jhkh

1. BIOQUÍMICA CLÍNICA
LABORATORIO CLÍNICO ESEBIOL UNT
MS. C QF-CD CHRISTIAN LOÚ GARCÍA

2. Primera Unidad
Introducción a la Bioquímica Clínica
Principios de Medición
Estrategias de Analisis para seleccionar un Analito
específico
PRIMER EXAMEN

3. Describir las clases de analitos que se miden
mediante las pruebas de bioquímica clínica
Identificar diferentes tipos de muestras biológicas
que se pueden utilizar para las pruebas
Describir cómo se interpretan los
resultados de las pruebas
OBJETIVOS

4. CONCEPTOSCLAVES
 Pruebas Bioquímicas clínicas
 Pruebas de líquidos corporales
 Intervalo de referencia

5. ANALITO

6. ANALITOS MÁS FRECUENTES
La BQCL es la rama de análisis clínicos que se centra principalmente en
las moléculas.
Los análisis en un laboratorio de bioquímica clínica miden:
sales y minerales
Concentraciones de Iones
principalmente proteínas
Moléculas orgánicas pequeñas y
macromoléculas

8. COMBINACIONES DE PRUEBAS
(PERFILES) Cuando una única prueba individual no es suficiente para
evaluar una enfermedad se puede utilizar una combinación
de varias pruebas.
La combinación ofrece una mejor visión sobre el estado del
paciente que el resultado de cualquier prueba individual.
Estas pruebas, realizadas con la misma muestra, se suelen
solicitar en grupo en lo que se denomina perfil o panel.
Las pruebas individuales pueden diferir entre centros, así
tengan los tipos de perfiles el mismo nombre.

9. PERFILES
TÍPICOS DE
PRUEBAS

10. Flebotomía
(Venopunción)
MUESTRAS BIOLÓGICAS

11. SALIVA
LCR
ORINA
LPC
SANGRE
MUESTRAS BIOLÓGICAS
LAm
LPL
LP
LS

12. MUESTRAS BIOLÓGICAS
¿ Analito…
Matriz …
Validar Método…?

13. S
A
N
G
R
E
La mayoría de los analitos se
encuentran en el plasma.
componentes principales:
parte líquida y
parte celular
Muestra utilizada con mayor
frecuencia

14. Preparación de Suero y Plasma

15. MUESTRA DE SANGRE

16. Preparación de Suero y Plasma

17. TIPOS DE TUBOS PARA
EXTRACCIÓN DE SANGRE

18. TUBOS SEPARADORES DE SUERO (SST – PST)

20. ORINA
La orina es adecuada para evaluar la
función renal
Es fácil de recoger
Es útil para evaluar cómo se excreta un
analito
Las muestras de orina pueden estar
concentradas o diluidas

21. ORINA

22. 3
ORINA

23. OTROS LÍQUIDOS
Saliva
Líquido
amniótico
Líquido
cefalorraquídeo
Líquidos: pleural,
peritoneal,
pericárdico

24. INTERVALOS DE REFERENCIA

25. Cuando te dice el médico sosteniendo el
informe de sus resultados…
¿“Normal” ?
“Su resultado no es normal”…
INTERVALOS DE REFERENCIA

26. Un resultado normal para un laboratorio
puede ser anómalo para otro
Un resultado normal no excluye la presencia de
una enfermedad
Un resultado anómalo no siempre indica
enfermedad
INTERVALOS DE REFERENCIA

27. EJEMPLOS DE INTERVALOS DE REFERENCIA
CONSENSO/NIVELES DE DECISIÓN MÉDICA PARA PRUEBAS DE
BIOQUÍMICA CLÍNICA
GLUCOSA ayunas Colesterol Trigliceridos Hemoglobina A1C
INTERVALO DE
REFRENCIA
No diabéticos: <100 mg/dl (<5,5
mmol/L)
Prediabetes: 100-125 mg/dl (5,5-
6,9 mmol/L)
Diabetes: ≥126 mg/dl (>7,0
mmol/L)
Deseable: < 200 mg/dl (< 5,2
mmol/L)
Riesgo moderado: 200–239 mg/dl
(5,2 - 6,2 mmol/L)
Alto Riesgo: > 240 mg/dl ( > 6,2
mmol/L)
< 150 mg/dl (< 1,7 mmol/L)
no diabéticos: 4-6% (20-42
mmol/mol)
<7% del objetivo para
diabéticos
(53 mmol/mol)
GRUPO DE
CONSENSO
American Diabetes Association
(ADA)
American Heart Association (AHA)
y National Cholesterol Education
Panel (NCEP)
American Heart Association
(AHA) y National Cholesterol
Education Panel (NCEP)
American Diabetes Association
(ADA)/DCCT/NGSP)* e
International Federation of
Clinical Chemistry (IFCC)*
ANALITO
La Federación Internacional de Química Clínica y Ciencias del
Laboratorio Clínico (International Federation of Clinical Chemistry,
IFCC) recomienda el uso de intervalos de referencia en mmol de
hemoglobina A1c por mol de hemoglobina en función de su
programa de normalización.
IFCC
La American Diabetic Association basa sus intervalos de
referencia en los resultados del ensayo clínico sobre control de la
diabetes y complicaciones (Diabetes Control and Complications
Trial: DCCT) y en los valores normalizados del Programa
Nacional de Normalización de la Glucohemoglobina de EE. UU.
(National Glycohemoglobin Nacional Standardization Program,
NGSP).
ADA

28. ¿Puede existir más de un
Intervalo de referencia para
una misma prueba?

29. Edad Sexo Rango
18 - 20 años Hombres 0.9 - 1.3 mg/dL
Mujeres 0.6 - 1.1 mg/dL
60 - 90 años Hombres 0.8 - 1.3 mg/dL
Mujeres 0.6 - 1.2 mg/dL
INTERVALOS DE REFERENCIA
DE LA CREATININA

30. Welcome UNT
BIOQUÍMICA
CLÍNICA
LABORATORIO CLÍNICO ESEBIOL UNT

31. BIOQUÍMICA CLÍNICA
LABORATORIO CLÍNICO ESEBIOL UNT

32. CD – QF MSC CHRISTIAN LOÚ GARCÍA
CLASE 2
PRINCIPIOS DE LA MEDICIÓN
DESCRIPCIÓN GENERAL

33. .
PRINCIPIOS DE LA MEDICIÓN
Medición
Óptica
Absorbancia
Turbidimetría
Nefelometría
Medición
Electroquímica
Potenciométrica

34. 01
02
03
04
Describir la base de los métodos ópticos,
como absorbancia, turbidimetría y
nefelometría
Describir el principio de medición
potenciométrica
Describir la diferencia entre reacción de
punto final y reacción de velocidad
Describir la función de los calibradores
Objetivos

35. Métodos Ópticos
Métodos Potenciométricos
Los Calibradores
PALABRAS CLAVES
1
2
3

36. CUANTIFICACIÓN DE ANALITOS
Fotometría o
Espectrofotometría • Luz
Potenciometría • Voltaje
Eléctrico
Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 7ª edición, 2015

37. FOTOMETRÍA

38. FOTOMETRÍA
Técnica óptica de la absorción de radiación que relaciona la cantidad de luz
absorbida con la concentración del analito.
Absorbancia
Turbidimetría o
Nefelometría
Fluorescencia

39. Espectro Electromagnético

40. CUBETA .. ??

41. ABSORBANCIA

42. ABSORBANCIA

43. ABSORBANCIA

44. ABSORBANCIA

45. ABSORBANCIA

46. Los científicos observaron que si la luz incidente tenía
una frecuencia menor que una frecuencia mínima ν0,
entonces no se expulsaban electrones sin importar la
amplitud de la luz.
Esta frecuencia mínima también se llama frecuencia
umbral , y el valor ν0 depende del metal.
Para frecuencias mayores que ν0 los electrones serían
expulsados del metal. Además, la energía cinética de
los fotoelectrones era proporcional a la frecuencia de
la luz.
“Electromagnetic Radiation (Radiación electromagnética)” (en inglés), tomado de la ChemWiki de UC Davis
(Universidad de California en Davis), CC BY-NC-SA 3.0
ABSORBANCIA

47. ABSORBANCIA

48. LEY DE BOUGUER – LAMBERT - BEER
1,729 1,760 1,852
Ley de Beer A = elc; donde
A = Absorbancia
e = Coeficiente de extinción molar (M-1cm-1)
l = Longitud de paso de la cubeta (cm)
c = Concentración (M)
..???

49.  TURBIDIMETRÍA - NEFELOMETRÍA
“Son métodos instrumentales que se
basan en medir la luz dispersada por
las partículas presentes en la muestra
turbia”

50. TURBIDIMETRÍA Y NEFELOMETRÍA
A menudo se eligen métodos turbidimétricos y
nefelométricos para medir proteínas, como
transferrina o prealbúmina, dos importantes
proteínas de transporte en la sangre. Las
proteínas son moléculas relativamente
grandes que pueden entrecruzarse fácilmente
mediante anticuerpos selectivos para producir
partículas agregadas con el tamaño
adecuado para reflejar la luz en el rango del
ultravioleta o visible.
Algunas pruebas de detección de drogas
pueden cuantificar la concentración de droga
en la muestra del paciente midiendo los
cambios en la turbidez debida a la
competencia entre la droga de la muestra del
paciente y la unida a micropartículas con
anticuerpos añadidas a la solución.

52. TURBIDIMETRÍA NEFELOMETRÍA
Mide la reducción de la intensidad de la
luz transmitida a 180º por la formación
de inmunocomplejos.
Mide la luz difractada por los
inmunocomplejos a un ángulo
normalmente 90º .
Puede der realizada en la mayoría de
los espectrofotómetros y Turbidímetro.
Requiere un nefelómetro especialmente
dedicado.
Sensibilidad incrementada para
inmunocomplejos pequeños con el uso
de partículas de látex sensibilizadas.
Sensible para medir inmunocomplejos
pequeños.
Mayor precisión en la determinación de
inmunocomplejos grandes.
Menor precisión en la determinación de
inmunocomplejos grandes.
Automatización: adaptable a la mayoría
de los autoanalizadores.
Los autoanalizadores no poseen
módulos de nefelometría estándar.
Las velocidades de reacción más lentas
permiten efectuar el blanco de reactivo,
muestra y la reacción en la misma
cubeta.
Debido a las velocidades de reacción
más rápidas, por lo general es necesario
realizar blancos de reactivos y muestra
en forma separada.

53. ¿ CÓMO SE MIDE LA TURBIDIMETRÍA
CUÁL ES SU IMPORTANCIA CLÍNICA ?

54. NEFELOMETRÍA

55. Fotometría Fluorescente

56. POTENCIOMETRÍA
Los métodos potenciométricos son los que se
adaptan mejor a la medición de iones (electrolitos)
como Sodio, Potasio y Cloruro.
Es la medida del potencial eléctrico
directamente relacionada con la concentración
de la sustancia que se va analizar.

57. El cambio de voltaje es una función compleja de la
concentración de cada ion y se describe en una
relación logarítmica denominada ecuación de Nernst.
Análisis de
electrolitos

58. POTENCIOMETRÍA
LEY DE NERST
En que se basa la
Potenciometria..??

59. POTENCIOMETRÍA
FUNDAMENTO LEY DE NERST
“Cuando dos disoluciones de distinta
concentración están separadas por una
membrana permeable, se produce un
flujo de iones a través de la membrana
desde la zona más concentrada a la
menos concentrada..”

60. POTENCIOMETRÍA
FUNDAMENTO LEY DE NERST
“Es decir que si hay un cambio de
potencial, también habrá un cambio de
concentración en nuestra disolución ..”

61. Técnicas
Potenciométricas
Usos Generales
• Determinación cuantitativa selectiva de muchos iones
inorgánicos y orgánicos en solución.
• Determinación de constantes de estabilidad de complejos.
• Determinación de velocidades y mecanismos de reacción.
• Determinación cuantitativa de gases ácidos y básicos.
•Determinación cuantitativa de productos de reacción
enzimáticos.

62. REMEMBERS
LEY DE LAMBERT - BEER
En que se basaba
la
Espectrofotometría
..??

63. LEY DE
LAMBERT
A = a.L
A= Absorbancia
a= Coef. Absortividad
L= Espacio Recorrido
LEY DE
BEER
A = a.C
A= Absorbancia
a= Coef. Absortividad
C= Concentración

64. REACCIONES DE PUNTO FINAL Y DE VELOCIDAD
Cuando un analito se detecta mediante una reacción química,
existen dos opciones para la evaluación de su concentración.
Una es esperar hasta que se complete la reacción y la cantidad
total de analito se convierta en producto (denominada reacción
de punto final).
La otra es medir la velocidad del cambio a producto formado con
el tiempo (denominada reacción de velocidad).

65. REACCIONES DE PUNTO FINAL
Las RPF se emplean para las reacciones químicas que se completan en un tiempo
relativamente corto y son «estequiométricas», lo que significa que producen una molécula
producto o un complejo para cada molécula de analito.
Por ejemplo, la reacción de la albúmina con el colorante púrpura de bromocresol (BCP) se
produce un complejo coloreado.
Si se deja que la reacción continúe hasta que haya reaccionado toda la albúmina presente en la
solución y se haya formado la cantidad máxima de producto coloreado, el color al final de la
reacción refleja la cantidad total de albúmina en forma de complejo albúmina-colorante.

66. Las RPF miden la formación del producto o la
desaparición del reactivo.
Si el método mide la formación de un
producto, la absorbancia es mayor en el
punto final que en el punto de inicio (lo que se
denomina reacción final ascendente).
Si el método mide la desaparición de un
reactivo, la absorbancia es inferior en el
punto final que en el punto de inicio (lo que se
denomina reacción final descendente).
Reacción de Punto Final

67. REACCIONES DE VELOCIDAD:
Si el analito es una enzima o molécula que puede catalizar la
conversión de un número ilimitado de moléculas de reactivo
(sustratos) a producto, la cantidad de producto en el punto final
no reflejará la cantidad de enzima.
En su lugar, el punto final reflejará la cantidad de sustrato que
había. Por este motivo, la actividad enzimática se determina
mediante una reacción de velocidad en lugar de una reacción de
punto final.

68. REACCIONES DE VELOCIDAD:
La determinación de la concentración de la enzima se basa, en la rapidez
con que una cantidad fija de sustrato se convierte en producto. Cuanto más
enzima haya, más rápido se produce la conversión.
Entre los ejemplos de enzimas que se miden con frecuencia en el
laboratorio clínico se incluyen la lipasa (enzima digestiva medida en
enfermedades pancreáticas) y la alanina aminotransferasa (enzima
responsable de la interconversión de los aminoácidos medida en
enfermedades hepáticas)

69. Las reacciones de velocidad
pueden medir la aparición del
producto o la desaparición del
sustrato.
Si se mide la aparición de un
producto, la absorbancia aumenta
con el tiempo (lo que se denomina
reacción de velocidad ascendente).
Si se mide la desaparición de un
sustrato, la absorbancia
disminuye con el tiempo (lo que se
denomina reacción de velocidad
descendente).
Reacción de Velocidad

70. REACCIONES DE VELOCIDAD
(RV)
Este método de (RV) puede resultar más
práctico, para lograr el resultado en menor
tiempo, si una reacción es muy lenta hasta
alcanzar el punto final,
Se emplean para medir analitos que no sean
enzimas como: Amoniaco y Amikacina.

71. CALIBRACIÒN
Curva de Calibración

72. CALIBRACION
Antes de realizar cualquier medición es necesario calibrar
el instrumento. Esto consiste en medir varias muestras de
valores distintos conocidos y exactos y compararlos contra
patrones externos universalmente aceptados.
Para poder calibrar son necesarios estándares o
calibradores, estas son sustancias de referencia, se conoce
su valor y es considerado exacto.
La calibración del instrumento consiste en medir cada
calibrador como mínimo 2 veces y como máximo 6 veces.
En caso que el resultado no sea el mismo no se continua
con la calibración pues el sistema debe ser preciso.

73. La calibración utiliza una serie de soluciones que contienen
el analito a concentraciones conocidas y se observa la señal
producida con cada concentración. Estos resultados se
pueden expresar como una curva de calibración.
El propósito de la curva de calibración es establecer una
relación entre la concentración del analito y la magnitud de
la señal óptica o potenciométrica proporcionada por el
dispositivo de medición.
LA CALIBRACION

74. CURVA DE
CALIBRACIÓN

75. CURVAS DE CALIBRACIÓN
La curva de calibración del panel A
muestra el aumento lineal de la señal
con el aumento de la concentración
de analito.
La curva del panel B muestra el
descenso de la señal de forma no
lineal con el aumento de la
concentración de analito.

76. La interpolación (conexión de los puntos del trazado de
calibración para formar la línea o curva que mejor se
ajusta) establece una señal esperada para el rango de
concentraciones del analito que se encuentran entre los
valores del calibrador más bajo y el más alto.
La señal de una muestra puede compararse con la
curva de calibración y puede determinarse la
concentración de analito que produce dicha señal.
CALIBRACIÓN