http://www.aefa.es/wp-content/uploads/2014/04/Electroforesis-capilar.pdf

1. ELECTROFORESIS CAPILAR
ERIKA BARRETO
NATALIA ESPITIA
XIMENA FERNANDEZ
JULIANA MORERA
LORENA SOTAQUIRA
TALINA ZULETA

2. ELECTROFORESIS CAPILAR
• Es una técnica de separación en la que especies
cargadas se separan, basado en carga y tamaño, por
sus diferentes tasas de migración en un campo
eléctrico.
• Es una técnica muy adecuada para el análisis de
muestras de pequeño tamaño, células y ensayos de
microdialisis
LORENA

3. • Las separaciones pueden complementarse en periodos
cortos de tiempo.
• La puesta a punto de métodos de análisis es simple y
bastante rápida.
• El consumo de muestras y reactivos es mínimo y
prácticamente no genera residuos.
• Es una técnica relativamente económica y bajo impacto
ambiental.
CARACTERISTICAS
LORENA

4. VELOCIDAD DE MIGRACIÓN
• Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con
carga neta son colocadas en un campo eléctrico,
estas experimentan una fuerza de atracción hacia el
polo que posee carga opuesta, dejando
transcurrir cierto tiempo las moléculas cargadas
positivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polo
negativo) y aquellas cargadas positivamente se
desplazaran hacia el ánodo (el polo positivo).
JULIANA

5. • El movimiento de las moléculas esta gobernado
también por dos fuerzas adicionales; inicialmente la
fricción con el solvente dificultará este movimiento
originando una fuerza que se opone , por otro
lado las moléculas tienen que moverse en forma
aleatoria debido a que poseen energía cinética
propia denominado difusión. La energía cinética de
las moléculas aumenta con la temperatura, por ello a
mayor temperatura mayor difusión.
JULIANA

6. VENTAJAS
• La ventaja de esta técnica es que el capilar de
sílice fundida que generalmente se cubre con una
capa de polimina para darle mayor rigidez y
resistencia, tiene una ventana a través de ella que
permite el pasaje de la luz UV de tal manera que
la visualización es on-line.
• Con esta técnica descrita es posible separar
cationes, aniones, proteínas, macromoléculas y
sustancias no cargadas en forma simultánea.
XIMENA

7. ERICA

8. TALINA

9. APLICACIONES
• El avance de la electroforesis capilar se ha
extendido a áreas tales como:
• Biomédica
• Biofarmaceutica
• Alimentos
• Control ambiental
NATALIA

10. PROTOCOLO SENCILLO PARA LA
EXTRACCIÓN DE ADN
GENÓMICO DE TEJIDO DE OREJA DEL
RATÓN Y LA RATA,
USANDO LA ENZIMA BROMELINA

11. RESUMEN
Los métodos usados para el genotipo de los
animales de laboratorio incluye el aislamiento del
ácido Desoxirribonucleico (ADN) de biopsias de
tejido, seguidas de la amplificación mediante la
técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa
(RCP).
Los métodos que utilizan la hidrólisis con
proteinasas tienen como principio básico el uso de
la proteinasa K, la cual digiere proteínas y remueve
contaminantes a partir de las preparaciones de
ácidos nucleicos.
XIMENA

12. OBJETIVO
• Desarrollar un método sencillo para extraer ADN
de tejido con un máximo grado de pureza, basado
en la aplicación de un método enzimático pero
usando la enzima comercializada a nivel
farmacéutico. (bromelina)
NATALIA

13. INTRODUCCION
• Jesús y col. presentaron la estandarización de una técnica de extracción de
ADN de tejido de oreja de ratón.
• la técnica estandarizada permitió obtener ADN, tal como lo reveló el
análisis en geles de agarosa al 0,9% y mediante espectrofotometría.
• Entre los métodos para realizar la extracción del ADN de tejido , se
encuentran aquellos que se fundamentan en la hidrólisis con proteinasa K.
• La adición de proteinasa K inactiva rápidamente nucleasas que degradan el
ADN o el ácido ribonucleíco (ARN)durante la extracción.
• El objetivo del presente trabajo fue el desarrollo de un método sencillo
para extraer ADN de tejido, con un máximo grado de pureza, basado en la
aplicación de un método enzimático, pero utilizando una enzima
comercializada a nivel farmacéutico como Ananase, con Bromelina como
principio activo. La calidad del ADN obtenido se evaluó mediante
espectrofotometría y electroforesis, además de esto se realiza PCR las
pruebas realizadas conducen a presentar un método de extracción de ADN
con un alto grado de pureza, de fácil aplicación.
JULIANA

14. MATERIALES Y METODOS
Se tomaron
fragmentos de la
oreja de 10
ratones y de 80
ratas para la
extracción de ADN
Para la estimación de
la concentración del
ADN obtenido se
realizó una dilución del
ADN en agua, para
realizar las medidas de
absorbancia a 260 y
280 nm, en un
espectrofotómetro
Las bandas fueron
visualizadas en
Un
transiluminador
UV de 254 nm
La integridad del
ADN se evaluó
mediante
electroforesis
en geles de agarosa
al 0,9% en
Buffer
LORENA

15. CONCLUSIONES
• Los resultados obtenidos en las pruebas
realizadas permiten proponer el uso de la enzima
Bromelina como un excelente sustituto de la
proteinasa K, en la extracción de ADN de tejido
de ratones y ratas.
• Esta proteína, la cual es el único principio activo
de algunos antiinflamatorios es fácil de encontrar
en las redes de farmacias de cualquier país, que
además de ser económico lo hace accesible para
cualquier laboratorio de investigación.
ERICA