A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
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Tema 65 Características y concepto de: antígeno, determinantes del antigenico...Dian Alex Gonzalez
Antigeno: Molécula de procedencia exógena o endó- gena que resulta extraña al organismo. Puede ser específicamente unida por un anticuerpo o por un receptor de célula T, pero no necesariamente genera una respuesta inmune. Para aquellas moléculas que inducen una respuesta inmune, se ha propuesto el término de inmunógeno.......
Tema 65 Características y concepto de: antígeno, determinantes del antigenico...Dian Alex Gonzalez
Antigeno: Molécula de procedencia exógena o endó- gena que resulta extraña al organismo. Puede ser específicamente unida por un anticuerpo o por un receptor de célula T, pero no necesariamente genera una respuesta inmune. Para aquellas moléculas que inducen una respuesta inmune, se ha propuesto el término de inmunógeno.......
En esta presentación se exponen las técnicas aplicadas para el aislamiento, purificación y cuantificación de ácidos nucleicos previos a su utilización para la aplicación de técnicas de diagnóstico molecular. Se exponen también los fundamentos y las principales caracteristicas de cada técnica.
TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR: se denomina así a todas las técnicas de laboratorio que se usan para aislar ADN o extraerlo en alta pureza, visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo, amplificar una región en una enorme cantidad de moléculas.
Genes involucrados en la transcripción del cáncer colorrectalBryan Priego
Distintas modificaciones epigenéticas han sido descritas que se asocian con el cáncer colorrectal, destaca la interacción entre la microbiota, con modificaciones epigenéticas involucradas en el proceso d egeneracion del cáncer colorrectal. Se revisan mecanismos epigenéticos, estrategias de tamizaje y se describe el cáncer colorrectal.
Abordaje de los tumores óseos desde el punto de vista de la traumatología.
-Introducción
-Tumores benignos y malignos
-Clasificación
-Manifestaciones clínicas
-Métodos diagnósticos
-Tratamiento
https://twitter.com/BryanPriegoP
VPH: Lesiones premalignas de Cuello uterino: LIEBG, LIEAGBryan Priego
Lesiones pre-neoplásicas para el desarrollo de CACU
-Fotos y videos
-Vacunas terapéuticas y profilácticas
-Estructura del Virus: Proteínas E6 y E7
-Citología cervical: seriada y líquida
-Clasificación betesdha y last (Lower anogenital scams terminology standardization project for HPV associated lession)
-Atipia
-Lesiones de alto y bajo grado
-Tamizaje
-Manifestaciones clinicas
-Tratamiento: Colposcopia, bisturi frio, conizacion,
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Caso clínico: Pericarditis, Perimiocarditis, Infarto.Bryan Priego
Caso clínico con diagnósticos diferenciales de:
-Infarto agudo al miocardio
-Infarto auricular
-Miocarditis
-Perimiocarditis
-Pericarditis
Síntomas
Métodos diagnostico
Tratamiento
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Fracturas de pierna: Tibia y peroné, mecanismos, tipos de fracturas.
-Fracturas del tercio proximal
-Fracturas del tercio medio
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-Tratamiento
-Complicaciones
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Estado intersexual (Trastorno del desarrollo Genital), Hermafroditismo, pseud...Bryan Priego
Embriología, fisiopatología, Clínica, tipos y tratamiento de los Trastornos del desarrollo genital.
Hermafroditismo verdadero
pseudohermafroditismo
Agenesia Gonadal
Hiperplasia Suprarenal Congénita
Sx turner
Sx Swyer
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En el marco de la Sexta Cumbre Ministerial Mundial sobre Seguridad del Paciente celebrada en Santiago de Chile en el mes de abril de 2024 se ha dado a conocer la primera Carta de Derechos de Seguridad de Paciente, a nivel mundial, a iniciativa de la Organización Mundial de la Salud (OMS).
Los objetivos del nuevo documento pasan por los siguientes aspectos clave: afirmar la seguridad del paciente como un derecho fundamental del paciente, para todos, en todas partes; identificar los derechos clave de seguridad del paciente que los trabajadores de salud y los líderes sanitarios deben defender para planificar, diseñar y prestar servicios de salud seguros; promover una cultura de seguridad, equidad, transparencia y rendición de cuentas dentro de los sistemas de salud; empoderar a los pacientes para que participen activamente en su propia atención como socios y para hacer valer su derecho a una atención segura; apoyar el desarrollo e implementación de políticas, procedimientos y mejores prácticas que fortalezcan la seguridad del paciente; y reconocer la seguridad del paciente como un componente integral del derecho a la salud; proporcionar orientación sobre la interacción entre el paciente y el sistema de salud en todo el espectro de servicios de salud, incluidos los cuidados de promoción, protección, prevención, curación, rehabilitación y paliativos; reconocer la importancia de involucrar y empoderar a las familias y los cuidadores en los procesos de atención médica y los sistemas de salud a nivel nacional, subnacional y comunitario.
Y ello porque la seguridad del paciente responde al primer principio fundamental de la atención sanitaria: “No hacer daño” (Primum non nocere). Y esto enlaza con la importancia de la prevención cuaternaria, pues cabe no olvidar que uno de los principales agentes de daño somos los propios profesionales sanitarios, por lo que hay que prevenirse del exceso de diagnóstico, tratamiento y prevención sanitaria.
Compartimos el documento abajo, estos son los 10 derechos fundamentales de seguridad del paciente descritos en la Carta:
1. Atención oportuna, eficaz y adecuada
2. Procesos y prácticas seguras de atención de salud
3. Trabajadores de salud calificados y competentes
4. Productos médicos seguros y su uso seguro y racional
5. Instalaciones de atención médica seguras y protegidas
6. Dignidad, respeto, no discriminación, privacidad y confidencialidad
7. Información, educación y toma de decisiones apoyada
8. Acceder a registros médicos
9. Ser escuchado y resolución justa
10. Compromiso del paciente y la familia
Que así sea. Y el compromiso pase del escrito a la realidad.
DIFERENCIAS ENTRE POSESIÓN DEMONÍACA Y ENFERMEDAD PSIQUIÁTRICA.pdfsantoevangeliodehoyp
Libro del Padre César Augusto Calderón Caicedo sacerdote Exorcista colombiano. Donde explica y comparte sus experiencias como especialista en posesiones y demologia.
REALIZAR EL ACOMPAÑAMIENTO TECNICO A LA MODERNIZACIÓN DEL SISCOSSR, ENTREGA DEL SISTEMA AL MINISTERIO DE SALUD Y PROTECCIÓN SOCIAL PARA SU ADOPCIÓN NACIONAL Y ADMINISTRACIÓN DEL APLICATIVO, EN EL MARCO DEL ACUERDO DE SUBVENCIÓN NO. COL-H-ENTERRITORIO 3042 SUSCRITO CON EL FONDO MUNDIAL.
descripción detallada sobre ureteroscopio la historia mas relevannte , el avance tecnológico , el tipo de técnicas , el manejo , tipo de complicaciones Procedimiento durante el cual se usa un ureteroscopio para observar el interior del uréter (tubo que conecta la vejiga con el riñón) y la pelvis renal (parte del riñón donde se acumula la orina y se dirige hacia el uréter). El ureteroscopio es un instrumento delgado en forma de tubo con una luz y una lente para observar. En ocasiones también tiene una herramienta para extraer tejido que se observa al microscopio para determinar si hay signos de enfermedad. Durante el procedimiento, se hace pasar el ureteroscopio a través de la uretra hacia la vejiga, y luego por el uréter hasta la pelvis renal. La uroteroscopia se usa para encontrar cáncer o bultos anormales en el uréter o la pelvis renal, y para tratar cálculos en los riñones o en el uréter.Una ureteroscopia es un procedimiento en el que se usa un ureteroscopio (instrumento delgado en forma de tubo con una luz y una lente para observar) para ver el interior del uréter y la pelvis renal, y verificar si hay áreas anormales. El ureteroscopio se inserta a través de la uretra hacia la vejiga, el uréter y la pelvis renal.Una vez que esté bajo los efectos de la anestesia, el médico introduce un instrumento similar a un telescopio, llamado ureteroscopio, a través de la abertura de las vías urinarias y hacia la vejiga; esto significa que no se realizan cortes quirúrgicos ni incisiones. El médico usa el endoscopio para analizar las vías urinarias, incluidos los riñones, los uréteres y la vejiga, y luego localiza el cálculo renal y lo rompe usando energía láser o retira el cálculo con un dispositivo similar a una cesta.Náuseas y vómitos ocasionales.
Dolor en los riñones, el abdomen, la espalda y a los lados del cuerpo en las primeras 24 a 48 horas. Pain may increase when you urinate. Tome los medicamentos según lo prescriba el médico.
Sangre en la orina. El color puede variar de rosa claro a rojizo y, a veces incluso puede tener un tono marrón, pero usted debería ser capaz de ver a través de ella
. (Los medicamentos que alivian la sensación de ardor durante la orina a veces pueden hacer que su color cambie a naranja o azul). Si el sangrado aumenta considerablemente, llame a su médico de inmediato o acuda al servicio de urgencias para que lo examinen.
Una sensación de saciedad y una constante necesidad de orinar (tenesmo vesical y polaquiuria).
Una sensación de quemazón al orinar o moverse.
Espasmos musculares en la vejiga.Desde la aplicación del primer cistoscopio
en 1876 por Max Nitze hasta la actualidad, los
avances en la tecnología óptica, las mejoras técnicas
y los nuevos diseños de endoscopios han permitido
la visualización completa del árbol urinario. Aunque
se atribuye a Young en 1912 la primera exploración
endoscópica del uréter (2), esta no fue realizada ru-
tinariamente hasta 1977-79 por Goodman (3) y por
Lyon (4). Las técnicas iniciales de Lyon
La sociedad del cansancio Segunda edicion ampliada (Pensamiento Herder) (Byun...JosueReyes221724
La sociedad del casancio, narra desde la perspectiva de un Sociologo moderno, las dificultades que enfrentramos en las urbes modernas y como estas nos deshumanizan.
Unidad 6 Reacciones psicológicas ante la enfermedad, padecimiento y malestar(...
Radioinmunoensayo, ELISA y Western Blot
1. Radioinmunoensayo,
ELISA y Western Blot
M.D Bryan Adrian Priego Parra
Biología Celular
Dra. Rossana Citlali Zepeda Hernández
Centro de Investigaciones Biomédicas
Universidad Veracruzana
2. • Antígeno: molécula externa que produce una respuesta inmune
• Anticuerpo: Proteína elaborada en respuesta a un antígeno
4. Radioinmunoensayo (RIA)
• 1960: Solomon Berson y Rosalyn Yalow Concentración de insulina
plasmática
YALOW RS, BERSON SA. Immunoassay of endogenous plasma insulin in man. J Clin Invest. 1960;39(7):1157-1175. doi:10.1172/JCI104130
5. Fundamento:
Radioinmunoensayo
• Competencia de unión entre la sustancia desconocida a cuantificar y cantidades
conocidas de la misma sustancia marcada con un radioisótopo (131I, 14C)
• Formar complejos Ag-Ac o Ag*Ac
Directo: Cuantifica radiación emitida por el antígeno que no reacciona.
Indirecto: Radiación emitida desde el anticuerpo que reacciona.
6. RIA: Pasos generales
Nota al léctor: Si tengo una muestra que no conozco, en
caso de que esta contenga antígenos, van a competir
contras los radioisótopos marcados para unirse contra los
anticuerpos. (A mayor cantidad de antígeno que tenga la
muestra, menos cantidad antígeno marcado va a tener,
por lo tanto, menor radioactividad (gráfica)
7. Radioinmunoensayo
• Ventajas:
• Puede detectar pequeñas cantidades (picogramos) de ag o ac en el suero.
• Muy alta sensibilidad
• Limitaciones:
• Radioactivo
• Equipo especial para manipular muestra
• ¿Desechos radioactivos?
• Vida media de radioisótopos es corta
10. • ElISA: Descrito en 1971 en Suecia por Eva Engvall y Peter Perlmann
11. ELISA fundamento
• Uso de Ag o Ac marcados con una
enzima e insolubilizado sobre un
pocillo inmunoadsorbente
• Detecta reacción Ag-Ac al añadir un
substrato que produce que la
enzima produzca un color
• Se cuantifica la longitud de la onda
mediante un espectrofotómetro
12. Tipos de enzimas y sustratos
Enzima Sustrato
Peróxidasa de rabano Peróxido de hidrógeno
B-Galactosidasa O-nitrofenil-Beta-D-Galactopiranósido
Fosfatasa alcalina P-nitrofenilfosfato
13. Materiales ELISA
• Placas de micropocillos (8x12=96)
• Recipientes para los reactivos
• Pipetas de distintos volúmenes
• Puntas de pipeta
• Muestra
• Antígenos
• Anticuerpos
• Enzimas
• Lector de microplacas (400 nm-700 nm)
• Buffer de lavado
• Solución Stop
• Espectrofotómetro
14. Pasos generales: ELISA
Revestimiento: Antígeno se
adsorbe en el pocillo de la
placa ELISA con el buffer de
recubrimiento
Remover el buffer y lavar
Bloqueo: Tampón con proteína
no relacionada bloquea los sitios
libres en los pocillos
Remover el buffer y lavar
Detección : Ac de detección
conjugado con una enzima se
una al Ag
Remover el buffer y lavar
Lectura: El sustrato es
catalizado por una enzima
cromógena = lectura en color
17. Elisa directo
• Ventajas:
• Rápido.
• Al tener menos pasos hay menor probabilidad de error.
• Elimina la reactividad cruzada entre anticuerpos
• Desventajas:
• Inmovilización del antígeno no específica
• La señal se amplifica menos
• Menor sensibilidad que otros tipos de ELISA
• Usos: Detección de antígenos.
18. ELISA INDIRECTO
Antígeno adsorbido
en el pocillo
Detección: 2 pasos
1.- El anticuerpo
primario no
marcado se une al
antígeno específico
2.-Un anticuerpo
secundario
conjugado con
enzimas se dirige
contra el
anticuerpo primario
Cambio de
coloración al añadir
substrato
19. Elisa indirecto
• Ventajas:
• Alta sensibilidad: más de un ac
secundario puede unirse al Ac primario
• Flexible: Diferentes ac primarios pueden
usarse con un solo Ac secundario
• Desventajas:
• Puede haber reactividad cruzada con el
Ac secundario
• Fases de incubación adicionales = más
tiempo
• Usos: Detección de anticuerpos
20. Elisa tipo Sándwich
• Requiere de pares de anticuerpos
para captura y detección.
• Cada anticuerpo es específico
para un epítopo diferente.
Placa cubierta
con un
anticuerpo de
captura
Se agrega el
analito o la
muestra
seguido de un
Ac de
detección
Sándwich directo:
Ac de detección
conjugado con
enzima
Sándwich Indirecto:
Ac de detección no
marcado y requiere
de un Ac
secundario
conjugado con una
enzima
Cambio de
coloración al añadir
substrato
21. Elisa
Sándwich
• Ventajas:
• Alta sensibilidad: 2-5 veces más sensible que Elisa directo/indirecto
• Alta especificidad: dos Ac están involucrados en la captura y detección
• Flexibilidad: Se puede usar detección directa o indirecta
• Desventajas:
• La optimización de los Ac puede ser difícil
• Puede ocurrir reactividad cruzada entre los anticuerpos de captura y detección
• Usos: Análisis de muestras complejas (pej: endotelina o
proteínas de supervivencia de neuronas motoras)
22. Elisa
competitivo
• Mide la concentración de un Ag o Ac mediante la
detección de interferencia en la señal de salida
esperada
23. Elisa competitivo
Revestimiento: El Ag
de control se
absorbe en el pocillo
en un tampón de
recubrimiento
Remover líquido y
lavar
Bloqueo: Tampón
con proteína no
relacionada bloquea
los sitios libres en
los pocillos
Preparar la mezcla de la
muestra anticuerpos de
detección
Muestra: Agregar la
mezcla de la
muestra en los
pocillos
Anticuerpo de
detección: Añadir
un Ac de detección
secundario
conjugado con una
enzima
Lectura: El sustrato
es catalizado por
una enzima que
genera color
Remover líquido y
lavar
Remover líquido y
lavar
• El Ag de la muestra y el ag
purificado compiten por la
unión del Ac
• A mayor concentración de
Ag, más débil será la señal de
salida
24. Elisa
competitivo
• Ventajas:
• No se requiere procesamiento de muestras
• Las muestras se pueden usar sin purificar
• Menos probable que se diluya la muestra
• Menor variabilidad entre muestras duplicadas
• Desventajas:
• Las de cada técnica Elisa debido a que cada una
puede adaptarse a competitivo
• Usos: Cuando solo hay un Ac disponible para el
antígeno pej: Oxitocina o Corticoesterona.
25. Aplicaciones de Elisa
• Parásitos
• Hormonas (HCG, progesterona,
testosterona)
• Cuantificación de
inmunoglobulinas (IgG, IgE, IgA)
• Enfermedades autoinmunes: AC
anti DNA, ANCA, Factor
reumatoide, inmunocomplejos,
etc
28. Western blot
• Técnica usada para la detección de proteínas específicas en una
muestra
• Pej:
• Encefalopatía espongiforme
• Enfermedad de Lyme
• Gold standard: VIH
29. Western blot: Fundamento
• Se basa en el principio de
inmunocromatografía donde las
proteínas se separan en un gel de
poliacrilamida de acuerdo con su peso
molecular.
• Los antígenos transferidos a la
membrana son reconocidos por Ac
mono o policlonales específicos y
cuantificados.
30. Western blot: 1.- Preparación de la muestra
• Lisis por detergente Cultivo celular
• Ultrasonificación Suspensión celular
• Homogeneización mecánica Tejidos animales o vegetales
• Digestión enzimática Bacterias, levaduras y hongos.
• Proceso realizado a bajas temperaturas para evitar ruptura celular.
31. Western blot: Pasos generales
• 1.- Método apropiado de
extracción de proteínas
• 2.- Electroforesis en gel
• 3.- Transferencia de
proteínas
• 4.- Inmunodetección de
las proteínas por
anticuerpos
• 5.- Análisis de la
información
32. Detección de proteína:
• Quimioluminiscencia: Ac secundarios
conjugados con peroxidasa Reacción
luminiscente que se captura en una
película o de forma digital con una
cámara CCD.
• Fluorescencia: Ac secundario unido a un
fluoróforo que cuando se excita emite
luz Se mide la longitud de onda
• Colorimetría: Anticuerpo secundario
conjugado con una enzima cromógena.
33. Limitaciones: Western Blot
• Requiere de una correcta extracción y cuantificación de proteínas
• Más tiempo
• Más complejo, necesita ser realizado por personal capacitado
• Se necesita disponibilidad de los Ac primarios para las proteínas
• Los Ac pueden reaccionar con más de una proteína
• $$$
• La membrana puede no retener proteínas pequeñas
• Las proteínas grandes son difíciles de transferir a la membrana
34. Métodos de detección Western Blot
Método de detección Ventaja Desventaja
Radioactividad Alta sensibilidad Riesgos en bioseguridad
Colorimétrica Rapidez, sencillez y menor
costo
Baja sensibilidad
Quimioluminiscencia Alta sensibilidad Equipamiento especial
para lectura de resultados
Fluorescencia Más estable, permite
cuantificar la proteína en
la muestra, se pueden usar
Ac marcados con
fluoróforos con diferente
longitud de onda
Menor sensibilidad que QL
y se necesita
equipamiento
especializado
35. Conclusiones
• Inmunoensayos son métodos
bioanalíticos ampliamente utilizados
para diagnóstico de patologías,
monitoreo de niveles de drogas,
hormonas y farmacocinética clínica,
alergias, etc.
• No existe un método perfecto, es
necesario conocer usos y limitaciones
así como conocer los recursos
disponibles de cada centro.
36. Bibliografía
1.- Gorovits B, Baltrukonis DJ, Bhattacharya I, et al. Immunoassay methods used in
clinical studies for the detection of anti-drug antibodies to adalimumab and
infliximab. Clin Exp Immunol. 2018 Jun;192(3):348-365.
2.- Roggenbuck JJ, Zarske G, Schierack P, et al . Third generation radioimmunoassay
(RIA) for TSH receptor autoantibodies (TRAb) - one step less, similar results?
Nuklearmedizin. 2021 Feb;60(1):38-46.
3.- Kohl TO, Ascoli CA. Direct Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
(ELISA). Cold Spring Harb Protoc. 2017 Jul 5;2017(7):pdb.prot093740.
4.- Judith A. Owen, Jenni Punt, Sharon A. Stranford, Patricia p. Jones.– Kuby
Inmunología. Séptima edición.--México, D. F. : McGraw-Hill, 2014. 692 páginas
5.- Pillai-Kastoori L, Schutz-Geschwender AR, Harford JA. A systematic approach to
quantitative Western blot analysis. Anal Biochem. 2020 Mar 15;593:113608.