El documento define conceptos relacionados con cromosomas humanos como sitios frágiles, heteromorfismos cromosómicos y heterocromatina constitutiva. También explica la importancia de reactivos como la bromodeoxiuridina, la mostaza de quinacrina y el diepoxibutano en los cultivos celulares para obtener cromosomas in vitro. Finalmente, describe técnicas y marcadores moleculares como PCR, RFLP, SSR, ALFP, Southern blot y FISH, y explica su fundamento y uso para analizar

1. CROMOSOMAS HUMANOS: CARIOTIPO, MICROSCOPIA
1. Defina los siguientes conceptos
• Sitios frágiles :
Los sitios frágiles comunes se definen como regiones del cromosoma eucariota con
tendencia a sufrir fracturas o quiebres frente a sustancias inductoras adicionadas al medio
de cultivo linfocitario como la 5’azacitidina. Actualmente en humanos y animales
domésticos las regiones de fragilidad cromosómica han sido correlacionadas con
heredopatologías diversas (síndrome de retardo mental, paraqueratosis hereditaria,
síndrome de calvicie en terneros, alteraciones de la fertilidad).
• Heteromorfismos cromosómicos:
Una variante morfológica normal o una variante en tinción de un cromosoma. Par de
cromosomas homólogos que muestran alguna diferencia en forma o tamaño.
• Heterocromatina constitutiva :
Muy condensada dentro de las células del cuerpo. A esta cromatina pertenece la
mayoría de los brazos de los cromosomas acrocentricos y los sectores que poseen ADN
satélite.
• Fragmento minuto acéntrico:
Fragmento que resulta de dos roturas en un mismo cromosoma, en el que los
fragmentos terminales se unen y excluyen al segmento separador (deleción intersticial). El
fragmento que se elimina carece de centrómero, por lo que se denomina acéntrico
• Polimorfismo de los satélites:
Son estructuras que tienen una propiedad especial, este polimorfismo de satélites se
encuentra en los cromosomas acrocéntricos: 13, 14, 15, 21 y 22 se tiñen mediante bandeo
NOR y Q.
• Polimorfismo del cromosoma Y:
Es la porción no recombinable del cromosoma humano Y. El mantenimiento de
extendidas características de haplotipos de particulares regiones. Estos revelan trazos de
migraciones de colonización de los humanos anatómicamente modernos en el continente
euroasiático.
• Gaps

2. La replicación del ADN ocurre durante la interfase. La síntesis tiene lugar durante una
parte limitada, denominada periodo S o sintetico, que a su vez es precedido por dos
espacios (GAPS) o periodos de la interfase (G1 y G2) en los que no hay síntesis de ADN.
• Endoreduplicación
Existe una variante de la mitosis que no incluye la división celular. El proceso, que se
denomina endomitosis o endoreduplicación, produce células con copias del mismo
cromosoma en el mismo núcleo. Las células generadas por la endomitosis se llaman
endoploides.
2. Mencione la importancia del uso de los siguientes reactivos en los cultivos celulares
para obtener cromosomas in vitro.
• Hidróxido de Bario
En el bandeo C, con un tratamiento con ácido clorhídrico (HCl), Hidróxido de Bario
(Ba(OH)2) y desnaturalización al calor se sueltan todas las proteínas asociadas al ADN
excepto las más empaquetadas. Este bandeo es muy útil cuando se sospechan daños en las
zonas centroméricas como inversiones pericéntricas y para la búsqueda de polimorfismos
de heterocromatina de los cromosomas autosómicos 1, 9,16 y la parte distal del brazo largo
del cromosoma Y.
• Bromodeoxiuridina (BrdU)
Ayuda a evidenciar las zonas de replicación tardía como zonas claras. Para tal fin se
utilizan reactivos afines a la Timina como la Bromodesoxiuridina; la cual es un reactivo
análogo de la timina que desplaza dicha base en la síntesis del ADN
• Mostaza de quinacrina
En el bandeo Q se usa mostaza de quinacrina (un tinte de acridina que se une al
ADN por intercalación o por unión iónica externa) y estimulando los cromosomas con una
luz ultravioleta, se ponen de manifiesto bandas fluorescentes de idéntico patrón al de las
bandas G excepto en las zonas heterocromáticas de los cromosomas 1, 9 y 16,en los
satélites de los acrocéntricos y en la porción distal del cromosoma Y, que dan una tinción
variable.
• Metrotexato

3. La exposición a metrotexato da lugar a una acumulación de células que tienen copias
adicionales del gen DHER. Las copias pueden ser transportadas como ristras
extracromosomicas, en forma de cromosomas diminutos dobles, o pueden integrarse en el
genoma en el sitio de uno de los alelos DHFR.
• Diepoxibutano (DEB)
Ayuda a ver las rupturas cromosómicas en cultivo de linfocitos.
3. Explique cual es el fundamento y para que se usan las técnicas y marcadores
moleculares.
• PCR:
Reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en inglés
(PolymeraseChainReaction), es una técnica de biología molecular desarrollada en 1986 por
KaryMullis, cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN
particular, partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una única copia de ese
fragmento original, o molde.
Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que, tras la
amplificación, resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad virus o
bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer
investigación científica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la
amplificación han hecho que se convierta en una técnica muy extendida, con el
consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.
• RFLP:
En biología molecular, el término polimorfismo de longitud de los fragmentos de
restricción o RFLP, (comúnmente pronunciado "RIF-labios") se refiere a una diferencia
entre dos o más muestras de homólogos moléculas de ADN derivados de las diferentes
ubicaciones de sitios de restricción, y una técnica de laboratorio relacionados por el cual
estos segmentos pueden ser distinguidos. In RFLP analysis the DNA sample is broken into
pieces (digested) by restriction enzymes and the resulting restriction fragments are
separated according to their lengths by gel electrophoresis .En el análisis de RFLP de la
muestra de ADN se rompe en pedazos (digerida) por las enzimas de restricción y los
fragmentos de restricción resultantes son separados en función de su longitud por
electroforesis en gel. Although now largely obsolete, RFLP analysis was the first DNA
profiling technique inexpensive enough to see widespread application. Aunque ahora en

4. gran medida obsoleta, el análisis de RFLP es el ADN primera perfiles técnica de bajo costo
lo suficiente para ver una amplia aplicación. In addition to genetic fingerprinting, RFLP
was an important tool in genome mapping , localization of genes for genetic disorders ,
determination of risk for disease, and paternity testing . Además de la caracterización
genética, RFLP es una herramienta importante en la cartografía del genoma, la localización
de los genes de trastornos genéticos, la determinación del riesgo para la enfermedad, y la
prueba de paternidad.
• SSR
SSR (Short SequenceRepeat) o STR (Short TandemRepeat) por sus siglas en inglés,
denominados microsatélites en castellano, son secuencias de ADN en las que un fragmento
(cuyo tamaño va desde uno hasta seis nucleótidos) se repite de manera consecutiva. La
variación en el número de repeticiones crea diferentes alelos los cuales se distinguen entre
sí por la longitud total del fragmento.
Generalmente se encuentran en zonas no codificantes del DNA. Son neutros, co-dominantes
y poseen una alta tasa de mutación, lo que los hace muy polimórficos. A pesar
de esto, la variabilidad que presentan útil para su uso como marcadores moleculares, es
respecto al número de repeticiones, no de la secuencia repetida. Son utilizados como
marcadores moleculares en una gran variedad de aplicaciones en el campo de la genética
como parentescos y estudios de poblaciones.
• ALFP:
Técnica de AFLP, siglas en ingles de AmplifiedFragmentLengthPolymorphism,
consiste en la combinación de los métodos de PCR y análisis de fragmentos de restricción,
con el fin de detectar polimorfismos debidos a modificaciones en la secuencia de ADN que
comprende los sitios de corte de las enzimas de restricción. Este cambio se percibe como
un patrón diferente, en número y tamaño, de bandas generadas.
• SOUTHERN BLOT
Southernblot, hibridación Southern o, simplemente, Southern, es un método de biología
molecular que permite detectar la presencia de una secuencia de ADN en una mezcla
compleja de este ácido nucleico. Para ello, emplea la técnica de electroforesis en gel de
agarosa con el fin de separar en base a la longitud de los fragmentos de ADN y, después,

5. una transferencia a una membrana en la cual se efectúa la hibridación de la sonda. []Su
nombre procede del apellido de su inventor, un biólogo inglés llamado Edwin Southern.
• FISH
La Hibridización in situ con Fluorescencia ( FISH ) es una nueva tecnología de
Citogenética Molecular que utiliza fragmentos de ADN (llamados sondas) para detectar o
confirmar anomalías génicas o cromosómicas que generalmente están más allá del poder de
resolución de la Citogenética Clásica de rutina, brindando resultados de 3 a 5 días.
• MICROARRAYS
Un chip de ADN (del inglés DNA microarrays) es una superficie sólida a la cual se
unen una serie de fragmentos de ADN. Las superficies empleadas para fijar el ADN son
muy variables y pueden ser vidrio, plástico e incluso chips de silicio. Los arreglos de ADN
son utilizadas para averiguar la expresión de genes, monitorizándose los niveles de miles de
ellos de forma simultanea.
La tecnología del chip de ADN es un desarrollo de una técnica muy usada en biología
molecular, el Southernblot. Con esta tecnología podemos observar de forma casi
instantánea la presencia de todos los genes del genoma de un organismo. De tal forma que
suelen ser utilizados para identificar genes que producen ciertas enfermedades mediante la
comparación de los niveles de expresión entre células sanas y células que están
desarrollando ciertos tipos de enfermedades.