Sesion correspondiente al dia 28 de julio de 2010.

1. “Inmunohistoquímica aplicada
al diagnostico histopatológico
Conceptos básicos”
Dr. César Lara Torres
Departamento de Patología
COE-ISSEMYM

3. Manuel Toussaint Vargas
Gac Med Mex 1898;373-378
El uso del microscopio en el diagnóstico de enfermedades
ha adquirido en nuestros días tal incremento, que no
existe en el arsenal del médico otro recurso que tenga
tan variada y múltiples aplicaciones… Unas veces nos
revela , al primer golpe de vista, el agente patógeno de
una enfermedad; otras hace accesible a nuestra mirada el
mecanismo íntimo de un estado patológico… preciosos
elementos para formular pronóstico y conducir
tratamiento… 1898

4. Técnicas adicionales de
diagnóstico
•
Tinciones especiales (PAS, Masson, ZN)
•
Cultivo de tejidos
•
Microscopía electrónica
•
Inmunofluorescencia
•
Inmunohistoquímica
•
Biología molecular

6. Primer antecedente:
inmnofluorescencia
Albert H Coons ,Hugh Creech, Norman Jones y
Ernst Berlinier, en la Universidad de Harvard en
1941.

9. Cesar Milstein Georges JF Köhler Niels K Jerne
Cambridge UK Basel Institute

10. PREMIO NOBEL EN MEDICINA 1984
Cesar Milstein GJF Köhler Niels K Jerne

11. Inmunización Célula Tumoral
Cultivo de
tejidos
Hibridomas

12. Tipos de proteínas que se pueden
detectar ?
•
Proteínas estructurales
–
Citoesqueleto (FI – CK, GFAP)
–
Uniones intercelulares (E-cadherina, B-
catenina)
•
Proteínas asociadas a vesículas secretoras
–
Cromogranina A, sinaptofisina, CD68
•
Receptores
–
HER2, EGFR1, RE, RP,
•
Factores de transcripción /ciclo celular
–
P53, Ki67, TTF1, PAX5, Miogenina

13. Aplicaciones generales
•
Clasificación de neoplasias
linfoides/hematológicas
•
Identificación de primario desconocido
•
Identificación de sobre-expresión de
proteínas asociadas a translocaciones
•
Identificación de blancos terapéuticos
•
Infecciones
•
Caracterización de substancias
extracelulares

14. Anticuerpos epiteliales
CKAE1/3 Antígeno Tiroglobulina
carcinoembrionario
Receptores de CK5/6 CK8
estrógeno
Receptores de CK7 Hepar-1
progesterona
P53 CD20
Her2/neu Calcitonina
Ki67 E-cadherina
Antígeno Epitelial de CK34BE12
Membrana
Antígeno prostático TTF-1 CMV
específico
Racemasa p504 Calrretinina HPV

15. Linfoides
CD45 CD68 (KP-1) ALK-1
CD3 CD34 Bcl-6
CD20 CD138 LMP1 (EBV)
CD43 CD1a Mieloperoxidasa
CD15 CD21 PAX5
CD30 Kappa
CD23 Lambda
CD10 Bcl-2
CD56 Ciclina D1

16. No Epiteliales
CD99 S-100 PLAP GFAP
CD117 HMB-45 Inhibina alfa PBM
CD31 Mart-1 HCG Neurofilamentos
Sinaptofisina Alfa- Enolasa
fetoproteína neuronal
Vimentina
Cromogranina A
Desmina
Actina músculo
liso
Actina musculo
específica
Miogenina

17. Anticuerpo primario
1)
Anticuerpo secundario
2)
Estreptavidina
Fosfatasa alcalina
3)

19. •
Obtención de la muestra
•
Preservación (formol pH 7.4)
•
Técnica histológica (deshidratación-
parafina)
•
Recuperación antigénica
•
Bloqueo de substancias endógenas (perox)
•
Aplicación de anticuerpos y cromógenos
•
Análisis histológico y diagnóstico

20. Estandarización
•
Selección de controles
•
Bloqueadores (tipo y dilucion)
•
Anticuerpo primario (poli, mono, ratón,
conejo, cabra)
•
Anticuerpos secundarios (caballo, conejo,
cabra)
•
Amplificadores de señal (ABC, polímeros)
•
Tipo de cromógeno (DAB, FALK)

21. E-Cadherina HHV-8
GFAP Her2/ neu

22. Anti-Mitocondrias
Oncocitoma Renal
Diaminobencidina Nueva Fuscina

23. HMB-45

24. DOBLE INMUNOMARCACION
Linfoma B rico en células T/H
CD3 / CD20

25. Oscar /CK5/6
Carcinoma Basal-Like

26. INMUNOHISTOQUIMICA
•
Especificidad / Sensibilidad
•
Aplicación en material de rutina
•
Correlación con la morfología
•
Compatible con fijadores de rutina
•
Material descalcificado
•
Material congelado

27. MARCACIÓN
NUCLEAR
CDX2
Ki-67
PAX-5

28. MARCACIÓN MEMBRANA
Distrofina
E-Cadherina
CD30
Membrana y Golgi

29. MARCACIÓN CITOPLASMICA
Mitocondrias
Citoplasma y núcleo
S-100
CD68

30. INMUNOHISTOQUIMICA
APLICADA AL
DIAGNOSTICO
HISTOPATOLÓGICO

31. Q-1028-10
•
H 44 años tumor de base de lengua
•
Dx: Neoplasia maligna poco diferenciada
(carcinoma poco diferenciado vs linfoma)

35. Neoplasia maligna poco diferenciada
Sarcoma Melanoma
Varios S-100,
HMB45,
Melan-A
Linfoma Carcinoma
CD20 CKAE1/3
CD3

36. CKAE1/3

37. CD3

38. CD20

39. Q-1028-10
•
Biopsia de tumor de base de lengua
•
Linfoma No Hodgkin difuso de células
grandes con inmunofenotipo B (CD20)

40. Biopsia de Estómago.
Gastritis xantomatosa vs Adeno Ca. poco dif
Macrógafos? o Ca. con moco?
CD68 vs Citoquertina

41. Queratina (AE1-3)
Dx: Adenocarcinoma poco diferenciado

42. Mujer de 67 años de edad con lesión en duodeno.
¿Ca. Poco diferenciado ?

43. HMB-45 CK AE1-3

44. Tumores Caracterizados por
Inmunohistoquímica
•
Tumores del estroma del •
Tumor rabdoide
tubo digestivo •
Tumor fibroso solitario
•
Tumor desmoplásico •
Tumor de células
intra abdominal granulares.
•
Linfomas •
Neuroma Apendicular
•
TNEP/ Sarcoma de •
Tumor adenomatoide
Ewing

45. Nódulo Gástrico

48. Actina
CD34 CD-117 (c-kit)

49. “Tumor de Células Redondas, Pequeñas y Azules”
•
Linfoma
•
TNEP/ Sarcoma de
Ewing
•
Rabdomiosarcoma

50. Tumor de Células
Redondas, Pequeñas y Azules.
•
Linfoma
CD45 / CD20 / CD3
•
TNEP/ Sarc de Ewing
CD99 / CD56 / Sinaptofisina
•
Rabdomiosarcoma
Desmina / Miogenina / MyoD1

51. CD45 INMUNOFENOTIPO
CD45 Positivo
CD20 Negativo
CD3 Positivo
TdT Positivo
CD10 Positivo
Dx: Linfoma linfoblástico de
precursores T
CD10
TdT

52. INMUNOHISTOQUIMICA
EN LA METASTASIS DEL
PRIMARIO
DESCONOCIDO

53. Nódulo pulmonar en una mujer de 45 años de edad
Queratina Positivo = carcinoma

54. TIROGLOBULINA
Dx. Metastasis
de Ca. Papilar
del tiroides

55. QUERATINAS 7/20
Metástasis de primario desconocido
Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+
Ca Urotelial Ca Hepatocelular Ca Mamario Ca de Colon
Ca Páncreas Ca Próstata Ca Pulmón ( No Ca de célula de
Ca mucinosos Ca Escamoso células pequeñas) Merkel
de ovario Ca Neuroendocríno Ca Ca Gástrico 60%
Carcinoide Bronquioloalveolar
pulmonar Ca seroso de Ovario
Ca Endometrial
Mesotelioma

56. Tumor Pulmonar CK7
CK20 CDX-2

57. QUERATINAS 7/20
Metástasis de primario desconocido
Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+
Ca Urotelial Ca Hepatocelular Ca Mamario Ca de Colon
Ca Páncreas Ca Próstata Ca Pulmón ( No Ca de célula de
Ca mucinosos Ca Escamoso células pequeñas) Merkel
de ovario Ca Neuroendocríno Ca Ca Gástrico 60%
Carcinoide Bronquioloalveolar
pulmonar Ca seroso de Ovario
Ca Endometrial
Mesotelioma

58. CK7 (-)
Hombre de 56 años de con lesiones lítica en vértebras
AE1-3 CK20 (-)

59. QUERATINAS 7/20
Metástasis de primario desconocido
Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+
Ca Urotelial Ca Hepatocelular Ca Mamario Ca de Colon
Ca Páncreas Ca Próstata Ca Pulmón ( No Ca de célula de
Ca Ca Escamoso células pequeñas) Merkel
mucinosos de Ca Neuroendocríno Ca Ca Gástrico 60%
ovario Carcinoide Bronquioloalveolar
pulmonar Ca seroso de Ovario
Ca Endometrial
Mesotelioma

60. CK7
PSA CK20

61. Ganglio linfático axilar, mujer de 68
CK7
años
CK20

62. QUERATINAS 7/20
Metástasis de primario desconocido
Q7 + / Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+
Q20+
Ca Urotelial Ca Hepatocelular Ca Mamario Ca de Colon
Ca Páncreas Ca Próstata Ca Pulmón ( No Ca de célula de
Ca Ca Escamoso células pequeñas) Merkel
mucinosos Ca Neuroendocríno Ca Ca Gástrico 60%
de ovario Carcinoide Bronquioloalveolar
pulmonar Ca seroso de Ovario
Ca Endometrial
Mesotelioma

63. CK7
RE CK20

64. IHQ. Predicción al Tx
Her2/neu Herceptin CD117
GIST
Gleevec
LMC
VEGF Avastin
CD20
EGFR Iresa
Tarceva
Rituximab

65. Resumen
•
Proceso de estandarización es muy
importante
•
Selección de controles adecuados
•
Personal entrenado – constante revisión y
ajuste
•
Saber por qué, para qué
•
Correlación morfológica imprescindible
IHQ es una técnica complementaria

66. INMUNOHISTOQUIMICA
CON FACTOR
PRONÓSTICO Y
PREDICTIVO

68. Johns Hopkins 1884 William Halsted

69. Factores Pronósticos en Carcinoma
de la Glándula Mamaria
MORFOLOGÍA
•
Pronóstica favorable: Ca Tubular, Ca
Cribiforme, Ca Medular Ca. Mucinoso, Ca
Papilar, Ca Adenoideo quístico, Ca Juvenil
secretor
•
Pronóstico desfavorable Ca de células con
anillo de sello, Ca Escamoso, Ca
metaplásico, Ca neuroendocríno

71. Inmunohistoquímica como factor
pronóstico y predictivo
•
Receptores de Estrógenos y
Progesterona
•
Gen supresor p53
•
Ki-67
•
Her2/neu (cerbB2)
•
Angiogénesis
•
Fascina / Bcl-2 / Ciclina D1 / otros

72. RE RP
RESPUESTA A TX. HORMONAL
RECEPTORES RESPUESTA A TX
RE+ /RP+ 75%
RE+ / RP+/- 50%
RE+ / RP- 25%
RE- / RP- 10-25%

73. Estrógeno E
Prot Membrana
* E
E+RE+DNA
c-myc, c-jun,c-fos
RNA m
Ribosomas Factores de crecimiento
EGF / IGF

74. Estrógeno
DISMINUCIO Prot Membrana
N
•
Síntesis de DNA
•
Timidina cinasa
DNA Polimerasa
Anti-
•
•
Proliferación celular
estrógeno
* E+RE+DNA
c-myc, c-jun,c-fos
RNA m
Ribosomas Factores de crecimiento
EGF / IGF

75. HER2/neu
Human Epidermal Growth Factor Receptor 2
Gen neu (ratón / neuroblastoma)
•
Proteína transmembrana
185 kD / Tirosina-cinasa
cromosoma 17q21
•
Factor de crecimiento
Epidérmico :
- EGFR (Her1) / Her2 / Her3
/ Her4
•
Movilidad, adhesión celular

77. HERCEPTIN
Baselga J, Tripathy D, Mendelsohn J, Baughman
S, Benz CC, Dantis L, Sklarin NT, Seidman AD,
Hudis CA, Moore J, Rosen PP, Twaddell T,
Henderson IC, Norton L.
Phase II study of weekly intravenous recombinant
humanized anti-p185HER2 monoclonal antibody in
patients with HER2/neu-overexpressing metastatic
breast cancer.
J Clin Oncol 1996 Mar;14(3):737-44
MSKCC

78. Lab Invest 2007;87;403-408

79. Biopsia nodulo cervial en paciente de 25 años

80. •
La paciente mas probablemente es una mujer y tiene
un carcinoma metástasico
•
El tumor primario está localizado en la tiroides, lo
mas probable en el lóbulo ipsilateral y muy
posiblemente sea pequeño y no detectable
clínicamente pero… créanme ahí está!
•
El tumor está formado por células foliculares, y
seguramente hay tumor en diversos focos de la
glándula y si la paciente recibió radioterapia de niña,
podemos asumir una relación causal con el tumor.

81. •
Otros ganglios cervicales, muy probablemente estén
afectados y,… cuidado con el pulmón de esta
paciente por que es en este sitio donde se pueden
encontrar metástasis
•
Estas células tienen la capacidad de incorpora yodo
por lo que si se encontrara algún otro foco tumoral,
con una dosis grande de yodo radioacivo, puede
haber regresión.
•
Y, a pesar de que estas células son malignas, muy
probablemente la paciente estará viva y bien los
siguientes 10 años.

82. Biopsia nodulo cervial en paciente de 25 años
Metástasis de ca papilar del tiroides

83. Manuel Toussaint Vargas
Gac Med Mex 1898;373-378
El uso del microscopio en el diagnóstico de enfermedades
ha adquirido en nuestros días tal incremento, que no
existe en el arsenal del médico otro recurso que tenga
tan variada y múltiples aplicaciones… Unas veces nos
revela , al primer golpe de vista, el agente patógeno de
una enfermedad; otras hace accesible a nuestra mirada el
mecanismo íntimo de un estado patológico… preciosos
elementos para formular pronóstico y conducir
tratamiento… 1898

85. QUERATINAS 7/20
Metástasis de primario desconocido
Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+
Ca Urotelial Ca Hepatocelular Ca Mamario Ca de Colon
Ca Páncreas Ca Próstata Ca Pulmón ( No Ca de célula de
Ca mucinosos Ca Escamoso células pequeñas) Merkel
de ovario Ca Neuroendocríno Ca (Sinaptofisina)
Carcinoide Bronquioloalveolar Ca Gástrico 60%
pulmonar Ca seroso de Ovario
Ca Endometrial
Mesotelioma

86. Cortesía Dr. Schnider

87. Diagnóstico diferencial
Linfoma cutáneo vs Células de Merkel

88. Diagnóstico diferencial
Linfoma cutáneo vs. Células de Merkel
CD45 QUERATINA
Linfoma + -
Ca de células de - +
Merkel

89. CK 20 AE1-3
Cromogranina A Sinaptofisina

90. INMUNOHISTOQUÍMICA
Juan Rosai

91. RE Miogenina

92. Mesotelioma
Q7
Q5/6 Trombomodulina

93. Líquido Cerfalorraquídeo CD10
Leucémia Linfoblástica Aguda
TdT