Explicación de cómo se realizan las Coloraciones de las bacterias

1. Coloración de Gram, Ziehl Neelsen y
coloración de Coloración de cápsula

2. Clasificación de las coloraciones
Las
coloraciones
Positiva
Simple
Compuesta y
Diferencial
Negativa
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3. Colorantes
Es una sustancia capaz de dar, ceder o transmitir su
color a otra, como células, tejidos, fibras, etc.
De acuerdo a su origen, se pueden dividir en:
Colorantes naturales: extraídos de plantas o animales.
Colorantes sintéticos o artificiales: aquellos de
minerales procesados y manipulados en el laboratorio.
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4. Colorantes
Según su estructura química se clasifican
Ácidos Básicos Neutros
La propiedad del
colorante radica en un
ion con carga negativa,
llamados aniónicos. Ej.
Eosina, Fucsina ácida,
Rojo Congo, Rosa de
bengala etc.
El ion coloreado tiene
carga negativa, llamado
catiónico. Ej. Azul de
metileno, Cristal violeta,
Safranina, Azul de
quinoleína, Verde
malaquita etc.
Son sales complejas
compuesta por un
colorante ácido y otro
básico.
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5. Los colorantes tienen las
siguientes funciones
Hacer visibles a los objetos microscópicos y
transparentes.
 Revelar su forma y tamaño.
 Mostrar la presencia de estructuras internas y
externas.
 Producir reacciones químicas específicas.
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6. Clasificación de las coloraciones
Las
coloraciones
Positiva
Simple
Compuesta y
Diferencial
Negativa
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7. Esta tinción es un procedimiento de mucha utilidad empleado en
los laboratorios donde se manejan pruebas microbiológicas.
Es una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y
clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram
negativas y bacterias Gram positivas.
Tinción de Gram
1853-1938
Fue desarrollada por Hans Christian Joachim
Gram en 1884. Medico científico danés, con
estudios en Bacteriología y Farmacología
7

8. Una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a
lo económico, sencillo y eficaz que resulta.
Resulta de gran utilidad, ya que a partir de muestras clínicas
directas provenientes de lugares estériles se puede conocer
de manera rápida las características de la muestra y hacer una
diferencia de los potenciales microorganismos causantes de
una infección.
Tinción de Gram
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9. Principios de la tinción de Gram
Están basados en las características o
propiedades físico química de la pared
celular de las bacterias, la cual le confiere
propiedades especificas a cada
microorganismo.
Las Gram positivas: poseen una pared
celular gruesa constituida por
peptidoglicano, la cual impide la salida del
complejo Crital Violeta-Lugol.
Las Gram negativas: una capa fina de
peptidoglicano y una membrana celular
externa lipídica, susceptible a la
descoloración con Alcohol – Acetona, que
actúa como un solvente orgánico.
Tinción de Gram
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10. Colorante primario cristal violeta:
tiene afinidad con el
peptidoglicano de la pared
bacteriana.
Lugol: sirve como
mordiente e impide la salida
del cristal violeta por la formación
de un complejo cristal violeta-yodo
que satura los espacios del
peptidoglicano de la pared
bacteriana.
Tinción de Gram
La tinción de Gram se basa
Alcohol-acetona:
Deshidrata la pared y
cierra los poros de la misma, también
destruye la membrana externa de las
bacterias Gram negativas debido a que
ésta es soluble a la acción de solventes
orgánicos.
Las bacterias Gram positivas, al
contener una gran cantidad de
peptidoglicano, retienen con
mayor fuerza este complejo.
Safranina: funciona como un colorante
de contratinción y sirve para teñir
las bacterias que no pudieron retener el
complejo cristal violeta-yodo. 10

11. TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIÓN COLOREADA
1. Frotis o película
(extensión)
2. Dejar secar
3. La fijación
4. Coloración.
Tinción de Gram
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12. Esta tinción es positiva, compuesta y diferencial.
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13. Resultados
Bacteria Gram negativas Bacteria Gram positivas
Tinción de Gram
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14. Coloración de Ziehl-Neelsen
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15. Coloración de
Ziehl-Neelsen
Técnica comúnmente usada en el diagnóstico
de tuberculosis.
Permite diferenciar a las bacterias en dos
grupos: aquellas que son capaces de resistir
la decoloración con alcohol-ácido (BAAR) y
aquellos que no lo son (BAANR).
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16. El agente etiológico de la tuberculosis fue descrito por Heinrich
Hermann Robert Koch.
Basándose en las características de las micobacterias, desarrolló una
de las primeras tinciones utilizando azul de metileno.
Sin embargo, fueron los trabajos de Paul Ehrlich los que definieron
la resistencia a la decoloración por alcohol-ácido.
Las últimas modificaciones a la tinción fueron realizadas por los
científicos alemanes Franz Ziehl y Karl Adolf Neelsen.
Coloración de Ziehl-
Neelsen
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17. La pared celular de las micobacterias es compleja en cuanto
a su composición bioquímica; compuesta por ácido
mesodiaminopimélico, alanina, ácido glutámico,
glucosamida, ácido murámico, arabinosa y galactosa.
Los ácidos micólicos , lípidos libres (ej. trealosa-6,6´-
dimicolato) proveen a la célula de una barrera hidrofóbica.
Otros ácidos grasos importantes son:
ceras, fosfolípidos y ácidos micoséricos.
Coloración de Ziehl-
Neelsen
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18. La tinción se basa en colocar carbol-fucsina y calentar la
preparación ligeramente para solubilizar las ceras, lípidos
y otros ácidos grasos de la pared celular para que permita
el paso libre del colorante, el cual tiene una enorme
afinidad por los ácidos micólicos presentes en la pared.
Al enfriar con agua, los componentes de la pared vuelven a
solidificar, resistiendo la acción abrasiva del alcohol-
ácido, y el azul de metileno se utiliza como contratinción.
Coloración de Ziehl-
Neelsen
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19. TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIÓN COLOREADA
1. Frotis o película
(extensión)
2. Dejar secar
3. La fijación
4. Coloración.
Coloración de
Ziehl-Neelsen
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20. Esta tinción es positiva, compuesta y diferencial.
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21. RESULTADOS
Coloración de Ziehl-Neelsen
(BAAR) (BAANR).
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22. Tinción para Cápsula Bacteriana
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23. Tinción negativa
Tinta China o Nigrosina: Este método es muy útil, aunque está limitado por la
presencia de un fondo oscuro sobre la cual la capsula de determinados
microorganismos se ponen de manifiesto.
La tinción negativa: proporciona un resultado presuntivo de la presencia de
Cryptococcus neoformans, microorganismo causante de meningitis en
pacientes con inmunosupresión, siendo la técnica más utilizada para poner de
manifiesto la cápsula Bacteriana.
El principio es simple:
El colorante usado es la tinta china, la cual tiñe el fondo de la muestra de un color
oscuro y la cápsula permanece sin teñir, observándose de color transparente.
Tinción para Cápsula
Bacteriana
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24. El Método de tinta china o Gin:
• Colocar un 0.5 ml de sol. Dextrosa en tubo.
• Tomar una pequeña cantidad del material a
estudiar y mezclar con la dextrosa.
• Colocar una gota de tinta china o nigrosina
y una gota de la mezcla antes mencionada
en el portaobjeto, mezclar y hacer un frotis
delgado, secar y fijar con alcohol metílico
por un minuto.
• Teñir por dos minutos con Cristal Violeta.
• Lavar con agua, secar y observar resultados
al microscopio.
Tinción para Cápsula
Bacteriana
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25. Resultados
Tinción para Cápsula Bacteriana
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26. Otras tinciones
Tinción de
esporas.
La tinción de
flagelos de Leifson.
https://acuanatura.com/cursosonline/tecnicasdetincion/tecnicasdetincion.pdf
https://www.slideshare.net/JoseManuelCaroGmez1/mtodos-de-diagnstico-en-microbiologa 26

27. Bibliografías
 De la Rosa M, Prieto P. J. (2003). Microbiología en Ciencias de la Salud,
Conceptos y Aplicaciones. España.
 Montoya, V. H. (2008). Microbiología básica para el área de la salud y
afines. Universidad de Antioquia.
 Madigan, M.T., J.M Martinko, P.V. Dunlap& D.P. Clark. (2009) Biología de los
Microorganismos.
 Romero C. Raúl. (2007). Microbiologia y Parasitología Humana. México,
D.F.
 Bibliografías y vidas. La enciclopedia biográfica en línea.
https://www.biografiasyvidas.com/
 https://www.slideshare.net/JoseManuelCaroGmez1/mtodos-de-diagnstico-en-
microbiologa
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 https://acuanatura.com/cursosonline/tecnicasdetincion/tecnicasdetincion.pdf