Este documento proporciona una introducción general a los anticuerpos monoclonales (mAb). Explica que los mAb son anticuerpos específicos para un solo epítopo producidos mediante la fusión de linfocitos B con células mielomatosas. Detalla el proceso de producción de hibridomas y la importancia clínica de los mAb en aplicaciones como el diagnóstico, la terapéutica y la investigación médica.

2. ANTICUERPOS
MONOCLONALES
(mAb)
Por: Sofía Jaramillo Q.

3. OBJETIVOS
GENERALES:
ESPECÍFICOS:
•
•
Aprender generalidades sobre los Ac.
Monoclonales.
•
Extrapolar
los
conocimientos
adquiridos.
Reconocer la importancia del
desarrollo científico en el diagnóstico,
la terapéutica y la investigación
médica.

4. CONOCIMIENTOS PREVIOS
• Ac: concepto, estructura, origen, tipos.
• Acciones desencadenadas por el dominio Fc
de los Ac.
• Naturaleza monoclonal y policlonal.
• Mieloma.
• Híbrido.
• Generalidades sobre la técnica de la clonación.

12. COMPARACIÓN ANTISUERO
vs. AC. MONOCLONAL

15. GENERALIDADES

16. CONCEPTO
• Un Ac. Monoclonal es
un Ac. específico para
un solo determinante o
epítopo.

17. HISTORIA
1994
1975
1963
1960
1959
• Burnet
• Teoría de la Selección
Clonal 
Monoclonalidad (Ag.
conocido)
• Mieloma (Ag.
desconocido)
• Potter
• Inducción de mielomas en
ratones por un aceite
mineral
• Transplante in vivo y
crecimiento in vitro
(clonación y mutación)
• Littlefield
• Aislamiento por medio de
cultivos selectivos líneas
celulares fusógenas
mutantes
• George Köhler y César
Milstein
• Proceso de
inmortalización de los
LB:
Hibridoma=LB+Células
Mielomatosas
• Primer Ac. monoclonal
autorizado para uso
clínico.

18. PRODUCCIÓN

19. PRODUCCIÓN DE HIBRIDOMAS
SECRETORES DE AC. MURINOS
INMUNIZACIÓN
•Propiedades
del Ag.:
•Naturaleza
química
•Tño.
mol.
relativo
•Aplicación de
Coadyuvantes
•Expectativas
para el Ac.
•Ratones
BALB/c, ratas,
hámsters
FUSIÓN/TCAS.
DE ING.
GENÉTICA
•3-4
días
después de la
última
inmunización
•LB
(linfoblastos)
•Células
mielomatosas
•Agente
fusógeno:
•Virus Sendai
•isolecitina
•Polietilénglic
ol
(PEG)*:
origen,
pureza,
condiciones
del
medio:
pH,
temperatura,
buffer
SELECCIÓN EN
MEDIO HAT
•Eficiencia de
clonación
•Enriquecimien
to del medio
mediante
glucosa y una
suspensión de
células
del
bazo de un
animal
histocompatibl
e no inmune
•Crecimiento
SOLO de los
híbridos (1014
días
después de la
fusión):
•ELISA
•Aglutinación
•IFI
•FACS
CARACTERIZA
CIÓN DEL AC
SUBCLONACIÓN
•Dilución límite
•Híbrido
secretor de >
proliferación
que el híbrido
no secretor
CONGELACIÓN
•Medio
Citoprotector
•N2 líquido
•Células
parentales
•Reclones
CULTIVO
MASIVO
•in vitro:
•Cultivo
estacionario
en
botella
“roller”
•Encapsulació
n en alginato
de Na+
•Perfusión de
fibras huecas
•Biorreactores
•de burbujeo
•de agitación
constante
•in vivo:
•Tumores
secretores de
líquido
ascítico
(Plasmocitom
as):
•Irradiación
•Tto.
con
aceite
mineral

21. PRODUCCIÓN DEL HIBRIDOMA
Inducción
de
mielomas
en el ratón
HIBRIDOMAS
(BIOLOGÍA+GENÉTICA)
Uso de
cultivos in
vitro
selectivos
Fusión de
células
somáticas

24. CARACTERÍSTICAS DEL
HIBRIDOMA
Expresión de Ac. codominante.
Ac. que ya se producen.
Línea secretora + Línea no secretora*=
Producción mutua.
Células de mieloma produce Ac. por
fusión con LB.

25. TIPOS DE HIBRIDOMAS
Heterohibridomas
Hibridomas
Humanos

27. MEDIO HAT

33. DESAFÍOS EN LA
PRODUCCIÓN
• Medios de cultivo no aptos para Células
Plasmáticas.
• Cantidades limitadas de Ac.

34. NOMENCLATURA POR SU
TIPO

35. NOMENCLATURA POR SU
FUNCIÓN

36. TIPOS
MURINO
• Hibridoma de ratón
• Limitaciones:
• Difícil interacción
entre el fragmento
Fc murino y el
receptor
celular
humano
• Corta vida media
• Producción
de
HAMA
QUIMÉRICO
HUMANIZADO
HUMANO
• Región
variable
murina
• Región
constante
humana
• Limitaciones:
• Producción
de
HACA
• Transferencia de las
regiones
determinantes de la
complementariedad
de los Ac. del ratón
a una Ig humana
• Limitaciones:
• Producción
de
HAMA
• Cultivos
bacterianos
(tecnología de ADN
recombinante)
• Ratones
transgénicos

44. CLASIFICACIÓN DE
ACUERDO A LA ACCIÓN
BLOQUEADORES
DEL TNF
Anakinra
ANTIINTERLEUKINAS
ANTI-CD
ANTI-INTEGRINAS
ANTI RECEPTORES
DE MEMBRANA

45. DESAFÍOS DE LOS HIBRIDOMAS
HUMANOS
• Fuente de LB.
• Ausencia de líneas mielomatosas de humanos
con crecimiento estable Ac. Quiméricos.

47. IMPORTANCIA

48. IMPORTANCIA
•
•
•
•
Ac.
Producidos in vitro.
Especificidad definida (nivel epítopo).
Cantidades ilimitadas no variantes en el
tiempo.

49. APLICACIONES

50. UTILIDAD
ASPECTOS
RAMAS
• Biología
– Biotecnología:
• Análisis en Investigación
Básica
• Análisis en Investigación
Aplicada.
• Medicina
– Inmunología
• Inmunoontogenia:
– CD3, CD4, CD8
– MHCI, MHCII
• Inmunodiagnóstico
• Inmunoterapia
– Patología

51. APLICACIONES
• Purificación y caracterización de receptores de hormonas y
factores de crecimiento, con sus respectivos ligandos.
• Estudio de vías metabólicas (ez.).
• Estructura y función de numerosas proteínas (grupos
sanguíneos, MHC).
• Conocimiento y organización del citoesqueleto y de la
matriz extracelular..
• Desarrollo embrionario.
• Monitoreo de drogas terapéuticas.
• Determinación de Ag. relacionados con enfermedades
infecciosas.
• Identificación de marcadores tumorales.

52. APLICACIONES
• Construcción de biosensores, útiles en las industrias:
– Farmacéutica
– Alimenticia
– Petroquímica
• Posibilidad de utilizarlos como enzimas (Ac. catalíticos o Abzimas)
• Generación de:
– Ac. monoclonales inmunosupresivos (tto. enf. autoinmunes, prevención
y tto. del rechazo en transplantes)
– Sondas de localización de tumores y mts.
– Inmunotoxinas.
– Ac. monoclonales para el tto. de:
• Inf. bacterianas
• CA

53. INDICACIONES APROBADAS
Enf.
Autoinmunes:
Enf. Alérgicas:
Oncología:
Tumores
Sólidos:
Linfoma
Folicular
Asma
Psoriasis
Enf. de Behcet
Enf.
Hematológicas:
Enf.
Inflamatoria
Intestinal
(Colitis
Ulcerosa y
Enf. de Crohn)
Artritis
reumatoide
Espondilitis
anquilosante
Enf.
Inflamatorias
Crónicas:
•CA de mama mts.
•CA de colon
quimiorrefractario
•Ca de colon mts

59. PERSPECTIVAS DE FUTURO

66. ANEXOS

72. CONSULTAR
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•
•
•
•
•
•
•
¿Cómo se demuestra que los Ac, producidos en contra de un determinante Ag. único son
heterogéneos?
¿Cuál es el mecanismo de fusión de los virus Sendai?
Investigue el nombre de proteínas transportadoras o „carriers‟ de inmunogenicidad probada.
¿Cuáles son las líneas de fusión más utilizadas para la fusión de hibridomas de ratón?
¿Por qué se deben emplear linfoblastos para conseguir la fusión?
¿Por qué el proceso de fusión es de bajo rendimiento y requiere de una posterior clonación?
¿En qué órgano linfoideo se procede a la fusión y por qué?
Haga un cuadro de doble entrada comparando las características de avidez y afinidad de los Ac
(Recuerden que de ello depende la selección del método de revelado, si poseen mayor afinidad por
su Ag., se emplea el EIA o RIA; mientras que si son más ávidos, se prefiere la Aglutinación)
¿Qué es la HAMA (Respuesta de Ac. Humanos Antimúridos), qué patología se puede producir, qué
es HACA?
Realice un cuadro de entrada múltiple en el que se detallen las ventajas y desventajas de los Ac.
Monoclonales y Ac. Policlonales.
¿El antisuero está formado por Ac. Monoclonales o por Ac. Policlonales? Justifique su respuesta.

73. BIBLIOGRAFÍA
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