Este documento describe un estudio que aisló e identificó bacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGPR) de composts de "alperujo", un residuo orgánico generado en la producción de aceite de oliva. Los investigadores realizaron experimentos para aislar bacterias fijadoras de nitrógeno de los composts utilizando dos métodos. Aislaron 4 cepas bacterianas con propiedades PGPR pertenecientes a los géneros Burkholderia, Bacillus, Gluconacetobacter y Pseudomonas. Concluyeron que los

1. Biofertilizantes con sabor a aceite de oliva:
Aislamiento de bacterias promotoras del crecimiento
vegetal (PGPR) de composts de “alperujo”
Alba Díaz Arco, María Molina Muñoz, Elena Navarro García, Carlos Ortega Fernández, Laura
Palma Pérez, María Carmen Sarmiento Vega, Antonio Castellano Hinojosa, Germán Tortosa
Muñoz y Eulogio J. Bedmar
Web del proyecto:
http://www.compostandociencia.com/
proyectos/piiisa2015-2016

2. -España (Andalucía) es la
principal productora de
aceite de oliva a nivel
mundial
- El 20% del peso de una
aceituna es aceite
- El 80% restante genera
un residuo orgánico muy
contaminante llamado
“alperujo”
- Para poder reutilizar este
residuo orgánico debemos
transformarlo

3. Inicio del compostaje
8 semanas
Maduro
- El COMPOSTAJE es un
método MICROBIOLÓGICO
que permite transformar
residuos orgánicos en
enmiendas o abonos
orgánicos (COMPOSTS)
- Es sencillo y
tecnológicamente
asequible
- Sirve para transformar el
“alperujo”
- El COMPOST obtenido
puede contener
microorganismos
beneficiosos para la
agricultura

4. - Estos microorganismos se
los conoce como
BACTERIAS PROMOTORAS
DEL CRECIMIENTO
VEGETAL (PGPR)
- Ayudan a las plantas
mejorando la
disponibilidad de
nutrientes del suelo
¿Cómo lo hacen?
- Fijación biológica de
nitrógeno atmosférico
- Producción de sideróforos
(quelantes de Fe)
- Solubilización de fosfato
insoluble del suelo

5. OBJETIVO DE
INVESTIGACIÓN
Aislar e identificar
bacterias PGPR
presentes en un
compost de “alperujo”
Dos aproximaciones
metodológicas basadas en
bacterias fijadoras de
nitrógeno:
1- Simbiosis con leguminosas
2- Bacterias en vida libre

6. 1- Bacterias que forman simbiosis con leguminosas
- Jarras Leonard
- Disolución nutritiva
sin nitrógeno
- Plantas de soja, judía
y garbanzo
- Material estéril
Dos experimentos:
Compost sólido
Compost líquido
Dos tratamientos:
Con compost
Sin compost

7. 1- Bacterias que forman simbiosis con leguminosas
- Solo encontramos nódulos
en raíces de judía al añadir el
compost en forma líquida
- No parece haber diferencias
entre plantas con y
sin compost
- Hay que hacer otro
experimento para
confirmar este
resultado

8. 2- Bacterias en vida libre - Extracción acuosa del compost
- Diluciones seriadas y cultivo en
placas petri con medio Burk (sin
nitrógeno)
- Selección de bacterias según su
morfología usando un
microscopio óptico
- Aislamiento y crecimiento en
placa “master”
- Cultivo en medio líquido
- Pruebas PGPR: producción de
sideróforos y solubilización de
fosfato
- Aislamiento de ADN,
amplificación del gen 16s rRNA,
secuenciación e identificación
de los aislados

9. 2- Bacterias en vida libre
- Se cuantificó la
cantidad de bacterias
cultivables fijadoras de
nitrógeno mediante la
técnica de las
diluciones seriadas
- Se obtuvo un total de
1,62 x 108 unidades
formadoras de colonias
(UFC) por gramo de
compost seco

10. - Aspecto de algunas
de las bacterias
seleccionadas en el
microscopio

11. - Prueba de producción de
sideróforos: se forma halo
naranja
- Prueba de solubilización
de fosfato inorgánico: se
forma halo trasparente
- Solo 4 aislados
presentaron propiedades
PGPR: cepa 1, 2, 7 y 9
- Fueron mejores que la
cepa PGPR de referencia
Azospirilum brasilense

12. - Se eligieron estas 4 cepas
para identificarlas
- Se extrajo su ADN y se
amplificó el gen 16s rRNA
- Su tamaño se comprobó
por electroforesis de gel de
agarosa y se secuenció
- Los aislados pertenecían a
los géneros Burkholderia,
Bacillus,
Gluconacetobacter y
Pseudomonas
- Una búsqueda
bibliográfica confirmó que
esos géneros tienen
propiedades PGPR

13. CONCLUSIONES
- Los composts de alperujo
son una fuente de bacterias
fijadoras de nitrógeno.
- Hemos conseguido aislar
4 bacterias con propieades
PGPR de los géneros:
Burkholderia, Bacillus,
Gluconacetobacter y
Pseudomonas.
- Los compost de “alperujo”
son potencialmente un
fertilizante biológico
además de orgánico.

14. ¡¡ Muchas gracias por vuestra intención!!