Este documento describe la técnica de radioinmunoensayo (RIA). RIA es un tipo de inmunoensayo competitivo desarrollado en 1960 que utiliza radioisótopos como marcadores. En RIA, un anticuerpo se une a una pequeña cantidad de analito marcado con un radioisótopo y a una cantidad variable de analito sin marcar de la muestra. La cantidad de analito marcado unido al anticuerpo se mide y se usa para calcular la concentración de analito en la muestra a través de una curva de calibración. RIA se

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Técnica de radioinmunoensayo (RIA)
Lic. Oscar Nicolás Ramírez
Área ELECSYS - Laboratorio INEN
2018
Conferencia para médicos residentes
en Endocrinología

2. INTRODUCCION
c
Inmunoensayo
Marcador molecular
Señal detectable
Alta especificidad y
afinidad de los anticuerpos
(Ac) por sus antígenos (Ag)
Ac Ac
Antígeno (Ag): bacteria, virus, proteína, péptido, esteroide, etc.
Anticuerpo (Ac): policlonal (suero animal) o monoclonal (hibridoma).

3. INTRODUCCION
Tipos de inmunoensayo
Principio de funcionamiento
No competitivo (inmunométrico,
tipo sándwich)
Competitivo
Quimioluminiscencia (CLIA): quelatos de rutenio
Marcador
Radioinmunoensayo (RIA): radioisótopo,125I-γ ó 3H-β
Enzimoinmunoanálisis (EIA): peroxidasa, fosfatasa
Inmunofluorescencia (FIA): quelatos de europio

4. INTRODUCCION
 Medición de niveles de hormonas. Ej. TSH, T3, LH, etc.
 Detección de virus. Ej. Hepatitis B (VHB).
 Detección de células malignas a través de sus marcadores tumorales.
 Cuantificación de metabolitos indicadores de problemas fisiológicos.
Ej. Ferritina, en el caso de anemia.
Aplicaciones de la inmunotecnología:
T3
VHB
Ferritina

5. Radioinmunoensayo (RIA)
 1ra generación de inmunoensayos, ensayo competitivo
 Desarrollado por Yallow y Berson en 1960 para la insulina.
 Reactivo limitante: Anticuerpo, Ac
 Radioisótopos con actividad específica elevada: 125I, 3H
Anticuerpos
generalmente
policlonales

6. Radioinmunoensayo (RIA)
Separación de los inmunocomplejos
Precipitación + centrifugación
 2do Anticuerpo (otra especie)
 PEG
 Tubos recubiertos
 Micropartículas magnéticas o de látex
 Placas para microtitulación (96 pocillos)
Inmovilización en fase sólida + decantación

7.  Total (T): Cantidad total de radiactividad adicionada a cada tubo.
 Unión inespecífica (NSB): mínimo % de unión del Ag* a altas
concentraciones de analito.
 B0 = B max (Blanco): % de unión del Ag* correspondiente a la concentración
cero del analito.
Radioinmunoensayo (RIA)
𝐵0(%) =
𝑆0 𝑐𝑝𝑚
𝑇 𝑐𝑝𝑚
x 100
NSB (%) =
𝑆/𝑀 𝑐𝑝𝑚 sin 𝐴𝑐
𝑇 𝑐𝑝𝑚
x 100
Parámetros
Ag*
Los ensayos se
montan por duplicado

8. Radioinmunoensayo (RIA)
Parámetros
Curva dosis-respuesta típica
 Controles: composición similar a la muestra utilizada y rango de
valores conocidos. Debe utilizarse al menos dos controles (al principio
y la mitad de la corrida o al final de la misma).
 Curva estándar (CST) o calibradores: determinación de la
concentración de Ag de cada muestra por interpolación.
y=mx+n, donde m<0 (0,8-1); n≠0
ED50: concentración de Ag que produce el
50% de la respuesta máxima.

9. Radioinmunoensayo (RIA)
Semi-log Logit-log
𝑙𝑜𝑔𝑖𝑡 𝑦 = ln
𝑦
1 − 𝑦
𝑦 = 𝐵 𝐵0 % =
𝑆 𝐶/𝑀 𝑐𝑝𝑚
𝑆0 (𝑐𝑝𝑚)
x 100
Porciento de unión (𝑩 𝑩 𝟎): desplazamiento del Ag* por el
analito de su unión máxima con el anticuerpo.
Detección - Métodos de linealización
La señal es detectada
en un gamma-contador
(125I emite radiación γ)
en forma de conteos
por minuto [cpm]
Los contadores incluyen
estos y otros métodos
de interpolación en su
programación

10. Radioinmunoensayo (RIA)
Ventajas:
 Cuantificación de los analitos
 Mayor sensibilidad y reproducibilidad que métodos físico-químicos
 Elección para analitos de bajo peso molecular
 Sensibilidad en el orden de pmol/pg (10-12)
Limitaciones
 Se requiere licencia estatal, entrenamiento previo y el tratamiento
adecuado de los desechos radiactivos.
 Reactivos, equipamiento e infraestructura costosa
 Los radioisótopos se degradan con el tiempo.
 Larga duración
Testosterona
T4