Práctica 1 “Cromatografía en papel”
Introducción
Desde a mediados del siglo XX con los primeros procedimientos diseñados por el
ruso Mikhail Tswett, la cromatografía ha sido el mejor método de separación de
materia y ha tenido un papel relevante en todas las ramas de las ciencias.
Actualmente, se considera como una técnica de separación extraordinariamente
versátil que presenta distintas variantes. En cada una de ellas, dividimos todos los
materiales de trabajo en dos fases: una fase móvil, en la cual los componentes de
la muestra se encuentran alojados, y la fase estacionaria, encargada de retener
los mismos en su estructura (ya sea sólida o un líquido fijado en un sólido) al
arrastrar o interactuar con la fase móvil, separando el analito deseado de la
muestra original. De acuerdo al tipo de fase estacionaria, las técnicas
cromatográficas se dividen en Cromatografía en columna (la fase estacionaria se
sitúa dentro de un tubo o columna) y la Cromatografía plana (la fase estacionaria
se sitúa sobre una placa plana o sobre un papel).
Derivando de la cromatografía plana, la Cromatografía en papel es una técnica
muy utilizada para realizar análisis cualitativos debido a que es sencilla de realizar
y no requiere equipamiento complejo. En esta técnica, la fase estacionaria se
constituye por una tira o circulo de papel filtro, mientras que la fase móvil actúa
como un eluyente que ayuda a disolver la muestra. El procedimiento consiste en
colocar una disolución de la muestra en un extremo del papel filtro en forma de
pequeñas gotas. El papel se somete ya sea por goteo o por añadimiento del
líquido que actuará como fase móvil en ese extremo del papel, Al dejarse por un
tiempo, la fase móvil asciende por capilaridad, y esto genera un arrastre dela
muestra, manifestándose de manera visible en el papel con su color característico.
El arrastre está dado por la polaridad que presente cada muestra con respecto al
papel. Entre más polar sea el compuesto con la fase estacionaria, se retendrá más
en el mismo por adsorción, por otro lado, entre más apolar sea la muestra,
avanzará más rápido con la fase móvil. En resumen, esta técnica se basa en la
velocidad de desplazamiento diferencial de los solutos al ser arrastrados por una
fase móvil sobre una fase estacionaria.
Metodología (Reactivos, materiales y método)
1) Reactivos
Agua
Alcohol etílico al 96°
Acetona
Cloroformo
Hexano
2) Materiales
Pliegos de papel filtro de
8.4 x 2.5 cm
1 Lápiz HB con punta
fina
Tijeras
Tintas/Bolígrafos de
colores (Negro, Azul,
Verde y Rojo)
Regla de acero de 30 cm
3) Métodos
Los siguientes procedimientos fueron realizados en la práctica.
3.1. Selección de la fase móvil (use guantes)
Corte con las tijeras los pliegos requeridos de
papel filtro (8.4 x 2.5 cm como dimensiones),
según la cantidad de eluyentes que vaya a utilizar.
En cada pliego, trace una línea media en posición
vertical con el lápiz HB. En espacios de 1 a 2 cm
de separación, marque con su bolígrafo las 4 tintas
(negro, azul, verde y rojo, en ese orden). Añada
una o dos gotas del eluyente que quiera evaluar.
Deje actuar el eluyente hasta que aprecie
corrimiento de las tintas y seque el papel a
temperatura ambiente. Realice el procedimiento anterior con otro eluyente y un papel
nuevo. Por último, compare los eluyentes a partir del corrimiento de las tintas y seleccione
el mejor en base a este criterio para su utilización en el siguiente paso.
3.2. Separación por capilaridad
En un pliego nuevo de papel con las mismas dimensiones, realice un trazo con el lápiz HB
en forma horizontal a un centímetro de su extremo (a esta se le conoce como Origen). De
esta manera, realice otro trazo en el extremo opuesto del origen a un centímetro del borde
del papel (a este se le llama frente). Después, marque ligeramente debajo el origen (en
dirección al borde del papel) 4 puntos separados entre 0.5 a 1 cm (esto ayudará a
diferenciar el origen del frente). Luego, marque con el bolígrafo las 4 tintas (negro, azul,
verde y rojo, en ese orden) sobre cada punto (dentro del origen).
Mientras, en un vaso de precipitado (no mayor a 50 ml), añada el eluyente que actuará
como fase móvil hasta una altura de 0.5 cm (que no supere al origen). Después,
introduzca el papel filtro (el origen debe estar en la parte inferior) en posición diagonal y
de frente para visualizar el corrimiento. Tape el vaso de precipitado con un vidrio de reloj
para evitar la evaporación del eluyente. Deje actuar a la fase móvil por unos minutos
hasta que ascienda por capilaridad totalmente (debe visualizarse el corrimiento de las
tintas). Por último, recoja el papel filtro y deje secar a temperatura ambiente. Obtenga las
mediciones de la distancia recorrida de las tintas y el eluyente y la anchura de las
manchas para realizar los cálculos correspondientes. Si cuenta con otro eluyente, realice
todo este procedimiento anterior en un nuevo papel filtro.
Goteo del eluyente sobre las marcas de las
tintas trazadas
Resultados y Discusiones
1.1. Selección de la fase móvil
En esta primera parte de la práctica, se realizó la selección de la fase móvil a partir de los
eluyentes disponibles, siendo en este caso Agua y Alcohol etílico al 96°. Cada eluyente se
le sometió a una prueba cromatográfica al añadirlo en un pliego de papel filtro, marcado
previamente con un trazo del lápiz HB con las 4 tintas del color Negro, Azul, Rojo y verde,
en ese orden, pertenecientes a la marca de bolígrafos “Bazic”, para después dejarlo correr
en posición horizontal por un breve lapso de tiempo. Eso se realizó con el de fin de
determinar cuál de los dos eluyentes generaba un menor corrimiento de las tinta.
En el caso del agua, debido a su alta polaridad con
respecto al alcohol etílico, no se observa separación
del lugar donde se mantiene adsorbido. Esto se debe
a que los componentes de las tintas son de naturaleza
polar, haciéndolos poco o nada solubles en este
eluyente y esto no genera un proceso de corrimiento
sobre el papel, por tanto se descarta su utilización
como fase móvil en los siguientes procedimientos.
En el caso del alcohol etílico al 96°, tuvo una mejor
respuesta, provocando una separación más notoria de
las tintas con respecto al papel filtro, logrando correrse
unos pocos milímetros de su posición original. El
alcohol etílico obedece un principio químico que dice
que “semejante disuelve a semejante”, es decir al
agregar este eluyente apolar, el adsorbente arrastrara
los compuestos con él, de esta manera, ciertos
componentes de la tinta que son polares se adsorben
en la fase estacionaria en el lugar de origen, y a medida que se produce la elución, van
siendo desplazados y solubilizados los componentes apolares junto el disolvente de la
fase móvil, provocando así la separación. Su concentración es crucial (96°), debido a que
entre más puro llegue a ser, favorecerá el corrimiento de muestras apolares. Por lo tanto,
se utiliza este eluyente como fase móvil durante el desarrollo de la práctica.
1.2. Separación por capilaridad
Al tener seleccionado al alcohol etílico al 96° como nuestra fase móvil, se procedió a
realizar la separación de la tintas por capilaridad. Al realizar los procedimientos
correspondientes, se coloca el pliego de papel marcado por las 4 tintas (Negro, azul, rojo
y verde, en ese orden) en forma diagonal dentro del vaso de precipitado que contenía la
fase móvil previamente seleccionada. A continuación se obtuvieron los siguientes
resultados.
Pliego de prueba con agua como fase móvil
1 Pliego de prueba con alcohol etílico al 90°
1.2.1. Corrimiento de las tintas
Inmediatamente, el alcohol etílico al entrar en contacto con el papel
filtro, ascendió rápidamente por capilaridad, provocando el
corrimiento de las tintas también de manera ascendente. Las 4
tintas experimentaron corrimientos provocados por la fase móvil
pero no de la misma forma, esto se debe a que cada tinta presenta
una afinidad distinta con respecto con la fase móvil. Esto se debe a
que cada tinta es un vehículo de naturaleza líquida que transporta
diversos tipos de pigmentos y aditivos y por tanto, la afinidad de los
mismos por otros compuestos es muy variada.
La tinta que presentó un mayor corrimiento fue la roja del bolígrafo,
presentando un corrimiento de 5.7 cm con respecto a la línea de
origen y 3.7 cm de ancho con respecto su primera banda
separada. La tinta roja se compone principalmente de eosina, un
compuesto ácido que presenta afinidad con los compuestos
alcalinos. En este caso el alcohol etílico, disolvió de manera
favorable la eosina presente en la tinta, provocando su
solubilización y corrimiento sobre el papel debido a la alta afinidad
que posee con respecto a la fase móvil, provocando que haya una
dispersión incluso casi al final de la distancia recorrida solo por el
eluyente. Sin embargo, este no se realiza de manera uniforme y
la mancha termina por desplazarse hacia otra dirección con
respecto a su punto de partida, a tal grado de que supera la línea
“frente” del pliego de papel.
La segunda tinta con mayor corrimiento fue la negra, presentando
un corrimiento de 5.4 cm con respecto a la línea de origen y 3.4
cm de ancho con respecto la primera banda separada. La tinta
negra se compone principalmente de resina pretratada con
minerales y solventes. Este componente es de origen vegetal, de
consistencia pastosa y es soluble en alcohol. Su corrimiento (al
igual que la eosina) ocurre debido a la afinidad que posee este componente con respecto
a la fase móvil, logrando solubilizarse en el mismo. Sin embargo, debido a su naturaleza
oleosa, no llega a correr tan rápido como la eosina pero si se realiza la separación
correspondiente.
La tercera tinta en correr fue la azul presentando un corrimiento de 4.8 cm con respecto a
la línea de origen y 3.8 cm de ancho con respecto la primera banda separada. La tinta
azul se compone de Trifenilmetano azul, pero cabe destacar que este compuesto al ser
una patente, no se tiene información concisa con respecto a sus propiedades. SSin
embargo, el componente original, Trifenilmetano, comparte ciertas características, entre
Corrimiento inicial de las
tintas.
Tintas
Negra, Azul,Roja y Verde
(de izq.a der.)
5.4cm
5.7cm
4.8cm
3.3cm
ellas su alta polaridad. La afinidad de este compuesto con la fase móvil permite su
corrimiento y su separación con respecto al punto de origen.
La última tinta en correr fue la verde, presentando un corrimiento de 3.3 cm con respecto
a la línea de origen y 1.8 cm de distancia con respecto la primera banda separada. El
componente principal de la tinta verde es ftalocianina, un colorante que se estable a
condiciones extremas como calor y luz. En esta separación, realiza un corrimiento muy
lento debido a la poca afinidad que tiene con la fase móvil, provocando que su separación
sea más lenta a comparación de las otras tintas.
1.2.2. Parámetros para determinar la separación cromatográfica
Una vez realizo el proceso de separación, se dejó secar el pliego de papel, para después
obtener las medidas mencionadas anteriormente con el fin de calcular los parámetros que
se muestran a continuación.
1) Tiempo de respuesta (Rf)
Una vez obtenido esto podemos encontrar el factor de retención o el tiempo de
respuesta (Rf) el cual se define como “la relación entre la velocidad de desplazamiento
del soluto y la del disolvente medidas ambas por el avance hacia un frente” (Burriel
Martí, Lucena conde, Arribas Jimeno, & Hernández Méndez, 1998)1
. A partir de este
parámetro podemos definir la competencia que se establece entre los colorantes que se
separaron y la fase móvil al retenerse a la fase estacionaria. Cabe destacar que tanto la
distancia recorrida del disolvente y de la fase móvil fueron tomados a partir de la línea de
origen. Estos fueron los resultados:
Rf tinta negra =
5.4 cm
6.6 cm
= 0.81 Rf tinta azul =
4.8 cm
6.6 cm
= 0.72
Rf tinta roja =
5.7 cm
6.6 cm
= 0.863 Rf tinta verde =
3.3 cm
6.6 cm
= 0.5
Al calcular estos parámetros, podemos verificar que hay un mejor tiempo de respuesta
entre más alto sea el Rf. En el caso de los compuestos que presentaron mayor
corrimiento (tinta roja, negra y azul) tuvieron un Rf más debido naturaleza apolar,
permitiendo que reaccionarán de manera inmediata con el alcohol etílico, logrando así un
desplazamiento más rápido de manera ascendente hacia el frente del papel, indicando
que estos son separados más rápido gracias a la afinidad que tuvieron con la fase móvil.
En el caso de la tinta verde, tuvo el Rf más bajo, esto se debe a que posee una baja
afinidad con la fase móvil debido a que los dos son de naturaleza polar y por ende su
tiempo de respuesta es menor, logrando separarse lentamente.
2) Selectividad
La selectividad se define como el grado de preferencia de la fase móvil por un
compuesto con respecto a la distancia de la primera mancha más cercana al origen.
Selectividad tinta roja =
3.3 cm
5.7 cm
= 0.5789
Selectividad tinta negra =
3.3 cm
5.4 cm
= 0.611 Rf tinta azul =
3.3 cm
4.8 cm
= 0.687
Las tres muestras de tintas presentan parámetros regulares muy parecidos en cuanto a la
selectividad de la fase móvil. Con esto podemos demostrar que la separación no presenta
anomalías y que los compuestos presentaron un corrimiento apto a la polaridad que
poseen.
Conclusión
En el desarrollo de esta práctica se comprendió que la movilidad de los componentes de
una muestra que se desee separar, depende de la afinidad que tenga con la fase móvil y
la polaridad que presente está última, ya que es el factor crucial para que pueda
realizarse una separación cromatográfica apta. A pesar de que es una técnica muy
sencilla de realizar, existen inconvenientes que alteran los resultados de la misma, ya sea
la sobre distribución de las muestras sobre el papel (en este caso,afectando a otras tintas
en su corrimientos) o los factores ambientales (p. ej. calor y la falta de una cámara
cromatográfica) que afectan a la fase móvil, disminuyendo su cantidad al vaporizarse o el
deterioro de la fase estacionaria. Sin embargo, controlando estos factores, esta técnica
puede desarrollarse y arrojar resultados favorables. Como futuros químicos, es importante
conocer y desarrollar los métodos cromatográficos, y en base a las competencias
obtenidas, realizarlos de la manera adecuada para aplicaciones en el área profesional, ya
sea en el sector clínico, industrial e investigación.
Cuestionario
1. ¿En este sistema cuál es la fase móvil y cuál la estacionaria?
R= La fase móvil es el alcohol etílico al 96° y actúa por afinidad con los compuestos
de las muestras, separando aquellos que sean apolares. La fase estacionaría es el
papel filtro, debido que actúa como una fase rígida que permite la adsorción de las
tintas y permite su separación en la misma.
2. ¿Se usó soporte? ¿Cuál es la función de la cámara?
R= No es necesario el uso de soporte en esta cromatografía. La cámara aporta tanto a
la fase estacionaria como a la móvil condiciones climatológicas y ambientales con el
fin de que se desarrolle sin problema alguno el proceso de separación.
3. ¿Cuál es la composición química de la fase estacionaria y de la móvil?
R= La fase móvil se compone de etanol, un compuesto alcohólico
conformado por dos carbonos simples con un radical OH.
La fase estacionaria (papel) se compone de celulosa, un biopolímero compuesto de
moléculas de β-glucosa.
4. ¿Todas las tintas corrieron igual? ¿Cuáles son las que mostraron más
manchas?
R= La mayoría (excepto la tinta verde) tuvo un corrimiento de tinta muy
parecido debido a que estos presentaban una alta afinidad con respecto a la
fase móvil. La tinta verde presentó corrimiento pero fue poco notorio. Ninguna
de las tintas de las muestras no presentó más de una mancha.
5. ¿Cuál es el Rf de las tintas negras? ¿Entre las tintas negras hubo manchas
que se repitieran?
R= En el caso de esta práctica solo de determinó una tinta negra, dando un Rf
de 0.81. No se pudo determinar manchas porque solo se determinó una sola
tinta de este color.
6. ¿Hubo manchas que se repitieran entre las tintas del mismo color?
R= No, debido a que solo se determinó una muestra por cada tinta en nuestro
papel filtro.
7. ¿Podrías mejorar la separación cromatográfica?
R= Esta cromatografía puede realizarse mejor si cambíamos las dimensiones de la
fase estacionaria para permitir un corrimiento más prolongado y notorio. Las
condiciones de las mismas pueden controlarse si la realizamos en una cámara
cromatográfica.
8. Calcula la eficiencia de separación de las muestras que tuvieron dos manchas o
más. ¿Qué podrías hacer para mejorar la eficiencia de la separación?
R= Debido a que no hubo más de dos manchas en las muestras, solo se determinó la
eficiencia de las que fueron obtenidas.
𝐸𝑓𝑛𝑒𝑔𝑟𝑎 = 16 (
5.4 𝑐𝑚
3.4 𝑐𝑚
2⁄
) = 50.72 𝐸𝑓𝑎𝑧𝑢𝑙 = 16 (
4.8 𝑐𝑚
3.8 𝑐𝑚
2⁄
) = 54.85
𝐸𝑓𝑟𝑜𝑗𝑎 = 16(
5.7 𝑐𝑚
3.7 𝑐𝑚
2⁄
) = 49.29 𝐸𝑓𝑎𝑧𝑢𝑙 = 16 (
3.3 𝑐𝑚
1.8 𝑐𝑚
2⁄
) = 58.66
El número de platos teóricos en las 4 muestras es demasiado pequeño a comparación
del límite mínimo aceptado en la cromatografía de este tipo (mayor a 300). Esto se
debe a que solo se tomó en cuenta una mancha por cada muestra para realizar es
cálculo, dando como conclusión que las muestras no migraron completamente debido
a la falta de espacio en el papel filtro.
9. Calcula la resolución de las muestras que tuvieron dos manchas o más. ¿Qué
podrías hacer para mejorar la resolución de la separación?
R= Debido a la falta de más de dos manchas en cada muestras, no pudo determinarse
este parámetro para esta separación.
Corrimiento final
de las muestras de
tinta (N,A,R,V)
10. ¿Cuál es la naturaleza química de los colorantes utilizados en los bolígrafos?
R= Las estructuras de las tintas negra, azul y roja comparten una afinidad apolar con
respecto a la fase móvil, permitiendo que se solubilizen en el mismo y generen su
corrimiento ascendente por el papel. Mientras que la titna verde presentaba poca
afinidad debido a que en sue estructura presentaba mayor afinidad polar y tuvo un
corrimiento más lento.
11. ¿Qué tipos de vidrio existen para laboratorio? (Busca en la FEUM)
R= En los aparatos e instrumental de laboratorio se utilizan dos tipos de vidrio:
A) Vidrio de sosa y cal: Se compone entre un 71 y 75% de arena (SiO2), 12 al 16% de
NaHCO3 Y 10 al 15% de CaO. Este vidrio tiene una superficie lisa y sin poros,
aunque es sensible a los cambios de temperatura.
B) Vidrio borosilicato: Compuesto entre 70 y 80% de SiO2, 7 al 13% de B2O3, 4 al 8%
de Na2O y 2 al 7% de Al2O3. Posee mayor resistencia química y térmica. Es
utilizado en la fabricación de instrumental requerido para condiciones extremas o
trabajos prolongados.
12. ¿Cómo definirías el frente y el origen?
R= Son los intervalos donde la medición del recorrido de cada sustancia puede ser
cuantificada sin salirse de los bordes del papel, con la diferencia de que el origen sirve
como punto de partida para determinarlas.
13. ¿Por qué crees que no se utilizan los puntos en los extremos?
R= Porque si realizamos la medición a partir de ellos, podemos obtener datos con
dimensiones erróneas y afectaría al cálculo de los parámetros que necesiten esos
datos.
14. ¿Por qué deben ser manejados con guantes?
R= Porque las manos secretan ácidos grasos, sudor o contienen impurezas que
pueden alterar la composición del papel al tocarlo directamente, afectando al
corrimiento de la tinta ya sea retardando o inhibiendo la separación.
15. ¿Por qué esta práctica es imprecisa?
R= Por que el corrimiento de las muestras no ocurre de manera uniforme, afectando a
otras muestras y por ende, altera el reconocimiento y separación de las mismas.
Glosario
 Fase móvil: Es que aquella fase (ya sea liquida o gaseosa) que contiene la
muestra que se desee separar. Esta recorre o traspasa la fase rígida llamada fase
estacionaría con el fin de separar el analito de la muestra.
 Fase estacionaria: Es un lecho fijo de gran área superficial. Puede ser un sólido
poroso o finamente dividido, o un líquido que ha sido colocado en una capa
delgada sobre un material de soporte inerte. Su función es retener la muestra que
se desee separar.
 Cromatografía: Es un técnica de separación basada en el principio de retención
selectiva, que permite separar los distintos componentes de una mezcla facilitando
su identificación y cuantificación. el fenómeno de separación ocurre al hacer pasar
una fase móvil fluida (que arrastra a la mezcla, a través de una fase estacionaria
de naturaleza rígida.
 Rf: Se considera como la relación entre la distancia recorrida por el soluto y por el
eluyente desde el origen de la placa o papel filtro. Tiene un valor constante para
cada compuesto en condiciones cromatográficas determinadas. Se calcula al
dividir la distancia recorrida por el compuesto sobre la distancia recorrida por el
eluyente.
 Resolución: El grado de separación o resolución de dos bandas adyacentes se
define como la distancia entre los picos de las bandas (o centros) dividida entre el
ancho promedio de las bandas.
 Sensibilidad: Es la probabilidad de obtener resultados positivos en aquellos datos
que cumplan con un criterio en específico. Poj ejemplo, se puede calcular la
probabilidad de obtener aquellos pacientes que den positivo a una prueba de VIH
entre aquellos que estén enfermos.
 Especificidad: Es la probabilidad de obtener resultados negativos en aquellos
datos que cumplan con un criterio en específico. Poj ejemplo, se puede calcular la
probabilidad de obtener aquellos pacientes que den negativo a una prueba de BIH
entre aquellos que estén sanos.
 Precisión: Es la dispersión del conjunto de valores obtenidos de mediciones
repetidas de una magnitud. Cuanto menor es la dispersión, mayor será la
precisión.
 Exactitud: Es la referencia a cuán cerca del valor real se encuentra el valor
medido. En términos estadísticos, la exactitud está relacionada con el sesgo de
estimación. Cuando menor sea el sesgo, más exacta será la estimación.
 Repetitividad: Es la aptitud de un instrumento de medición para proporcionar
indicaciones próximas entre sí para aplicaciones repetidas de la misma,
mensurando bajo las mismas condiciones de medición.
 Reproducibilidad: Es la proximidad de concordancia entre los resultados de
mediciones del mismo, realizadas bajo condiciones variables de medición.
 Eficiencia: Es el grado de separación de una muestra en el menor tiempo y las
mejores condiciones posibles.
Bibliografía
1. Burriel Martí, F., Lucena conde, F., Arribas Jimeno, S., & Hernández Méndez, J.
Química analítica cualitativa. Madrid: Paraninfo.1998.
 Excelencia UAN. Cromatografía en capa fina. España: Universidad Autónoma de
Madrid. De:
https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion-p6.pdf
 Gennaro, A.R. Remington: Farmacia. 20ª. edición. Volumen 1. México: Editorial
Médica Panamericana. 2003. Pp. 686-689.
 Web del profesor. Separación de cationes por cromatografía de papel. Venezuela:
Universidad de los Andes. De:
http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/rmhr/Index_archivos/Cromatografia_de
_papel.pdf
http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/rmhr/Index_archivos/Cromatografia_de_papel.pdf
https://es.scribd.com/doc/103144800/Practica-2-Cromatografia-de-Papel
http://es.slideshare.net/honey61187/cromatografa-de-papel
http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_papel
https://books.google.com.mx/books?id=Av4IIsyH-
qcC&pg=PA686&dq=fase+m%C3%B3vil&hl=es&sa=X&ei=ZvIMVZm9NcLdsATjyo
HwBw&ved=0CCUQ6AEwAA#v=onepage&q=fase%20m%C3%B3vil&f=false
http://es.slideshare.net/luisdracons/cromatografia-5540749
https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion-
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https://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20120813154900AABfp0k
http://biblioteca.sena.edu.co/exlibris/aleph/u21_1/alephe/www_f_spa/icon/458
96/Informador62/3/vocabulario9.html
https://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20120813154900AABfp0k
Burriel Martí, F., Lucena conde, F., Arribas Jimeno, S., & Hernández Méndez, J. Química
analítica cualitativa. Madrid: Paraninfo.1998.
Práctica 2 “Cromatografía en capa fina”
Resultados y Discusiones
1.1Preparativos para la práctica
En esta primera parte de la práctica, los docentes encargados realizaron la elaboración de
la fase móvil a partir de los eluyentes disponibles, siendo en este caso Cloroformo y
Metanol, ambos en proporción 9:1 (9 veces más volumen de cloroformo que de metanol),
respectivamente.
http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina
https://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20080217111806AA2ykL8
http://www.academia.edu/7093683/Laboratorio_alcaloides
https://www.google.com.mx/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=2&ved=0CCIQFj
AB&url=http%3A%2F%2Ftx.technion.ac.il%2F~sbeer%2Fpublications%2FMetodo.doc&ei
=TBE7VbelGMSHsAXQsIGQCA&usg=AFQjCNHXFpRo1236bXAmU3w34zIYhSo1bA&sig
2=2Gl8AlEhR-a8wQt_bCBltQ
https://www.google.com.mx/search?newwindow=1&rlz=1C1PRFC_enMX571MX571&es_s
m=93&q=cloroformo-metanol+9%3A1+capa+fina&oq=cloroformo-
metanol+9%3A1+capa+fina&gs_l=serp.3...7045.9491.0.9851.10.10.0.0.0.0.159.908.6j3.9.
0.msedr...0...1c.1.64.serp..10.0.0.I4JCBxf4whg

Reporte de prácticas de cromatografía

  • 1.
    Práctica 1 “Cromatografíaen papel” Introducción Desde a mediados del siglo XX con los primeros procedimientos diseñados por el ruso Mikhail Tswett, la cromatografía ha sido el mejor método de separación de materia y ha tenido un papel relevante en todas las ramas de las ciencias. Actualmente, se considera como una técnica de separación extraordinariamente versátil que presenta distintas variantes. En cada una de ellas, dividimos todos los materiales de trabajo en dos fases: una fase móvil, en la cual los componentes de la muestra se encuentran alojados, y la fase estacionaria, encargada de retener los mismos en su estructura (ya sea sólida o un líquido fijado en un sólido) al arrastrar o interactuar con la fase móvil, separando el analito deseado de la muestra original. De acuerdo al tipo de fase estacionaria, las técnicas cromatográficas se dividen en Cromatografía en columna (la fase estacionaria se sitúa dentro de un tubo o columna) y la Cromatografía plana (la fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un papel). Derivando de la cromatografía plana, la Cromatografía en papel es una técnica muy utilizada para realizar análisis cualitativos debido a que es sencilla de realizar y no requiere equipamiento complejo. En esta técnica, la fase estacionaria se constituye por una tira o circulo de papel filtro, mientras que la fase móvil actúa como un eluyente que ayuda a disolver la muestra. El procedimiento consiste en colocar una disolución de la muestra en un extremo del papel filtro en forma de pequeñas gotas. El papel se somete ya sea por goteo o por añadimiento del líquido que actuará como fase móvil en ese extremo del papel, Al dejarse por un tiempo, la fase móvil asciende por capilaridad, y esto genera un arrastre dela muestra, manifestándose de manera visible en el papel con su color característico. El arrastre está dado por la polaridad que presente cada muestra con respecto al papel. Entre más polar sea el compuesto con la fase estacionaria, se retendrá más en el mismo por adsorción, por otro lado, entre más apolar sea la muestra, avanzará más rápido con la fase móvil. En resumen, esta técnica se basa en la velocidad de desplazamiento diferencial de los solutos al ser arrastrados por una fase móvil sobre una fase estacionaria. Metodología (Reactivos, materiales y método) 1) Reactivos Agua Alcohol etílico al 96° Acetona Cloroformo Hexano
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    2) Materiales Pliegos depapel filtro de 8.4 x 2.5 cm 1 Lápiz HB con punta fina Tijeras Tintas/Bolígrafos de colores (Negro, Azul, Verde y Rojo) Regla de acero de 30 cm 3) Métodos Los siguientes procedimientos fueron realizados en la práctica. 3.1. Selección de la fase móvil (use guantes) Corte con las tijeras los pliegos requeridos de papel filtro (8.4 x 2.5 cm como dimensiones), según la cantidad de eluyentes que vaya a utilizar. En cada pliego, trace una línea media en posición vertical con el lápiz HB. En espacios de 1 a 2 cm de separación, marque con su bolígrafo las 4 tintas (negro, azul, verde y rojo, en ese orden). Añada una o dos gotas del eluyente que quiera evaluar. Deje actuar el eluyente hasta que aprecie corrimiento de las tintas y seque el papel a temperatura ambiente. Realice el procedimiento anterior con otro eluyente y un papel nuevo. Por último, compare los eluyentes a partir del corrimiento de las tintas y seleccione el mejor en base a este criterio para su utilización en el siguiente paso. 3.2. Separación por capilaridad En un pliego nuevo de papel con las mismas dimensiones, realice un trazo con el lápiz HB en forma horizontal a un centímetro de su extremo (a esta se le conoce como Origen). De esta manera, realice otro trazo en el extremo opuesto del origen a un centímetro del borde del papel (a este se le llama frente). Después, marque ligeramente debajo el origen (en dirección al borde del papel) 4 puntos separados entre 0.5 a 1 cm (esto ayudará a diferenciar el origen del frente). Luego, marque con el bolígrafo las 4 tintas (negro, azul, verde y rojo, en ese orden) sobre cada punto (dentro del origen). Mientras, en un vaso de precipitado (no mayor a 50 ml), añada el eluyente que actuará como fase móvil hasta una altura de 0.5 cm (que no supere al origen). Después, introduzca el papel filtro (el origen debe estar en la parte inferior) en posición diagonal y de frente para visualizar el corrimiento. Tape el vaso de precipitado con un vidrio de reloj para evitar la evaporación del eluyente. Deje actuar a la fase móvil por unos minutos hasta que ascienda por capilaridad totalmente (debe visualizarse el corrimiento de las tintas). Por último, recoja el papel filtro y deje secar a temperatura ambiente. Obtenga las mediciones de la distancia recorrida de las tintas y el eluyente y la anchura de las manchas para realizar los cálculos correspondientes. Si cuenta con otro eluyente, realice todo este procedimiento anterior en un nuevo papel filtro. Goteo del eluyente sobre las marcas de las tintas trazadas
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    Resultados y Discusiones 1.1.Selección de la fase móvil En esta primera parte de la práctica, se realizó la selección de la fase móvil a partir de los eluyentes disponibles, siendo en este caso Agua y Alcohol etílico al 96°. Cada eluyente se le sometió a una prueba cromatográfica al añadirlo en un pliego de papel filtro, marcado previamente con un trazo del lápiz HB con las 4 tintas del color Negro, Azul, Rojo y verde, en ese orden, pertenecientes a la marca de bolígrafos “Bazic”, para después dejarlo correr en posición horizontal por un breve lapso de tiempo. Eso se realizó con el de fin de determinar cuál de los dos eluyentes generaba un menor corrimiento de las tinta. En el caso del agua, debido a su alta polaridad con respecto al alcohol etílico, no se observa separación del lugar donde se mantiene adsorbido. Esto se debe a que los componentes de las tintas son de naturaleza polar, haciéndolos poco o nada solubles en este eluyente y esto no genera un proceso de corrimiento sobre el papel, por tanto se descarta su utilización como fase móvil en los siguientes procedimientos. En el caso del alcohol etílico al 96°, tuvo una mejor respuesta, provocando una separación más notoria de las tintas con respecto al papel filtro, logrando correrse unos pocos milímetros de su posición original. El alcohol etílico obedece un principio químico que dice que “semejante disuelve a semejante”, es decir al agregar este eluyente apolar, el adsorbente arrastrara los compuestos con él, de esta manera, ciertos componentes de la tinta que son polares se adsorben en la fase estacionaria en el lugar de origen, y a medida que se produce la elución, van siendo desplazados y solubilizados los componentes apolares junto el disolvente de la fase móvil, provocando así la separación. Su concentración es crucial (96°), debido a que entre más puro llegue a ser, favorecerá el corrimiento de muestras apolares. Por lo tanto, se utiliza este eluyente como fase móvil durante el desarrollo de la práctica. 1.2. Separación por capilaridad Al tener seleccionado al alcohol etílico al 96° como nuestra fase móvil, se procedió a realizar la separación de la tintas por capilaridad. Al realizar los procedimientos correspondientes, se coloca el pliego de papel marcado por las 4 tintas (Negro, azul, rojo y verde, en ese orden) en forma diagonal dentro del vaso de precipitado que contenía la fase móvil previamente seleccionada. A continuación se obtuvieron los siguientes resultados. Pliego de prueba con agua como fase móvil 1 Pliego de prueba con alcohol etílico al 90°
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    1.2.1. Corrimiento delas tintas Inmediatamente, el alcohol etílico al entrar en contacto con el papel filtro, ascendió rápidamente por capilaridad, provocando el corrimiento de las tintas también de manera ascendente. Las 4 tintas experimentaron corrimientos provocados por la fase móvil pero no de la misma forma, esto se debe a que cada tinta presenta una afinidad distinta con respecto con la fase móvil. Esto se debe a que cada tinta es un vehículo de naturaleza líquida que transporta diversos tipos de pigmentos y aditivos y por tanto, la afinidad de los mismos por otros compuestos es muy variada. La tinta que presentó un mayor corrimiento fue la roja del bolígrafo, presentando un corrimiento de 5.7 cm con respecto a la línea de origen y 3.7 cm de ancho con respecto su primera banda separada. La tinta roja se compone principalmente de eosina, un compuesto ácido que presenta afinidad con los compuestos alcalinos. En este caso el alcohol etílico, disolvió de manera favorable la eosina presente en la tinta, provocando su solubilización y corrimiento sobre el papel debido a la alta afinidad que posee con respecto a la fase móvil, provocando que haya una dispersión incluso casi al final de la distancia recorrida solo por el eluyente. Sin embargo, este no se realiza de manera uniforme y la mancha termina por desplazarse hacia otra dirección con respecto a su punto de partida, a tal grado de que supera la línea “frente” del pliego de papel. La segunda tinta con mayor corrimiento fue la negra, presentando un corrimiento de 5.4 cm con respecto a la línea de origen y 3.4 cm de ancho con respecto la primera banda separada. La tinta negra se compone principalmente de resina pretratada con minerales y solventes. Este componente es de origen vegetal, de consistencia pastosa y es soluble en alcohol. Su corrimiento (al igual que la eosina) ocurre debido a la afinidad que posee este componente con respecto a la fase móvil, logrando solubilizarse en el mismo. Sin embargo, debido a su naturaleza oleosa, no llega a correr tan rápido como la eosina pero si se realiza la separación correspondiente. La tercera tinta en correr fue la azul presentando un corrimiento de 4.8 cm con respecto a la línea de origen y 3.8 cm de ancho con respecto la primera banda separada. La tinta azul se compone de Trifenilmetano azul, pero cabe destacar que este compuesto al ser una patente, no se tiene información concisa con respecto a sus propiedades. SSin embargo, el componente original, Trifenilmetano, comparte ciertas características, entre Corrimiento inicial de las tintas. Tintas Negra, Azul,Roja y Verde (de izq.a der.) 5.4cm 5.7cm 4.8cm 3.3cm
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    ellas su altapolaridad. La afinidad de este compuesto con la fase móvil permite su corrimiento y su separación con respecto al punto de origen. La última tinta en correr fue la verde, presentando un corrimiento de 3.3 cm con respecto a la línea de origen y 1.8 cm de distancia con respecto la primera banda separada. El componente principal de la tinta verde es ftalocianina, un colorante que se estable a condiciones extremas como calor y luz. En esta separación, realiza un corrimiento muy lento debido a la poca afinidad que tiene con la fase móvil, provocando que su separación sea más lenta a comparación de las otras tintas. 1.2.2. Parámetros para determinar la separación cromatográfica Una vez realizo el proceso de separación, se dejó secar el pliego de papel, para después obtener las medidas mencionadas anteriormente con el fin de calcular los parámetros que se muestran a continuación. 1) Tiempo de respuesta (Rf) Una vez obtenido esto podemos encontrar el factor de retención o el tiempo de respuesta (Rf) el cual se define como “la relación entre la velocidad de desplazamiento del soluto y la del disolvente medidas ambas por el avance hacia un frente” (Burriel Martí, Lucena conde, Arribas Jimeno, & Hernández Méndez, 1998)1 . A partir de este parámetro podemos definir la competencia que se establece entre los colorantes que se separaron y la fase móvil al retenerse a la fase estacionaria. Cabe destacar que tanto la distancia recorrida del disolvente y de la fase móvil fueron tomados a partir de la línea de origen. Estos fueron los resultados: Rf tinta negra = 5.4 cm 6.6 cm = 0.81 Rf tinta azul = 4.8 cm 6.6 cm = 0.72 Rf tinta roja = 5.7 cm 6.6 cm = 0.863 Rf tinta verde = 3.3 cm 6.6 cm = 0.5 Al calcular estos parámetros, podemos verificar que hay un mejor tiempo de respuesta entre más alto sea el Rf. En el caso de los compuestos que presentaron mayor corrimiento (tinta roja, negra y azul) tuvieron un Rf más debido naturaleza apolar, permitiendo que reaccionarán de manera inmediata con el alcohol etílico, logrando así un desplazamiento más rápido de manera ascendente hacia el frente del papel, indicando que estos son separados más rápido gracias a la afinidad que tuvieron con la fase móvil. En el caso de la tinta verde, tuvo el Rf más bajo, esto se debe a que posee una baja afinidad con la fase móvil debido a que los dos son de naturaleza polar y por ende su tiempo de respuesta es menor, logrando separarse lentamente. 2) Selectividad La selectividad se define como el grado de preferencia de la fase móvil por un compuesto con respecto a la distancia de la primera mancha más cercana al origen. Selectividad tinta roja = 3.3 cm 5.7 cm = 0.5789
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    Selectividad tinta negra= 3.3 cm 5.4 cm = 0.611 Rf tinta azul = 3.3 cm 4.8 cm = 0.687 Las tres muestras de tintas presentan parámetros regulares muy parecidos en cuanto a la selectividad de la fase móvil. Con esto podemos demostrar que la separación no presenta anomalías y que los compuestos presentaron un corrimiento apto a la polaridad que poseen. Conclusión En el desarrollo de esta práctica se comprendió que la movilidad de los componentes de una muestra que se desee separar, depende de la afinidad que tenga con la fase móvil y la polaridad que presente está última, ya que es el factor crucial para que pueda realizarse una separación cromatográfica apta. A pesar de que es una técnica muy sencilla de realizar, existen inconvenientes que alteran los resultados de la misma, ya sea la sobre distribución de las muestras sobre el papel (en este caso,afectando a otras tintas en su corrimientos) o los factores ambientales (p. ej. calor y la falta de una cámara cromatográfica) que afectan a la fase móvil, disminuyendo su cantidad al vaporizarse o el deterioro de la fase estacionaria. Sin embargo, controlando estos factores, esta técnica puede desarrollarse y arrojar resultados favorables. Como futuros químicos, es importante conocer y desarrollar los métodos cromatográficos, y en base a las competencias obtenidas, realizarlos de la manera adecuada para aplicaciones en el área profesional, ya sea en el sector clínico, industrial e investigación. Cuestionario 1. ¿En este sistema cuál es la fase móvil y cuál la estacionaria? R= La fase móvil es el alcohol etílico al 96° y actúa por afinidad con los compuestos de las muestras, separando aquellos que sean apolares. La fase estacionaría es el papel filtro, debido que actúa como una fase rígida que permite la adsorción de las tintas y permite su separación en la misma. 2. ¿Se usó soporte? ¿Cuál es la función de la cámara? R= No es necesario el uso de soporte en esta cromatografía. La cámara aporta tanto a la fase estacionaria como a la móvil condiciones climatológicas y ambientales con el fin de que se desarrolle sin problema alguno el proceso de separación. 3. ¿Cuál es la composición química de la fase estacionaria y de la móvil? R= La fase móvil se compone de etanol, un compuesto alcohólico conformado por dos carbonos simples con un radical OH. La fase estacionaria (papel) se compone de celulosa, un biopolímero compuesto de moléculas de β-glucosa.
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    4. ¿Todas lastintas corrieron igual? ¿Cuáles son las que mostraron más manchas? R= La mayoría (excepto la tinta verde) tuvo un corrimiento de tinta muy parecido debido a que estos presentaban una alta afinidad con respecto a la fase móvil. La tinta verde presentó corrimiento pero fue poco notorio. Ninguna de las tintas de las muestras no presentó más de una mancha. 5. ¿Cuál es el Rf de las tintas negras? ¿Entre las tintas negras hubo manchas que se repitieran? R= En el caso de esta práctica solo de determinó una tinta negra, dando un Rf de 0.81. No se pudo determinar manchas porque solo se determinó una sola tinta de este color. 6. ¿Hubo manchas que se repitieran entre las tintas del mismo color? R= No, debido a que solo se determinó una muestra por cada tinta en nuestro papel filtro. 7. ¿Podrías mejorar la separación cromatográfica? R= Esta cromatografía puede realizarse mejor si cambíamos las dimensiones de la fase estacionaria para permitir un corrimiento más prolongado y notorio. Las condiciones de las mismas pueden controlarse si la realizamos en una cámara cromatográfica. 8. Calcula la eficiencia de separación de las muestras que tuvieron dos manchas o más. ¿Qué podrías hacer para mejorar la eficiencia de la separación? R= Debido a que no hubo más de dos manchas en las muestras, solo se determinó la eficiencia de las que fueron obtenidas. 𝐸𝑓𝑛𝑒𝑔𝑟𝑎 = 16 ( 5.4 𝑐𝑚 3.4 𝑐𝑚 2⁄ ) = 50.72 𝐸𝑓𝑎𝑧𝑢𝑙 = 16 ( 4.8 𝑐𝑚 3.8 𝑐𝑚 2⁄ ) = 54.85 𝐸𝑓𝑟𝑜𝑗𝑎 = 16( 5.7 𝑐𝑚 3.7 𝑐𝑚 2⁄ ) = 49.29 𝐸𝑓𝑎𝑧𝑢𝑙 = 16 ( 3.3 𝑐𝑚 1.8 𝑐𝑚 2⁄ ) = 58.66 El número de platos teóricos en las 4 muestras es demasiado pequeño a comparación del límite mínimo aceptado en la cromatografía de este tipo (mayor a 300). Esto se debe a que solo se tomó en cuenta una mancha por cada muestra para realizar es cálculo, dando como conclusión que las muestras no migraron completamente debido a la falta de espacio en el papel filtro. 9. Calcula la resolución de las muestras que tuvieron dos manchas o más. ¿Qué podrías hacer para mejorar la resolución de la separación? R= Debido a la falta de más de dos manchas en cada muestras, no pudo determinarse este parámetro para esta separación. Corrimiento final de las muestras de tinta (N,A,R,V)
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    10. ¿Cuál esla naturaleza química de los colorantes utilizados en los bolígrafos? R= Las estructuras de las tintas negra, azul y roja comparten una afinidad apolar con respecto a la fase móvil, permitiendo que se solubilizen en el mismo y generen su corrimiento ascendente por el papel. Mientras que la titna verde presentaba poca afinidad debido a que en sue estructura presentaba mayor afinidad polar y tuvo un corrimiento más lento. 11. ¿Qué tipos de vidrio existen para laboratorio? (Busca en la FEUM) R= En los aparatos e instrumental de laboratorio se utilizan dos tipos de vidrio: A) Vidrio de sosa y cal: Se compone entre un 71 y 75% de arena (SiO2), 12 al 16% de NaHCO3 Y 10 al 15% de CaO. Este vidrio tiene una superficie lisa y sin poros, aunque es sensible a los cambios de temperatura. B) Vidrio borosilicato: Compuesto entre 70 y 80% de SiO2, 7 al 13% de B2O3, 4 al 8% de Na2O y 2 al 7% de Al2O3. Posee mayor resistencia química y térmica. Es utilizado en la fabricación de instrumental requerido para condiciones extremas o trabajos prolongados. 12. ¿Cómo definirías el frente y el origen? R= Son los intervalos donde la medición del recorrido de cada sustancia puede ser cuantificada sin salirse de los bordes del papel, con la diferencia de que el origen sirve como punto de partida para determinarlas. 13. ¿Por qué crees que no se utilizan los puntos en los extremos? R= Porque si realizamos la medición a partir de ellos, podemos obtener datos con dimensiones erróneas y afectaría al cálculo de los parámetros que necesiten esos datos. 14. ¿Por qué deben ser manejados con guantes? R= Porque las manos secretan ácidos grasos, sudor o contienen impurezas que pueden alterar la composición del papel al tocarlo directamente, afectando al corrimiento de la tinta ya sea retardando o inhibiendo la separación. 15. ¿Por qué esta práctica es imprecisa? R= Por que el corrimiento de las muestras no ocurre de manera uniforme, afectando a otras muestras y por ende, altera el reconocimiento y separación de las mismas. Glosario  Fase móvil: Es que aquella fase (ya sea liquida o gaseosa) que contiene la muestra que se desee separar. Esta recorre o traspasa la fase rígida llamada fase estacionaría con el fin de separar el analito de la muestra.  Fase estacionaria: Es un lecho fijo de gran área superficial. Puede ser un sólido poroso o finamente dividido, o un líquido que ha sido colocado en una capa delgada sobre un material de soporte inerte. Su función es retener la muestra que se desee separar.
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     Cromatografía: Esun técnica de separación basada en el principio de retención selectiva, que permite separar los distintos componentes de una mezcla facilitando su identificación y cuantificación. el fenómeno de separación ocurre al hacer pasar una fase móvil fluida (que arrastra a la mezcla, a través de una fase estacionaria de naturaleza rígida.  Rf: Se considera como la relación entre la distancia recorrida por el soluto y por el eluyente desde el origen de la placa o papel filtro. Tiene un valor constante para cada compuesto en condiciones cromatográficas determinadas. Se calcula al dividir la distancia recorrida por el compuesto sobre la distancia recorrida por el eluyente.  Resolución: El grado de separación o resolución de dos bandas adyacentes se define como la distancia entre los picos de las bandas (o centros) dividida entre el ancho promedio de las bandas.  Sensibilidad: Es la probabilidad de obtener resultados positivos en aquellos datos que cumplan con un criterio en específico. Poj ejemplo, se puede calcular la probabilidad de obtener aquellos pacientes que den positivo a una prueba de VIH entre aquellos que estén enfermos.  Especificidad: Es la probabilidad de obtener resultados negativos en aquellos datos que cumplan con un criterio en específico. Poj ejemplo, se puede calcular la probabilidad de obtener aquellos pacientes que den negativo a una prueba de BIH entre aquellos que estén sanos.  Precisión: Es la dispersión del conjunto de valores obtenidos de mediciones repetidas de una magnitud. Cuanto menor es la dispersión, mayor será la precisión.  Exactitud: Es la referencia a cuán cerca del valor real se encuentra el valor medido. En términos estadísticos, la exactitud está relacionada con el sesgo de estimación. Cuando menor sea el sesgo, más exacta será la estimación.  Repetitividad: Es la aptitud de un instrumento de medición para proporcionar indicaciones próximas entre sí para aplicaciones repetidas de la misma, mensurando bajo las mismas condiciones de medición.  Reproducibilidad: Es la proximidad de concordancia entre los resultados de mediciones del mismo, realizadas bajo condiciones variables de medición.  Eficiencia: Es el grado de separación de una muestra en el menor tiempo y las mejores condiciones posibles.
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    Bibliografía 1. Burriel Martí,F., Lucena conde, F., Arribas Jimeno, S., & Hernández Méndez, J. Química analítica cualitativa. Madrid: Paraninfo.1998.  Excelencia UAN. Cromatografía en capa fina. España: Universidad Autónoma de Madrid. De: https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion-p6.pdf  Gennaro, A.R. Remington: Farmacia. 20ª. edición. Volumen 1. México: Editorial Médica Panamericana. 2003. Pp. 686-689.  Web del profesor. Separación de cationes por cromatografía de papel. Venezuela: Universidad de los Andes. De: http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/rmhr/Index_archivos/Cromatografia_de _papel.pdf
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    http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/rmhr/Index_archivos/Cromatografia_de_papel.pdf https://es.scribd.com/doc/103144800/Practica-2-Cromatografia-de-Papel http://es.slideshare.net/honey61187/cromatografa-de-papel http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_papel https://books.google.com.mx/books?id=Av4IIsyH- qcC&pg=PA686&dq=fase+m%C3%B3vil&hl=es&sa=X&ei=ZvIMVZm9NcLdsATjyo HwBw&ved=0CCUQ6AEwAA#v=onepage&q=fase%20m%C3%B3vil&f=false http://es.slideshare.net/luisdracons/cromatografia-5540749 https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion- p6.pdf https://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20120813154900AABfp0k http://biblioteca.sena.edu.co/exlibris/aleph/u21_1/alephe/www_f_spa/icon/458 96/Informador62/3/vocabulario9.html https://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20120813154900AABfp0k Burriel Martí, F.,Lucena conde, F., Arribas Jimeno, S., & Hernández Méndez, J. Química analítica cualitativa. Madrid: Paraninfo.1998.
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    Práctica 2 “Cromatografíaen capa fina” Resultados y Discusiones 1.1Preparativos para la práctica En esta primera parte de la práctica, los docentes encargados realizaron la elaboración de la fase móvil a partir de los eluyentes disponibles, siendo en este caso Cloroformo y Metanol, ambos en proporción 9:1 (9 veces más volumen de cloroformo que de metanol), respectivamente. http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina https://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20080217111806AA2ykL8 http://www.academia.edu/7093683/Laboratorio_alcaloides https://www.google.com.mx/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=2&ved=0CCIQFj AB&url=http%3A%2F%2Ftx.technion.ac.il%2F~sbeer%2Fpublications%2FMetodo.doc&ei =TBE7VbelGMSHsAXQsIGQCA&usg=AFQjCNHXFpRo1236bXAmU3w34zIYhSo1bA&sig 2=2Gl8AlEhR-a8wQt_bCBltQ https://www.google.com.mx/search?newwindow=1&rlz=1C1PRFC_enMX571MX571&es_s m=93&q=cloroformo-metanol+9%3A1+capa+fina&oq=cloroformo- metanol+9%3A1+capa+fina&gs_l=serp.3...7045.9491.0.9851.10.10.0.0.0.0.159.908.6j3.9. 0.msedr...0...1c.1.64.serp..10.0.0.I4JCBxf4whg