Cultivos microbianos

1. NUTRICIÓN Y CULTIVO DE
MICROORGANIMOS

2. USO DE NUTRIENTES
 GENERACIÓN DE MATERIAL CELULAR
 MANUTENCIÓN DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICAY DE
TRANSPORTE
 PRODUCCIÓN DE ENERGÍA

3. COMPOSICIÓN QUÍMICA DE
MICROORGANISMOS
 AGUA: 80 – 90% (FORMASVEGETATIVAS)
 MATERIA SECA: MACROMOLÉCULAS (PROTEÍNAS,
ÁCIDOS NUCLEICOS, LÍPIDOS, POLISACÁRIDOS)
PRECURSORES DE MACROMOLÉCULAS

4. ELEMENTOS PRINCIPALES
 MACROELEMENTOS: C, O, H, N, P, S, Ca, K, Fe, Mg
 OLIGOELEMENTOS: Zn, Mn, Co, Cu, Ni, Mo, Se

5. FUENTES DE ELEMENTOS
 C: CO2, COMPUESTOS ORGÁNICOS
 H:AGUA, COMPUESTOS ORGÁNICOS
 O:AGUA, OXÍGENO GASEOSO
 N: NH3, NO3
 P: COMPUESTOS ORGÁNICOS (AA)
 S: SH2, COMPUESTOS ORGÁNICOS
 K, Mg, Ca, Na, Fe: IONES

6.  AUTOTROFOS: USAN CO2 COMO ÚNICA O PRINCIPAL
FUENTE DE C
 HETEROTOFOS: USAN SUSTANCIAS ORGÁNICAS
PREFORMADAS REDUCIDAS
UTILIZACIÓN DE CARBONO

7. FACTORES DE CRECIMIENTO
 COMPUESTOS ORGÁNICOS NECESARIOS COMO
PRECURSORES QUE NO PUEDEN SER SINTETIZADOS
 AMINOÁCIDOS, PURINASY PIRIMI-DINAS,
VITAMINAS (COFACTORES)
 SUMINISTRADOS EN MEZCLAS COMPLEJAS

8. CULTIVO DE ORGANISMOS
 PROVEER UN MEDIO ADECUADO PARA EL
CRECIMIENTO
 OBTENER UN CULTIVO PURO

9. MEDIOS DE CULTIVO
 MEDIOS SINTÉTICOS O DEFINIDOS: SE CONOCE LA
COMPOSICIÓN QUÍMICAY CANTIDADES DE
COMPONENTES
 MEDIOS COMPLEJOS: CONTIENEN ALGUNOS
COMPONENTES DE COMPOSICIÓN QUÍMICA NO
TOTAL-MENTE DEFINIDA

10. MEDIOS DE CULTIVO

11. MEDIOS COMPLEJOS
 SIMPLES: BAJOS REQUERIMIENTOS
 ENRIQUECIDOS: ADICIÓN DE SANGRE, SUERO, etc.
 SELECTIVOS: FAVORECEN EL CRECIMIENTO DE
ALGUNOSTIPOS DE ORGANISMOS
 DIFERENCIALES: DESTACAN CARACTE-RÍSTICAS
PROPIAS DE UN ORGANISMO

12. CULTIVOS PUROS
 OBTENCIÓN DE COLONIAS AISLADAS
 PLACAS DE PETRI
 MEDIOS SÓLIDOS: AGAR AL 1,5%
 UN ORGANISMO DA ORIGEN A UNA COLONIA

13. SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
 EN PLACA POR ESTRÍA
 EN PLACA EN SUPERFICIE O POR EXTENSIÓN
 EN PROFUNDIDAD O PORVERTIDO

14. PLACA DE PETRI

15. SIEMBRA POR ESTRÍA

16. EFECTO DE FACTORES AMBIENTALES
 TEMPERATURA
 ACIDEZY ALCALINIDAD (pH)
 NECESIDADES DE OXÍGENO
 PRESIÓN OSMÓTICA

17. TEMPERATURA
 INFLUENCIAVELOCIDAD DE REACCIONES
ENZIMÁTICAS
 TEMPERATURAS “CARDINALES”
 MÍNIMA, ÓPTIMA, MÁXIMA

18. CLASIFICACIÓN
 PSICRÓFILOS (0º - 15º - 20º)
 PSICRÓFILOS FACULTATIVOS: CRECEN A 0º, MÁXIMA
ENTRE 20-30ºY RESISTEN HASTA 40ºC
 RESPONSABLES DE PUTREFACCIÓN DE ALIMENTOS
REFRIGERADOS

19. CLASIFICACIÓN
 MESÓFILOS: RANGO ENTRE 15Y 45ºC (MAYORÍA DE
PATÓGENOS DE ANIMALESY HOMBRE)
 TERMÓFILOS: ÓPTIMA POR ENCIMA DE 45ºCY
MÁXIMA SUPERIOR A 65ºC

20. ESTUFA DE CULTIVO

21. ACIDEZ Y ALCALINIDAD
 MAYORÍA ENTRE pH 4 y 9 (ÓPTIMO 7)
 HONGOS: 4,5 – 6
 BACTERIAS ACIDÓFILAS (Thiobacillus) y ALCALÓFILAS
(Bacillus)
 REGULACIÓN CON BUFFERS EN MEDIOS DE CULTIVO

22. RELACIÓN CON EL O2
 AEROBIO ESTRICTO: DEPENDE POR COMPLETO DEL O2
ATMOSFÉRICO
 MICROAERÓFILO: REQUIERE MENOR CONCENTRACIÓN
DE O2 (<21%)
 ANAEROBIO ESTRICTO: NOTOLERAN PRESENCIA DE O2

23. RELACIÓN CON EL O2
 ANAEROBIOS FACULTATIVOS
 ANAEROBIOS AEROTOLERANTES
 CRECIMIENTO EN EL LABORATORIO (CULTIVOS
AIREADOS, JARRA DE ANAEROBIOS, etc.)

24. JARRA DE ANAEROBIOS

25. SOLUTOS Y PRESIÓN OSMÓTICA
 AMBIENTES DILUIDOS
 ALTA CONCENTRACIÓN DE SOLUTOS: PLASMÓLISIS
(MÉTODO DE CONSERVACIÓN DE ALIMENTOS)
 ORGANISMOS HALÓFILOS

26. CRECIMIENTO MICROBIANO
 CRECIMIENTO EQUILIBRADO: AUMENTO DEL NÚMERO
DE INDIVIDUOS DE UNA POBLACIÓN CONCURRENTE
CON EL AUMENTO DE SUS CONSTITUYENTES QUÍMICOS
 DUPLICACIÓN DEL NÚMERO DE CÉLULASY DE LA
BIOMASA

27. CRECIMIENTO MICROBIANO
 DIVISIÓN: FISIÓN BINARIA O BIPARTI-CIÓN
(BACTERIAS)Y GEMACIÓN (LEVADURAS)
 TIEMPO DE GENERACIÓN: DUPLICACIÓN DE LA
POBLACIÓN MICROBIANA

28. CURVA DE CRECIMIENTO
TIEMPO
Log CÉL.
VIABLES
LATENCIA
EXPONENCIAL
ESTACIONARIA
MUERTE

29. FASE DE LATENCIA
 LATENCIA: ADAPTACIÓN AL MEDIO, ORGANISMOS
METABÓLICAMENTE ACTIVOS
 DEPENDE DE EDAD DEL INÓCULOY DIFERENCIA ENTRE
EL MEDIO DE CULTIVO DE PROCEDENCIAY EL NUEVO

30. FASE EXPONENCIAL
 CRECIMIENTO EQUILIBRADO AVELOCIDAD
CONSTANTE
 DEPENDE DE CONDICIONES AMBIENTALESY
CARACTERÍSTICAS INTRÍNSECAS

31. FASE ESTACIONARIA
 AGOTAMIENTO DE NUTRIENTES ESCENCIALES
 ACUMULACIÓN DE PRODUCTOS DE DESECHO
METABÓLICO
 NO SE APRECIA INCREMENTO NETO DE LA POBLACIÓN

32. FASE DE MUERTE
 FALTA DE ENERGÍA PARA MANTENIMIENTO CELULAR
 DISMINUCIÓN DEL NÚMERO DE CÉLULAS DEL CULTIVO
 VELOCIDAD EXPONENCIAL
 GENERALMENTE LISIS CELULAR

33. CULTIVO CONTÍNUO
 POBLACIÓN MICROBIANA CRECIENDO EN UN
RECIPIENTE DEVOLUMEN CONSTANTE AL QUE SE
AÑADE MEDIO FRESCOY SE QUITA MEDIO USADO
 QUIMIOSTATOYTURBIDOSTATO

34. MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO
 RECUENTO DE CÉLULASTOTALES: CÁMARAS DE
RECUENTO, RECUENTO ELECTRÓNICO
 RECUENTO DE CÉLULASVIABLES: EN MEDIO SÓLIDO
(PROFUNDIDAD O SUPERFICIE)

35. MEDICIÓN DE MASA CELULAR
 DETERMINACIÓN DEL PESO SECO O HÚMEDO DE
LA CÉLULAS ENVOLUMEN FIJO DEL CULTIVO
 CENTRIFUGACIÓN O FILTRACIÓN POR
MEMBRANA

36. MEDICIÓN INDIRECTA
 TURBIDEZ: MEDICIÓN DE ABSORBANCIA O DENSIDAD
ÓPTICA (DO)
 DO: PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIÓN DE
PARTÍCULAS
 OTRAS: PRODUCCIÓN DE ÁCIDO O GAS EN
ORGANISMOS FERMENTADORES

37. Tipos de medios de cultivo
Medios sólidos y líquidos
Los medios sólidos se preparan como los medios líquidos y se les añade agar (1.5%) como agente gelificante.
El agar es un polímero sulfatado compuesto por D-galactosa, 3,6-anhidro-L-galactosa y ácido glucurónico.
El agar se funde a 80-90ºC y se puede enfriar hasta una temperatura de 40 a 42 ºC sin endurecerse.
La mayoría de los microorganismos no pueden degradarlo.
El agar se funde durante el proceso de esterilización, el medio fundido se vierte sobre placas Petri y se deja solidificar
antes de su uso.
Los medios sólidos inmovilizan a las células, permitiéndolas crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias.
Medios generales
Los medios generales mantienen el crecimiento de muchos microorganismos. Ej., el caldo y agar nutritivo
Medios enriquecidos
Medios generales a los que se añaden nutrientes especiales para mantener el crecimiento de microorganismos
heterótrofos exigentes. Ej., el agar sangre
Medios selectivos
Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares. Ej.,agar Levine (eosina-azul de metileno) y Agar
MacConkey se emplean para detectar enterobacterias. Contienen colorantes y sales biliares que inhiben el
crecimiento de las bacterias Gram positivas.
Otros medios selectivos contienen nutrientes que pueden utilizar algunas bacterias de forma específica. Ej., el agar
celulosa se usa para aislar bacterias que digieren la celulosa.
Medios diferenciales
Medios que diferencian entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten una identificación tentativa de los
microorganismos según sus características biológicas.
El agar MacConkey es tanto selectivo como diferencial. Como contiene lactosa y colorante rojo neutro, las colonias
fermentadoras de lactosa (Escherichia coli) aparecen de color rosa o rojo y se distinguen fácilmente de las colonias no
fermentadoras.

38. CULTIVOY CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS
3.Aislamiento de cultivos puros de microorganismos
3.1Transferencia aséptica
3.2 Siembra en placa por extensión; en estrías; y en profundidad
3.3 Morfología y crecimiento de las colonias

39. Transferencia aséptica
a.Se calienta el asa de siembra hasta incandescencia y se deja enfriar
b. El tubo se destapa
c. Se pasa el extremo del tubo por la llama
d. Se extrae la muestra con el asa esterilizada
e. Se vuelve a flamear la boca del tubo y la muestra se deposita en un medio estéril
f. Se vuelve a tapar el tubo y se calienta el asa de nuevo al final
Consiste en una serie de procedimientos que evitan la contaminación durante la
manipulación de los cultivos y de los medios de cultivo estériles.
Es uno de los primeros métodos que tiene que dominar un microbiólogo.

40. 1. Dilución y siembra por
extensión en superficie
Obtención de cultivos puros
3. Dilución y siembra
en profundidad
Crecimiento de colonias confluentes
al comienzo de la siembra por estría
2. Siembra en estrías
Se realiza una siembra
por estría en una placa de
agar con medio estéril.
Después de una estría inicail
Se hacen estrías en ángulo
Colonias aisladas
al final
de la siembra por
estría
Se esteriliza el asa y
luego se toma una
muestra del tubo

41. Morfología y crecimiento de las colonias
Las colonias son masas visibles de células que se forman por división de una o varias células.
El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite al microbiólogo identificar las bacterias porque las
especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto característico.
El tamaño, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo.
La morfología de la colonia de una bacteria puede variar según el medio en que crezca la bacteria.

42. Colonias de bacterias
Serratia marcescens
Cultivada en Agar
MaConkey
Pseudomonas aeruginosa
Cultivada en
Agar Tripticasa-soja
Shigella flexneri
Cultivada en
Agar MacConkey
Colonias de Bacillus subtilis que han crecido en
medios con pocos nutrientes

43. REPASO