El documento describe un protocolo de validación para métodos alternativos en microbiología de alimentos, enfocándose en la identificación de patógenos como Salmonella spp. y Listeria spp. a través de un sistema de incubación y pruebas específicas con resultados listos en 18-24 horas. Se presentan los procedimientos y reacciones químicas necesarias para confirmar la presencia de distintos microorganismos en muestras alimentarias.

1. 1
LDC
2
H2S
3
UR
4
PRO
5
PSE
6
STA
7
ESC
8
IND
9
BCE
10
LIS
11
CAT
12
Y/M
*
*
FOOD SYSTEM
Sample A ...................................
Sample B ...................................
1
LDC
2
H2S
3
UR
4
PRO
5
PSE
6
STA
7
ESC
8
IND
9
BCE
10
LIS
11
CAT
12
Y/M
A B
*
*
patógenos a partir de herramientas alimentarias.
FOOD SYSTEM
Identificacion microbiana*
*
*
*
*
*
*
*
‘
Salmonellaspp.
Citrobacter spp.
Proteus spp. /Providenciaspp.
Pseudomonas spp.
Staphylococcus aureus
Escherichia coli, E. coli 0157
Bacillus cereus
Listeriaspp.
Hongos y levaduras
‘
Incoulación a a partir de la suspención
Diseño conveniente para dos pruebas
Resultados listos en 18-24 horas
Interpretación sencilla
1
LDC
2
H2S
3
UR
4
PRO
5
PSE
6
STA
7
ESC
8
IND
9
BCE
10
LIS
11
CAT
12
Y/M
*
*
FOOD SYSTEM
Sample A ...................................
Sample B ...................................
1
LDC
2
H2S
3
UR
4
PRO
5
PSE
6
STA
7
ESC
8
IND
9
BCE
10
LIS
11
CAT
12
Y/M
A B
*
*
1
LDC
2
H2S
3
UR
4
PRO
5
PSE
6
STA
7
ESC
8
IND
9
BCE
10
LIS
11
CAT
12
Y/M
*
*
FOOD SYSTEM
Sample A ...................................
Sample B ...................................
1
LDC
2
H2S
3
UR
4
PRO
5
PSE
6
STA
7
ESC
8
IND
9
BCE
10
LIS
11
CAT
12
Y/M
A B
*
*
Validacion ISO 16140
‘
Protocolo para la validación de métodos alternativos
en microbiología de alimentos y los objetos utilizados
Listeriaspp.
Salmonellaspp.
*

2. FOOD SYSTEM
•
•
•
Resultados Procedimiento
•
•
DESCRIPTION
•
del alimento en un volumen
establecido de agua peptonada
regulada o solución Ringer.
ser 1:10.
Transferir 0.5 mL de la suspensión de
la muestra a un vial de solución
Transferir 10 mL de la muestra
homogenizada en un tubo apropia-
do (dil. 1:10).
Incubar a 36±1°C por 4-6 horas.
Distribuir 0.2 mL de la suspención
dentro de cada pozo del sistema.
Cubrir los pozos 1-LDC, 2-H2S y
3-UR con una gota de aceite de
vaselina e incube a 36±1°C por
18-24 horas.
Agregar dos gotas de reactivo de
Kovac en el pozo 8-IND para
Agregar dos gotas del reactivo H2O2
a los pozos 11-CAT y observe si hay
formación de burbujas.
mediante la toma de una gota del
pozo 12-Y/M y la observación de
esporas al microscopio (400x).
Anotar los resultados en la forma
provista con el kit.
1 2
3 4
5 6
FOOD SYSTEM
VASELINE OIL
H2O2 REAGENT
OXIDASETEST STICK
Pseudomonas spp.
• prueba de oxidasa positiva
Staphylococcus aureus
• test de aglutinación positivo
Salmonellaspp.
•test de aglutinación
positivo
2
H2S
1
LDC
3
UR
4
PRO
2
H2S
3
UR
4
PRO
1
LDC
Proteus spp.
Providenciaspp.1
LDC
2
H2S
1
LDC
2
H2S
3
UR
4
PRO
3
UR
4
PRO
2
H2S
3
UR
4
PRO
2
H2S
3
UR
4
PRO
Citrobacter spp.
•test de aglutinación
negativo
1
LDC
1
LDC
Identification
5
PSE
5
PSE
6
STA
6
STA
Bacillus cereus
•9
BCE
9
BCE
Hongos y levaduras
12
Y/M
12
Y/M
Escherichia coli
*positive indole test
• positive agglutination test
for E. coli0157
8
IND
7
ESC
7
ESC
8
IND
Listeria spp.
test de catalasapositivo
•
•
•11
CAT
10
LIS
* *
11
CAT
10
LIS
KOVAC’S - REAGENT
* *