El documento describe un estudio realizado por estudiantes de la Universidad Cooperativa de Colombia sobre los factores que inhiben la actividad enzimática. El estudio analizó cómo la temperatura y el tiempo afectan la actividad de las enzimas oxidativas. Los autores prepararon muestras de enzimas y coenzimas a partir de músculo de pollo fresco, pero no obtuvieron los resultados esperados, posiblemente debido a que el músculo no era lo suficientemente fresco.

1. Universidad Cooperativa de Colombia. Aldana, Moreno, Rodríguez y Vásquez. Factores inhibidores de la actividad
enzimática.
La temperatura y el tiempo factores que inhiben
la actividad de las enzimas oxidativas.
Aldana, Juliana., Moreno, Daniela., Rodríguez, Laura y Vásquez, Antonio.
Universidad Cooperativa de Colombia
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Key Words— Aerobia, Anaerobia, Coenzima,
Deshidrogenasa, Enzima, Inhibición, Oxidoreductasa.
Palabras clave— Aerobic, Anaerobic, Coenzyme,
Dehydrogenase, Enzyme, Inhibition, Oxidoreductase,
I.INTRODUCCIÓN
En el laboratorio se realizo una práctica donde se desempeño
conocimientos sobre las enzimas y coenzimas, donde se
detallara el cambio químico de un sustrato a otro, es necesario
saber que la enzima es aquella proteína que funciona como
catalizadora y produce un cambio químico en el cuerpo y que
la coenzima recibe o cede un fragmento, químicamente
activado, proveniente del sustrato. Se desarrollo una actividad
minuciosa y con un margen de error alto ya que esta actividad
es de una gran precisión para que el resultado sea positivo y se
dé con éxito.
II. GENERALIDADES
Todas las enzimas que intervienen en los procesos oxidativos
son designadas como oxidoreductasas. En la descripción
siguiente se clasifican en cinco grupos:
1. OXIDASAS: Enzimas que catalizan la remoción de
hidrogeno de un sustrato y usan solamente al oxigeno como
aceptor de hidrogeno. Ellas contienen invariablemente cobre y
forman agua como un producto de la reacción (con la
excepción de la uricasa y la monoaminooxidasa que forman
H2O2, ej.: citocromo oxidasa).
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2. DESHIDROGENASAS AEROBIAS: Enzimas que
catalizan la remoción de hidrogeno de un sustrato pero que, a
diferencia de las oxidasas, pueden usar ya sea oxigeno u otras
sustancias artificiales como aceptores, ej.: el azul de metileno.
Se forma peróxido de hidrogeno en lugar de agua como
producto. En forma característica estas deshidrogenasas son
flavoproteínas.
3. DESHIDROGENASAS ANAEROBIAS: Enzimas que
catalizan la remoción del hidrogeno de un substrato, pero que
no son capaces de usar oxigeno como aceptor de hidrogeno.
Hay un gran número de enzimas en esta clase. Ellas realizan
dos funciones principales:
a. Transferencia de hidrogeno de un sustrato a otro en una
reacción de óxido reducción acoplada que no implica una
cadena respiratoria. Estas deshidrogenasas son específicas
para sus substratos pero a menudo utilizan la misma coenzima
o transportador de hidrogeno que otras deshidrogenasas.
Como las reacciones son reversibles, estas propiedades
permiten que los equivalentes reductores sean libremente
transferidos dentro de la célula. Este tipo de reacción, que
permite que un sustrato sea oxidado a expensas de otro, es
particularmente útil para permitir que ocurran los procesos
oxidativos en ausencia del oxígeno. Ej.: deshidrogenasa
láctica.
b. Como enzima inicial de una cadena respiratoria de
transporte de electrones desde el substrato al oxígeno.
4. HIDROPEROXIDASAS: Enzimas que utilizan el peróxido
de hidrogeno como sustrato. Dos enzimas pertenecen a esta
categoría: la peroxidasa, que se encuentra en la leche, en las
plantas, en leucocitos y eritrocitos, y la catalasa que se
encuentra en los animales y en las plantas.
5. OXIGENASAS: Enzimas que catalizan la transferencia
directa e incorporación del oxígeno a una molécula de
sustrato.
CITOCROMO OXIDASA: La citocromo oxidasa, es una
enzima de la cadena respiratoria por lo cual se encuentra en
todos los tejidos especialmente con el miocardio. Esta enzima
contiene Fe, que pasa alternativamente de una forma reducida
a una oxidada. La función biológica de la citocromo oxidasa
es la catálisis de oxidación por O2 del citocromo C. Esta
enzima es inhibida por el cianuro que se acopla a la forma
oxidada del hierro, bloqueando así a la enzima. En el

2. Universidad Cooperativa de Colombia. Aldana, Moreno, Rodríguez y Vásquez. Factores inhibidores de la actividad
enzimática.
laboratorio, la actividad de la citocromo oxidasa (y su
inhibición por el cianuro) puede demostrarse mediante la
oxidación secundaria de sustancias tales como la p-fenilendiamina
que se vuelve roja o púrpura con la oxidación.
Citocromo Reducido----Citocromo oxidasa--
Citocromo Oxidado ----p-fenilediamina
oxidada
En este caso, el cianuro inhibe la reacción, acoplándose con el
hierro oxidado de la citocromo oxidasa, evitando de esta
manera, el funcionamiento ulterior de la enzima.
DESHIDROGENASA LÁCTICA: La enzima deshidrogenasa
láctica está ampliamente distribuida en todo el organismo,
pero se encuentra especialmente en el músculo, hígado,
corazón y riñón. Su función es catalizar la oxidación
reversible del lactato a piruvato, removiendo o adicionando
dos H. Para efectuar tal función, es necesaria la presencia de
una coenzima que es el NAD (nicotinamida adenin
dinucleótido), también ampliamente distribuido en el
organismo, la cual actúa en otros sistemas enzimáticos de
oxidación y reducción. En tales reacciones, pasa de una forma
oxidada (NAD) a una reducida (NADH+H+), esta última se
reoxida mediante flavoproteínas termolábiles, las cuales a su
vez, pueden reducir el azul de metileno a la forma incolora
(leuco) por lo cual éste puede ser usado en el laboratorio como
indicador de las reacciones de óxido-reducción.
Al ensayar la reacción de la deshidrogenasa láctica, el
producto de la reacción, el piruvato, debe ser removido por la
adición de KCN (para formar la cianhidrina del ácido
pirúvico) y así permitir que la reacción proceda en un solo
sentido y casi hasta su integridad. En la preparación
enzimática también está presente suficiente flavoproteínas
para reducir el azul de metileno.
III. MATERIALES
· Equipo de disección
· Jeringa y aguja
· Musculo de pollo fresco
· Arena, hielo
· Cloruro de sodio al 0.9%
· Norita (carbón activado)
· Azul de metileno 0.02%
IV. PROCEDIMIENTO
A) Preparación de la Coenzima:
1) Se tomo aproximadamente 1 gramo de músculo de
una de las piernas del pollo y se coloco en 8 mL de
agua caliente (esto se hizo para inactivar las enzimas
del músculo, que pueden destruir la coenzima
después de la muerte del animal).
2) Se calienta en baño maría por 4 ó 5 minutos; luego
se deja enfriar y se pasa todo el contenido del tubo a
un mortero.
3) Se añade 1 gramo de arena y se tritura hasta formar
una pasta fina.
4) Centrifugar la mezcla y guardar el sobrenadante que
contiene la coenzima en un baño de hielo hasta ser
usado.
B) Preparación de la enzima:
1. Tomar aproximadamente 1 gramo de músculo de
la otra pierna y colocarlo en un mortero.
2. Añadir 20 mL de NaCl 0.9% y de 1 a 2 gramos
de arena.
3. Triturar hasta obtener una pasta fina.
4. Centrifugar la mezcla y tomar el sobrenadante,
que contiene la enzima láctica.
Para remover cualquier resto de la coenzima de la
preparación enzimática añadir ½ gramo de NORITA
(carbón activado). Mezclar por inversión. Dejar
reposar la mezcla con agitaciones ocasionales por
media hora. Luego centrifugar y guardar el
sobrenadante que será la solución de enzima pura
también en hielo hasta ser usada.
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3. Universidad Cooperativa de Colombia. Aldana, Moreno, Rodríguez y Vásquez. Factores inhibidores de la actividad
enzimática.
V. ANALISIS DE RESULTADOS
VI. CONCLUSIONES
Esta práctica no dio el resultado esperado, ya que,
los parámetros establecidos para utilizar el musculo
de pollo, no se acataron, lo anterior se debe a que
seguramente, el musculo de pollo no fue fresco,
pudo haber estado congelado. Además, el uso de los
reactivos y demás soluciones añadidas, no fueron
medidas con precisión, lo cual, también sería otro
factor perjudicial para el desarrollo correcto de la
practica. Pero, al realizar esta práctica se deja un
impacto positivo, el cual consiste en la adquisición
de conocimientos sobre, el procedimiento para ver
reacción de enzimas oxidativas de determinado
musculo. No hay que olvidar que tras la muerte del
animal la enzima puede destruir la coenzima por lo
que si el animal llevaba un tiempo considerable de
muerte la enzima destruyo la coenzima y por esta
razón no se dio el resultado.
Autores
Aldana Perilla Juliana del Pilar
Moreno Nieto Daniela
Rodriguez Quemba Laura
Vasquez Galvis Antonio
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