaria la presencia de una coenzima que es el
NAD (nicotinamida adenin dinucleótido), también
ampliamente distribuido en el organismo, la cual
actúa en otros sistemas enzimáticos de oxidación y
reducción. En tales reacciones, pasa de una forma
oxidada (NAD) a una reducida (NADH+H+), esta
última se reoxida mediante flavoproteínas
termolábiles, las cuales a su vez, pueden reducir el
azul de metileno a la forma incolora (leuco) por lo
cual éste puede ser usado en el laboratorio como
indicador de las reacciones de óxido-reducción.
Al ensayar la reacción de la deshidrogenasa láctica,
el producto de la reacción, el piruvato, debe ser
removido por la adición de KCN (para formar la
cianhidrina del ácido pirúvico) y así permitir que la
reacción proceda en un solo sentido y casi hasta su
integridad. En la preparación enzimática también
está presente suficiente flavoproteínas para reducir
el azul de metileno.
III. MATERIALES
· Equipo de disección
· Jeringa y aguja
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enzimática.
· Musculo de pollo fresco
· Arena, hielo
· Cloruro de sodio al 0.9%
· Norita (carbón activado)
· Azul de metileno 0.02%
IV. PROCEDIMIENTO
A) Preparación de la Coenzima:
1) Se tomo aproximadamente 1 gramo de
músculo de una de las piernas del pollo y se
coloco en 8 mL de agua caliente (esto se
hizo para inactivar las enzimas del músculo,
que pueden destruir la coenzima después de
la muerte del animal).
2) Se calienta en baño maría por 4 ó 5
minutos; luego se deja enfriar y se pasa todo
el contenido del tubo a un mortero.
3) Se añade 1 gramo de arena y se tritura hasta
formar una pasta fina.
4) Centrifugar la mezcla y guardar el
sobrenadante que contiene la coenzima en
un baño de hielo hasta ser usado.
B) Preparación de la enzima:
1. Tomar aproximadamente 1 gramo de
músculo de la otra pierna y colocarlo en
un mortero.
2. Añadir 20 mL de NaCl 0.9% y de 1 a 2
gramos de arena.
3. Triturar hasta obtener una pasta fina.
4. Centrifugar la mezcla y tomar el
sobrenadante, que contiene la enzima
láctica.
Para remover cualquier resto de la coenzima
de la preparación enzimática añadir ½
gramo de NORITA (carbón activado).
Mezclar por inversión. Dejar reposar la
mezcla con agitaciones ocasionales por
media hora. Luego centrifugar y guardar el
sobrenadante que será la solución de enzima
pura también en hielo hasta ser usada.
V. ANÁLISIS DE RESULTADOS
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En esta práctica utilizamos diferentes enzimas y así
poder observar su relación con las coenzimas. Para
poder lograrlo usamos una pedazo de músculo de la
pierna de un pollo, es evidente que la práctica no
mostro ningún resultado ya que es necesario que el
órgano (pedazo de músculo) estuviera recién
extraído, debido a que las enzimas se deterioran
rápidamente después de la muerte del animal, a la
hora de obtener los extractos deben ser preparados
con rápida sucesión.
Se esperaba que alguno de los tubos tuviera una
decoloración que las otras debido a la acción de
deshidrogenasa láctica ya que esta actúa en
ambientes faltos de oxígeno. Se hubieran obtenido
resultados visibles si se contara con más tiempo
para la práctica y el órgano del animal se hubiera
extraído al inicio de la práctica y no antes.
VI. CONCLUSIONES
Esta práctica no dio el resultado esperado, ya que,
los parámetros establecidos para utilizar el musculo
de pollo, no se acataron, lo anterior se debe a que
seguramente, el musculo de pollo no fue fresco,
pudo haber estado congelado. Además, el uso de los
reactivos y demás soluciones añadidas, no fueron
medidas con precisión, lo cual, también sería otro
factor perjudicial para el desarrollo correcto de la
practica. Pero, al realizar esta práctica se deja un
impacto positivo, el cual consiste en la adquisición
de conocimientos sobre, el procedimiento para ver
reacción de enzimas oxidativas de determinado
musculo. No hay que olvidar que tras la muerte del
animal la enzima puede destruir la coenzima por lo
que si el animal llevaba un tiempo considerable de
muerte la enzima destruyo la coenzima y por esta
razón no se dio el resultado.
Autores
Aldana Perilla Juliana del Pilar
Moreno Nieto Daniela Ibeth
Rodríguez Quemba Laura Mileth
Vásquez Galvis Juval Antonio