El documento describe marcadores tumorales y técnicas inmunológicas para detectarlos. Los marcadores tumorales son sustancias producidas por células cancerosas que pueden medirse para diagnosticar y monitorear el cáncer. Las técnicas inmunológicas como ELISA utilizan la unión específica antígeno-anticuerpo para detectar marcadores. ELISA es un método sensible para medir marcadores como el antígeno prostático específico usado en la detección temprana del cáncer de próstata.
Es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o algún otro tipo.
Es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o algún otro tipo.
La prueba ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica utilizada para detectar la presencia de anticuerpos o antígenos en una muestra biológica. Se basa en la unión de un anticuerpo específico a un antígeno, seguido de la unión de una enzima a dicho anticuerpo. La reacción enzimática produce un cambio de color que indica la presencia del anticuerpo o antígeno de interés.
Radioinmunoensayo, ELISA y Western BlotBryan Priego
A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
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2. MARCADORES TUMORALES
Sustancia generalmente de carácter
proteico producidas por tejidos tumorales.
Lo ideal es que sean sensibles y
capaces de detectar a los enfermos con
cáncer, evitando los falsos negativos.
3. MARCADOR TUMORAL
• Biomolecula o proceso biologico que
puede ser medido y que es sintetizado o
liberado por las celulas cancerosas como
respuesta a un proceso tumoral maligno.
• Marcado tumoral ideal: especificidad
100%: especifico del tumor.
• Sensibilidad 100%: Dx etapas tempranas.
4. CONCEPTOS
Son sustancias antigénicas que pueden
ser dosables en tejidos, orina y sangre.
Pueden elevarse en condiciones
benignas.
Algunos no son específicos de un tipo
particular de cáncer.
No se elevan en todos los portadores de
cáncer
5. CONCEPTOS
• Especialmente en etapas tempranas de
la enfermedad
• Los niveles se miden para programar la
terapia y seguimiento
• Su disminución es signo favorable del
tratamiento
• Control de recaída
7. CLASIFICACIÓN
MARCADORES TUMORALES SEGÚN SU ESTRUCTURA
TIPO DE MARCADOR EJEMPLO
Fosfatasa ácida, fosfatasa alcalina,
ENZIMAS creatincinasa, deshidrogenasa láctica,
enolasa neuroespecífica,…
Gonadotropina coriónica humana,
HORMONAS,
catecolaminas (y metabolitos),
NEUROTRANSMISORES Y SUS
serotonina y ácido 5-
METABOLITOS
hidroxindolacético,…
α-fetoproteína, antígeno
carcinoembriónico, antígeno específico
PROTEÍNAS
de la próstata, ferritina,
inmunoglobulinas, CA19-9, CA15-3,…
RECEPTORES CELULARES Estrógeno y progesterona
ÁCIDOS NUCLEICOS DNA
8. ANTÍGENO PROSTÁTICO
ESPECÍFICO (PSA)
DIAGNÓSTICO:
• Tacto rectal:
• PSA
• Biopsia: para determinar si una masa
sospechosa es CA de próstata
examinar microscópicamente una
muestra del tejido tomado del área.
9. PSA
CARACTERISTICAS:
– Glucoproteina 28.4KDa.
– células de acini prostático normal, hiperplasia
y cáncer de prostata
– valores de referencia: hasta 4 ng/ml
10. PSA
INDICACIONES:
– Screening CA. Prostata: PSA + Tacto rectal,
Sensbilidad:96%
– Diagnostico:
• Hasta 4 ng/ml se considera normal
• > 4 hasta 10 ng/ml Sospechoso ( Adenoma
prostático ó prostatitis)
• > 10 ng/ml Gran probabilidad de ser CA. Próstata
– SEGUIMIENTO:
• A las 6 semanas postquirúrgico se hace no detectable
• aumento: recurrencia ó metastasis
11. PSA
• 200.000 casos anuales.
• Segundo cáncer más
mortífero en hombres.
• Aparece sobre los 60 años.
• Normalmente se detecta
cuando el tumor ya está muy
avanzado y es de difícil
curación. Si e detectase a
tiempo, las posibilidades de
sobrevivir son muy altas
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21. TECNICAS INMUNOQUIMICAS
• Técnicas de laboratorio que aplican las
propiedades de la reacción antígeno- anti
cuerpo para medir compuestos, enzimas
entre otros.
• ANTIGENO (Ag)
Material que estimula la formación de
anticuerpos. Es un Inmunógeno. Epitope.
22. TECNICAS INMUNOQUIMICAS
ANTICUERPO (Ac)
Proteínas tipo gamaglobulinas, formadas
por dos cadenas pesadas y dos livianas.
Cada cadena posee una región constante y
una variable (le confiere el carácter único
al Ac, por allí se une al Ag)
Inmunoglobulinas (paratopo )
Hay 5 tipos: Ig M, Ig G, Ig A, Ig E, Ig D.
24. TECNICAS INMUNOQUIMICAS
REACCIONES AG - AC:
La unión Ag-Ac es no covalente,
intervienen fuerzas como:
Atracción electrostática
Fuerzas de Van der Waals
Puentes de hidrógeno
Interacciones hidrofóbicas
25. TECNICAS INMUNOQUIMICAS
CARACTERISTICAS UNION AG-AC:
La especificidad de la reacción es 100%
Ag + Ac Ag - Ac
a. Afinidad
b. Heterogeneidad de la respuesta
c. Avidez
d. Reactividad cruzada
Es Reversible
Serologìa: el estudio de las reacciones Ag,Ac.
26. Caracteristicas unión Ag-Ac
Afinidad
Es la suma de todas las fuerzas atractivas y
repulsivas entre un sitio de unión de ese
anticuerpo y el correspondiente epitopo.
Avidez
Es la fuerza con la que el Ac multivalente se une a
un Ag multivalente. Aunque depende de las
afinidades individuales de cada uno de los
determinantes individuales de ese antígeno, su
valor es mucho mayor que la suma de afinidades.
27. CLASIFICACION DE LOS
INMUNOENSAYOS
La reacción Ag – Ac es indetectable in vitro.
Requiere una segunda reacción o fase
indicadora, que permite clasificarlas en:
• Neutralización
• Inmunoensayos de precipitación
• Inmunoensayos por aglutinación
• Fijación del complemento
• Inmunonefelometría
• Inmunoensayos: ELISA, RIA, etc.
31. DETECCION PSA
A ntígen os
1 +
A n ticu erpos
P rim er co m plejo A c-A g
S up erficie só lida
I
I
I
+ I
2 I
I
E xceso d e anticuerp os m arcados
C o m p lejo "sandw ich " A c-A g-A c*
32.
33. ELISA directo (ensayo ELISA simple de dos capas). Las
placas ELISA se preparan recubriendo los pocillos con
las soluciones en las que se sospecha se encuentra el
antígeno. Se incuban con anticuerpos marcados. Indican
la presencia de antígeno en la solución analizada
ELISA indirecto: Las placas ELISA se preparan de una
forma idéntica a la anterior. Los controles positivos y
negativos son los mismos. El sistema de detección
emplea dos anticuerpos : uno primario contra el
antígeno, y uno secundario marcado contra el primario
34. ELISA sandwich (ensayo de captura de antígeno y
detección mediante inmunocomplejos).
el pocillo con un primer anticuerpo anti-antígeno se lava el
exceso de anticuerpo, se aplica la muestra donde se
encuentra el antígeno, que será retenido en el pocillo al ser
reconocido por el primer anticuerpo.
Después de un segundo lavado se elimina el material no
retenido se aplica una solución con un segundo anticuerpo
anti-antígeno marcado.
Cada molécula de antígeno estará unida a un anticuerpo en la
base y un segundo anticuerpo, que lo marca. Este ensayo
tiene una gran especificidad y sensibilidad debido a la
amplificación de señal que permite el segundo anticuerpo.