Este documento describe un procedimiento para observar las distintas fases de la mitosis en células meristemáticas de cebolla usando un microscopio óptico. Se requiere cultivar raíces de cebolla en agua durante varios días y luego teñirlas con colorantes para visualizar los cromosomas. Las células se observan en diferentes etapas de la mitosis como profase, metafase, anafase y telofase.

1. Mitosis en meristemos de cebolla
I. Introducción
La división celular es un aspecto biológico que está presente y caracteriza a los seres
vivos, desde cianobacterias (fisión binaria) hasta animales y vegetales en donde se
denomina mitosis.
La división celular por mitosis es un proceso por medio del cual las células animales
(somáticas) y vegetales se dividen de tal forma que el material genético se reparte
equitativamente entre las células hijas, dando como resultado el origen de dos células
genéticamente idénticas.
En animales este evento se presenta en células somáticas, que son aquellas células que
participan en el crecimiento de tejidos y órganos de un ser vivo, mientras que en
organismos adultos la división celular interviene en el reemplazo de las células
pérdidas por desgaste, deterioro o por muerte celular programada (apoptosis), con el
fin de mantener el estado de equilibrio del organismo, de tal suerte que si la división
celular se detiene o se incrementa el individuo moriría o presentaría organomegalia
(agrandamiento de órganos) o tumoraciones y procesos de cáncer.
En las células vegetales la mitosis se produce sobre todo en los meristemos, que son
los tejidos que permiten el crecimiento de la planta y que se encuentran, entre otros
lugares, en los extremos de los tallos y de las raíces cuya función es la adquisición de
nutrientes.
Previo a los procesos de división celular la gran mayoría de las estirpes celulares
doblan su masa y duplican todos sus orgánelos citoplasmáticos. De este modo, durante
el ciclo celular, un conjunto complejo de procesos citoplasmáticos y nucleares deben
coordinarse para que el proceso de división sea exitoso.
Una aproximación práctica del proceso de mitosis se puede observar en células del
meristemo de una cebolla a través de una coloración básica, la cual evidencia el
material genético de la célula (ácido nucléico) poniendo de manifiesto el arreglo de los

2. cromosomas durante las diversas fases que conforman el proceso de mitosis. Este
abordaje experimental tiene como objeto reforzar lo visto en clase sobre este aspecto
biológico, en el cual el estudiante se ve inmerso como ser vivo.II. Material requerido
Microscopio óptico Palillos Colorante aceto orceína clorhídrica
Navaja Frasco Aceite de inmersión
Portaobjetos Agua Papel seda
Cubreobjetos Mechero de
bunsen
Bulbo de Cebolla
Pipetas pasteur
c/bulbo
Cerillos Vidrio de reloj
Toalla de papel
III. Procedimiento
Procedimiento previo a la actividad experimental (en casa)
1. Retirar las raíces y fibras de la base del bulbo de cebolla
pequeña (5- 7 cm de diámetro).
2. Insertar 3 palillos de forma que el bulbo de cebolla se pueda
suspender en un frasco con agua.
3. Colocar el bulbo de cebolla tapando la boca de un frasco, y
llenar con agua hasta que toque la base de la cebolla
Nota: Este procedimiento deberá realizarse cinco días antes de
la actividad experimental, con la finalidad de permitir el
crecimiento de los meristemos.
Procedimiento en el laboratorio
1. Cortar los 5 últimos milímetros de las raicillas con la navaja de afeitar y
depositarlas en un vidrio de reloj.

3. 2. Cubrir la muestra con el colorante aceto orceína clorhídrica.
3. Incubar la preparación con el colorante a temperatura ambiente durante 10
minutos.
4. Tomar el vidrio de reloj con las pinzas y calentarlo suavemente a la llama del
mechero, evitando la ebullición.
5. Colocar los cortes sobre el portaobjetos y cubrir con el cubreobjetos, presionando
suavemente.
6. Eliminar el exceso de colorante con una toalla de papel.
7. Observar y enfocar la preparación al microscopio óptico con el objetivo 10x.
8. Observar a mayores aumentos (40x, 100x) recorriendo diversos campos para
descubrir en las células observadas las diversas fases del proceso de mitosis.9. Localizar y
esquematizar las células que se encuentren en: Interfase, profase,
metafase, anafase y telofase.
10. Desecho de sobrantes
Los restos del material biológico (cebolla) deberán desecharse en un contenedor para
desechos orgánicos o como material para composta.
11. Registro de las observaciones
Registrar los esquemas de las preparaciones analizadas indicando la función de las
estructuras celulares que se aprecien en cada fase observada.
Observación de interfase en meristemos de cebolla
Observación de profase
Aumento Total
___________
Aumento Total
___________
Aumento Total
___________
Aumento Total

4. ___________Observación de metafase
Observación de Anafase
Observación de Telofase
Aumento Total
___________
Aumento Total
___________
Aumento Total
___________
Aumento Total
___________
Aumento Total
___________
Aumento Total
___________VI. Cuestionario
1. Explique brevemente por qué el aceto orceína clorhídrica tiñe los cromosomas.
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2. ¿Por qué debe dejarse crecer los meristemos de cebolla y analizarlos en fresco?
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3. ¿Qué ocurriría si después de crecer los meristemos los saco del recipiente con
agua y los dejo secar? ¿Qué observaría al microscopio?

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4. ¿Qué función y cuáles son los componentes del citoesqueleto involucrados en
el proceso de mitosis?
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5. ¿Qué ocurriría si se adiciona colchicina (fármaco inhibidor de la polimerización
de los microtíbulos) al recipiente con agua en el cual se permite el crecimiento
de los meristemos de cebolla?
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_____________________VII. Conclusiones
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VIII. Referencias:

6. Bibliográficas:
Karp, G. 2006. Biología Celular y Molecular: Compuestos y experimentos. 4ª ed.
Ed. Mcgraw-Hill Interamericana. pp. 1320-1340.
De Robertis, E. Fundamentos de Biología celular y Molecular de De robertis.
2004. 4ª ed. Ed. El atenco. Buenos Aires, Argentina. pp. 321-337.
Electrónicas:
Universidad Nacional de Formosa (Noviembre 1998). Puntas de Raíz de Cebolla
online, [en línea]. Argentina. Consultado el 8 de abril de 2011. Disponible en:
http://www.biologia.arizona.edu/cell/act/onion/01.html
Cortés, J. A. (2001). Recursos didácticos para Biología. Mitosis en Raíz de
Cebolla, [en línea]. Consultado el 8 de abril de 2011. Disponible en:
http://www.joseacortes.com/practicas/mitosis.htmIX. Apoyo para el docente
Las micrografías se obtuvieron con un microscopio óptico (Eclipse E800), con un objetivo 100X
en campo claro.
Barras, 10 µm.
Referencias
Segura-Valdez, M., Cruz-Gómez, S., López-Cruz, R., Zavala, G., Jiménez-García, L., & Jiménez-
García, L. (2008).
VISUALIZACIÓN DE LA MITOSIS CON EL MICROSCOPIO DE FUERZA ATÓMICA. Tip Revista
Especializada en Ciencias
Químico-Biológicas, 11, 87-90.
Objetivo.
Hacer una preparación microscópica de células meristemáticas de la raíz de cebolla para localizar y
diferenciar con el microscopio las distintas fases de la mitosis o cariocinesis.
Material.
Cebollas, microscopio, portaobjetos, cubreobjetos, lanceta, aguja enmangada, pinzas de madera,
pinzas de punta fina, palillos, mechero, tijeras, papel de filtro, vaso de precipitados, vidrio de
reloj, orceína A y orceína B.
Introducción:
La división celular es el fenómeno por el que una célula origina dos células hijas, cada una de las
cuales recibe idéntica información genética. Consta de dos etapas: la cariocinesis o mitosis que
asegura el reparto equitativo del material hereditario y la citocinesis o división del citoplasma.
La mitosis consta de las siguientes etapas: profase, metafase, anafase y telofase.

7. Protocolo:
Preparación previa. Tres o cuatro días antes de hacer la práctica se pone un bulbo de cebolla en
un vaso de precipitados lleno de agua, de tal manera que la parte inferior del mismo esté en
contacto con el agua. Al cabo de esos tres o cuatro días se habrán formado numerosas raicillas,
cuyos ápices se utilizarán en esta práctica. Conviene realizar la práctica cuando las raicillas todavía
no han crecido demasiado.
1. Con una tijera se corta el extremo de varias raicillas, procurando que su longitud sea de unos 2
a 3 mm., ya que es en esta zona de la raíz donde se encuentran las células en división.
2. Se depositan los trozos de raíz en un vidrio de reloj, en el que previamente se han vertido de 2
a 3 ml de orceína A, cuya función es la de reblandecer las membranas celulares.
3. Con ayuda de unas pinzas de madera se calienta el vidrio de reloj a la llama del mechero
durante 8 minutos, teniendo gran cuidado de que no entre en ebullición (si es necesario se retirará
el vidrio de reloj para que no se produzca la ebullición); el calentamiento termina cuando se
observa la emisión de unos tenues vapores.
4. Se coge con las pinzas de punta fina uno de los extremos (ápice) de la raíz y se coloca en un
portaobjetos añadiendo una gota de orceína B y se deja actuar durante un minuto. La función de
la orceína B es la de completar el proceso de teñido de los cromosomas.
5. Hacer un squash:
Sobre el cubreobjetos se colocan unas tiras de papel de filtro, más o menos 5 o 6 trocitos, y luego
se presiona suavemente con la yema del dedo pulgar haciendo un giro de más o menos 60º, para
así conseguir que las células queden en un solo plano y se elimine el exceso de colorante.
Sin necesidad de retirar el papel de filtro se golpea, también suavemente, con el extremo romo de
una aguja enmangada o bien con el extremo plano de un lápiz para completar la disgregación de
las células meristemáticas.
6. Se observa la preparación con el microscopio empezando con el objetivo de menor aumento
para luego utilizar los de mayor aumento.