Este documento describe varios métodos diagnósticos para la tripanosomiasis, incluyendo técnicas parasitológicas directas como gota fresca y concentración, así como técnicas inmunológicas como ELISA e inmunofluorescencia indirecta. Explica detalles sobre la muestra, preparación y lectura de cada prueba, así como su sensibilidad relativa para la detección del parásito.

1. MÉTODOS DIAGNÓSTICOS
TRYPANOSOMIASIS
Blgo. Carlos A. Fernández Miñope
Segunda Especialidad en Microbiología Clínica
Hospital Regional Lambayeque
Universidad Nacional Pedro Ruíz Gallo

3. CICLO BIOLÓGICO

4. FORMAS DE TRANSMISIÓN

5. TRIATOMINOS VECTORES

6. TÉCNICAS PARASITOLÓGICAS PARA LA
DEMOSTRACIÓN DIRECTA DE LA
PRESENCIA DEL PARÁSITO
 Gota fresca
 Gota gruesa-frotis
 Microconcentración
 Concentración de Strout
 Hemocultivo
 Xenodiagnóstico
 PCR
 Biopsia

7. TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS PARA LA
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS
CONTRA TRYPANOSOMA CRUZI
 Hemaglutinación indirecta (HAI).
 Inmunofluorescencia indirecta (IFI).
 Técnicas inmunoenzimáticas: ELISA.

8. MUESTRAS DE ACUERDO AL TIPO DE
EXAMEN

9. EXAMEN DE SANGRE EN FRESCO
 Consiste en examinar directamente una gota de
sangre, entre lámina y laminilla, con el microscopio.
 El rendimiento del examen es bueno, y la prueba
es útil cuando la parasitemia es elevada (Formas
agudas).

10. GOTA GRUESA - FROTIS
 La gota gruesa consiste en concentrar y defibrinar
la gota de sangre de la muestra, la que
posteriormente será deshemoglobinizada y teñida
con Giemsa durante 30 minutos.
 El frotis es el extendido de una gota de sangre en
una lámina portaobjetos seguida de la fijación de la
muestra y posterior tinción con Giemsa

12. MICROCONCENTRACIÓN
 La técnica consiste en concentrar los parásitos de
una muestra de sangre colectada en tubos
capilares heparinizados por centrifugación
Es posible, además, realizar
una lectura en fresco entre
lámina y laminilla.

13. CONCENTRACIÓN DE STROUT
 Esta técnica se basa en la concentración de los parásitos en
la muestra sanguínea por centrifugación y examen del
sedimento al microscopio en busca de trypomastigotes
móviles.
1. Extraer 5-10 mL de sangre venosa en un tubo sin
anticoagulante
2. Dejar a temperatura ambiente hasta que se coagule y separar
el suero.
3. Centrifugar este suero a 160g (800 rpm) durante dos minutos
para descartar los glóbulos rojos.
4. Centrifugar nuevamente el sobrenadante a 300-600 g (2000-
2500 rpm), durante diez minutos.
5. Separar el sobrenadante (suero) y conservarlo a 4 ºC para el
análisis serológico. portaobjetos.
6. Colocar una alícuota del sedimento obtenido en una lámina
7. portaobjetos.
8. Cubrir la muestra con una laminilla y proceder a la lectura.

14. CONCENTRACIÓN DE STROUT

15. HEMOCULTIVO
 Consiste en sembrar una muestra de sangre en
medio de cultivo artificial o celular, con la finalidad
de amplificar el número de parásitos presentes y
confirmar el diagnóstico.
 La limitación: Tiempo de incubación (2 meses).

16. EPIMASTIGOTES DE TRYPANOSOMA

17. XENODIAGNÓSTICO
 Es una técnica que permite la multiplicación del
parásito in vivo y consiste en hacer picar a la
persona sospechosa de infección por el vector libre
de infección.
 Útil en formas agudas, crónicas y de portador.

18. XENODIAGNÓSTICO
• Utiliza ninfas de triatominos del III
y IV estadio, en ayuno por lo
menos 15 días..
• Se les deja alimentarse del
sospechoso por 20 minutos o
hasta observar que las ninfas
hayan aumentado su volumen.
• A los 30 días, se examina en el
microscopio una muestra de heces
de los triatominos.
• De ser negativo, examinar otra
alícuota del contenido digestivo del
triatomino a los 60 días

19. HEMAGLUTINACIÓN INDIRECTA
 La hemaglutinación
indirecta emplea
glóbulos rojos de
carnero, previamente
tratados con ácido
tánico, como soporte
de extractos solubles
del parásito
(antígeno).
 Es una prueba
altamente sensible y
específica

20. TAMIZAJE EN DILUCIÓN DIAGNÓSTICA 1/4

21. ELISA
 La técnica ELISA
emplea antígenos
solubles de
Tripanosoma cruzi,
adheridos a soportes
inertes (placa de
microtitulación) y
antiglobulinas
humanas conjugadas
con enzimas, como
detectores de la
reacción antígeno-
anticuerpo.
Reactivo: OD 0,384.
No reactivo: OD 0,256.

22. INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
(IFI)
 La técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI),
emplea como antígeno epimastigotes de
Trypanosoma, obtenidos de cultivo y fijados en
láminas sobre las que se realiza la reacción
antígeno-anticuerpo.
 La formación de este complejo es evidenciada por
una antiglobulina humana marcada con
fluoresceína.
 Los kits comerciales proporcionan la lámina
preparada y los reactivos.
 Prueba altamente sensible y específica.

23. INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

24. INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
(VD 1/32)

25. SENSIBILIDAD DE LOS MÉTODOS PARA
DETECCIÓN DIRECTA DEL PARÁSITO
Technique Sensitivity
Fresh blood preparation (10 µl) 6000 trypanosomes/ml
Thick drop (10 µl) 2000 trypanosomes/ml
Buffy coat (70 µl) 600 trypanosomes/ml
PCR (Polymerase Chain Reaction)
10 trypanosomes/ml (depends
upon gene target and specific
technique)
KIVI 1 trypanosome per 5 ml.

26. MÉTODOS DX DE ACUERDO A LA
FORMA CLÍNICA

27. ALGORITMO PARA
EL DIAGNÓSTICO DE
LABORATORIO