La cromatografía es un método de análisis que separa los componentes de una mezcla mediante la interacción de fases móviles y estacionarias. La cromatografía líquida, utilizada desde 1903, ha evolucionado y se aplica en el análisis de sustancias no volátiles y térmicamente sensibles, como proteínas y compuestos orgánicos. La cromatografía de alto rendimiento (HPLC) es especialmente útil en biotecnología y farmacéutica, permitiendo la detección y cuantificación de diversos compuestos en alimentos y productos químicos.

1. Angie Lorena Cárdenas Puerto
Miguel Ángel Hernández Pérez
Andrés Felipe Sabogal Osorio
Estefany Tatiana Trilleras Quevedo

2.  La cromatografía es un método de análisis
rápido que permite separar los
constituyentes de una mezcla utilizando
las diferencias de estas sustancias entre
sus constantes de equilibrio durante su
distribución entre una fase móvil y una
fase denominada estacionaria que ejerce
sobre ellas un efecto retardador

3.  Fase estacionaria
 Fase móvil
 Muestra
La muestra interactúa con el medio o matriz de
soporte que se denomina fase estacionaria; un
segundo medio (fase móvil) que no puede
mezclarse con la fase estacionaria se hace fluir
en esta para “lavar” a las moléculas en la
muestra.

4.  La cromatografía liquida
fue la primera en aparecer
cronológicamente,
utilizada por primera vez
en 1903-1906 por el
botánico ruso Mikhail
Tswett para separar los
componentes coloreados
de un extracto de plantas.

5. La cromatografía liquida es un método de
análisis que permite separar mezclas en sus
componentes individuales, utilizando como
fase móvil un liquido (eluyente).

6.  Un liquido (fase móvil) circula en un
intimo contacto con un solido u otro
liquido inmiscible (fase estacionaria), al
introducir una mezcla de substancias
(analito) en la corriente de fase móvil,
cada analito avanzará a lo largo del
sistema con una velocidad diferente que
dependerá de su afinidad por una de las
fases.

7. Después de terminado el recorrido de la
muestra por la columna, cada una de las
sustancias introducidas en el sistema eluirá
con un tiempo diferente, es decir estarán
separadas).

8. La cromatografía de líquidos es adecuada
para el análisis de moléculas no volátiles y
térmicamente sensibles, incluyendo
compuestos de alto peso molecular como
proteínas.

9. CROMATOGRAFÍA DE
REPARTO/ADSORCION (FASES
LIGADAS QUÍMICAMENTE)
• La separación se basa en un
reparto del soluto entre la
fase móvil y la fase
estacionaria.
CROMATOGRAFÍA DE
ADSORCIÓN (LIQUIDO –
SOLIDO)
• La fase estacionaria es un
adsorbente y la separación
se basa en repetidas etapas
de adsorcion-desorcion

10. CROMATOGRAFÍA DE
INTERCAMBIO IÓNICO
•La fase estacionaria
presenta en su
superficie grupos
ionizados capaces de
retener selectivamente
a iones se signo
contrario que circulan
en la fase móvil.
CROMATOGRAFÍA DE
EXCLUSIÓN MOLECULAR
•La fase estacionaria es
un material poroso de
tamaño de poro
controlado, que
permite la entrada de
ciertas moléculas de
manera selectiva,
dejando fuera otras de
mayor tamaño.

11. TIPO
FASE
ESTACIONARIA
FASE MÓVIL INTERACCIÓN
Adsorción solido Liquido-gas Fuerzas v.w.
Cambio
iónico
resina liquido f. elect
exclusión gel liquido
Tamaño de
partícula
afinidad solido liquido
Interacción
biológica
partición liquido Liquido-gas solubilidad

12. La cromatografía liquida también se
divide en dos métodos atendiendo a la
polaridad de la fase estacionaria:
Cromatografía de fase normal
Cromatografía de fase reversa(inversa)

14. La fase estacionaria presenta puntos
activos de alta polaridad y las
interacciones que se producen con
el soluto son especificas del grupo
activo.

15. La fase estacionaria pude ser un
soluto adsorbente (sílice o alúmina)
o un soporte al que se unen
químicamente moléculas orgánicas
que presentan grupos funcionales
de alta polaridad ( ciano, amino,
etc.)

18. La fase estacionaria tiene una naturaleza
apolar (cadenas hidrocarbonadas, grupos
fenilo) y las interacciones que se
producen son inespecíficas (efecto
solvófobo).

20. El uso del gas especial y el equipo
correctos cuando realice una
cromatografía de líquidos de alto
rendimiento (HPLC) mejorará
considerablemente la precisión de
sus resultados.

21.  La HPLC es particularmente
útil para la separación de
materiales con grandes
pesos moleculares que
presentan una volatilidad
muy baja y no pueden
separarse mediante
cromatografía de gases. Se
usa principalmente en la
biotecnología, en ciencias y
la industria farmacéutica.

22. Algunas aplicaciones incluyen sustancias tan
diversas como aminoácidos, proteínas,
ácidos nucleicos, hidrocarburos,
carbohidratos, fármacos, terpenos,
plaguicidas, antibióticos, esteroides, especies
organometálicas y una gran variedad de
sustancias inorgánicas
El empleo de HPLC en
sus muchas variantes se
ha sido especializado.

23.  Detección y cuantificación de sacarina,
benzoatos, cafeína y aspartame en
refrescos.
 Detección de ciclomato en jugos de fruta.
 Separación de ésteres de ácidos grasos por
fase inversa y con argentización de
columnas (Silicato de Al con Ag).

24.  Separación de Triglicéridos por la longitud de
la cadena y el grado de insaturación por fase
inversa y detector de dispersión luminosa,
para el estudio de aceites y grasas
adulteradas.
 Determinación del contenido de Vitamina A y
sus precursores (αyβcaroteno)en margarina y
aceites de hígado por fase inversa.
 Determinación del contenido en Vitamina D
en leche en polvo y cereales por fase normal