La quimioluminiscencia es un método de detección basado en la emisión de luz producida por una reacción química. Se utiliza para determinar la presencia de analitos como anticuerpos y antígenos en muestras mediante el uso de micropartículas recubiertas y un conjugado marcado que producen una señal luminosa cuantificable. El documento describe los principios y aplicaciones de la quimioluminiscencia para pruebas infecciosas como VIH, hepatitis y sífilis.

1. QUIMIOLUMINISCENCIA
ESTUDIANTE: MARGARETH QUINTERO DIAZ
BACTERIOLOGÍA X

2. La luminiscencia es definida como la emisión de luz asociada con la disipación de energía con una sustancia
electrónicamente excitada. Si los electrones de un componente luminiscente son estimulados por una luz
en estado normal, estos dan energía en forma de luz cuando ellos regresan al estado.
La quimioluminiscencia es un método de lectura que se basa en el principio de emisión luminosa a través de
una reacción (Enzima-Sustrato).
La quimioluminiscencia tiene lugar cuando una molécula emite un fotón como resultado de una reacciona
química en la cual uno de los productos intermedios o finales es llevado a un estado de singlete excitado
y retorna a su estado fundamental, emitiendo una luz.

3. Hay diferentes formas de luminiscencia:
• También conocida como fluorescente, la sustancia es
estimulada por fotones de luz, la emisión de la luz con un
trazador fluorescente es diferente.
FOTOLUMINISCENCIA
• Es una reacción química mediada por enzimas responsable
por la excitación, y esta reacción está siempre emparentada a
organismos vivos.
BIOLUMINISCENCIA
• la emisión de luz es causada por los productos de una reacción específica
química, en la cual se involucran las siguientes sustancias según el sistema
automatizado que sea utilizado: éster de acridina, peróxido-ácido, hidróxido de
sodio, fosfatasa alcalina. En el caso de esta reacción el agente
quimioluminiscente es el éster de acridina que es oxidado por el peróxidoácido
y el hidróxido de sodio.
QUIMIOLUMINISCENCIA

4. Emplea como fase sólida, micropartículas paramagnéticas
recubiertas de anticuerpos específicos contra la sustancia a
analizar y como marca el éster de acridina
Este ensayo es de tipo heterogéneo y, se caracteriza por la
emisión de luz visible debido a una reacción química
producida por la oxidación del éster de acridina empleado
como marca

5. TECNICA COMPETITIVA
• El analito compite con un compuesto idéntico marcado(parte del
reactivo, “trazador”
• La señal obtenida es inversamente proporcional a su concentración.
• Es el método de preferencia para moléculas pequeñas: metabolitos-
esteroides.
TÉCNICA SÁNDWICH
• El analito se une al sitio de unión en la micro partícula y al conjugado
marcad.
• La señal obtenida es directamente proporcional a su concentración.
• Es el formato que permite mayor sensibilidad y especificidad.

6. Existe otro método quimioluminiscente, el cual emplea como marca una enzima, la fosfatasa alcalina que
cataliza la hidrólisis del éster de fosfato del substrato adamantil diaxetano (el cual es un compuesto estable)
para formar constantemente una anión inestable el cual produce una fuerte emisión de luz. Esta señal
luminosa prolongada en lugar del relámpago de luz de los otros métodos quimioluminiscentes permite hacer
numerosas lecturas con el consiguiente aumento en la precisión del ensayo.

8. De acuerdo con el Decreto 1571 Artículo 42 se deben efectuar en una muestra de sangre de cada donante,
bajo la responsabilidad del Director del Banco de Sangre cualquiera que sea su categoría las siguientes
pruebas obligatorias :
VIH-SIDA
HEPATITIS B Y C
SIFILIS
CHAGAS
HTVL

9. VIH-SIDA

36. El HCV posee características biológicas y genéticas que le permite ser agrupado dentro de la familia
Flaviviridae, género Hepacivirus.

44. ENFERMEDAD DE CHAGA

46. MORFOLOGIA
AMASTIGOTE
• Son formas intracelulares, ovoides o fusiformes y achatados, miden entre 3 y 4 um de
largo.
• Presentan un solo núcleo, redondo y cinetoplasto es muy notorio
EPIMASTIGOTES
• Lanceolados, miden hasta20 um, el cinetoplasto se localiza cerca del nucleo y el
flagelo emerge cerca de la mitad del cuerpo
• Contiene una membrana ondulante
TRIPOMASTIGOTE
• Fusiformes, mide de 20 um de largo, el núcleo se encuentra centralmente y el
cinetoplasto en la región posterior.
• El flagelo recorre extremadamente toda la extensión del cuerpo.

51. ARCHITECT
i1000SR
Es un analizador modular de inmuno-ensayo
completamente automatizado. Incluye la
tecnología avanzada CHEMIFLEX, que
combina la detección por
quimioluminiscencia refinada con
protocolos de ensayo flexibles. Además de
permitir el acceso continuo de reactivos,
muestras y suministro.

52. REACTIVOS
MICROPARTICULAS
• Ags recombinantes con detergentes.
• Sus concentración mínima: 0,08% de partículas solidas
CONJUGADO
• Acs-anti IgG/IgM (raton) marcado con acridino en tampon mes con
estabilizantes proteinicos (bovino).
• Anti IgG Concentracion min: 26,6 ng/ml y Anti lgM 1,34 ng/ml
DILUYENTE DE
ENSAYO
• Contiene el m.o con tampón MES y detergente.

53. Microparticula
magnética
+
Analito
(muestra)
Conjugado
Ac + acridino
Acido/ base
Petrigger/trigger

54. Pretrigger (pre
activador)
• Contiene
1,32% de
peróxido de
hidrogeno
Trigger
(activador)
• 0,35N
hidroxido de
sodio
Wash buffer
• Lavado
• Contiene SS
con fosfato.

55. FUNDAMENTO
Se utiliza para la determinación de
analito en muestras humanas
(suero o plasma)
La quimioluminiscencia utiliza un
derivado de acridino que incorpora
un grupo de sulfopropilo que
mejora la solubilidad acuosa y
sulfonamida que mejora la
estabilidad de los reactivos.
El analizador utiliza una única
sonda de pipeteo. Todas las
funciones relacionadas con las
muestras y los reactivos son
realizadas por esta única sonda.
En una cubeta de reacción se
añade el analito (muestra), las
microparticulas magnéticas y el
conjugado (Ac + acridinio)
produciendo una reacción.
Gracias a la adición de la solución
pre- activadora el fotómetro hace
su lectura a fondo y por ultimo la
solución activadora ocasionando la
reacción quimioluminiscente.

56. PRUEBA INFECCIOSA FUNDAMENTO
HIV/Ag Combo
Determina la presencia del antígeno p24 del VIH y de los Acs frente al VIH-1 (GRUPOS M y O)
y al VIH -2 en suero y plasma humanos.
CHAGAS
Detección cualitativa de anticuerpo IgG frente al Trypanosoma cruzi en suero y plasma
humano.
HBsAg
Detección cuantitativa de HBsAg en suero plasma y suero humano.
Anti- HBc
Detección cualitativa de anticuerpos frente al antígeno Core del virus de la hepatitis B en
suero o plasma humano.
ANTI-HCV
Detección cualitativa de anti-HCV en suero o plasma humanos, que utiliza la tecnología de
inmunoanalisis quimioluminiscente de macropartículas (CMIA)
SIFILIS
Detección cualitativa del anticuerpo frente al treponema pallidum en suero o plasma
humano
HTLV
Detección cualitativa de anticuerpos al virus T-Linfotropico humano de tipo I y tipo ll ( anti
HTLV- l y ll) en suero o plasma de humano.

57. Se combina la Mx, el tampón de
lavado , el dil de ensayo y las
macropartículas paramagnéticas
El antígeno y los anticuerpos
presentes en las muestras se
unen a los macropartículas
recubiertas de Ags y Acs.
Después del lavado el antígeno y
los anticuerpos se une al
conjugado de antígenos
(recombinantes) marcados con
acridinio,peptidos sintéticos con
acridinios y Acs marcados con
acridinio.
Las soluciones pre-activadoras y
activadoras se añaden a la
muestra después de otro ciclo de
lavado.
La reacción quimioluminiscente
se miden en unidades relativas
de luz (URL)

58. La reacción quimioluminiscente resufaltante se mide en unidades relativas de la luz
(URL) existe una relación directamente proporcional entre la cantidad de acs Anti-
Tp presente en la Mx y la URL detectadas por el sistema óptico de artitech.
Resultado
Los especímenes con valores de punto de
corte s/co <1,00
No reactivo
Los especímenes con valores de punto de
corte s/co > 1,00
Reactivo