Metabolismo a la glucosa Determinación de la glucosa Tolerancia a la Glucosa Glucosa Post prandial

1. Metabolismo de la
Glucosa
Diabetes mellitus
Hipoglicemia
Lic. Robert Ochoa Morales

2. Metabolismo de la Glucosa
La glucosa es un constituyente habitual de la dieta
Es el principal sustrato que emplean las células para conseguir la energía
La glucosa
también se
puede obtener
por
gluconeogénesis
Lactato
Amonoacidos-alanina
Glicerol
Piruvato

3. La glucosa puede seguir diversas rutas metabólicas en función de la
situación en que se encuentre el organismo
Dieta
Glucosa
Glucosa-6-P
Piruvato
Acetil-CoA
Gluconeogénesis
Vías de las
pentosas
fosfato
Lactato
Glucogenólisis
Glucógeno Glucosa-1-P
Glucogénesis
Fosforilación
oxidativa
Ciclo de Krebs
Glucolisis
Aparte del metabolismo
energético, la glucosa puede
utilizarse como base
hidrocarbonada para la síntesis de
otros compuestos, como los
ácidos grasos

4. Entrada de la glucosa en las células
G
Glucosa
GLUT4
Vesiculas
Con GLUT4
Traslocación a la
membrana
1
2
Receptor de
Insulina
Insulin
La glucosa es una molécula
polar, por lo que su estrada en
las células debe de ser mediada
por transportadores que
pueden ser:
•Dependientes de Energía:
SGLT; sodium-glucose
transporters.
•Por difusión facilitada:
GLUT, glucose transporters

6. Regulación de la homeostasia de la glucosa
La glucosa plasmática se mantiene en un intervalo bastante estrecho, de 3,5 a 6
mmol/L ( 63-110mg/dl).
El control de la concentración de glucosa en sangre se lleva acabo mediante un
complejo sistema endocrino, en el cual únicamente la insulina tiene por misión
disminuir la glucosa tras la ingesta
Glucagón
Adrenalina
Somatotropina
Tiroxina
Cortisol
Insulina
Hipoglucemiante Hiperglucemiante
3,5 mmol/L – Glucosa – 6mmol/L

8. Acciones Metabólicas de la insulina

9. Hipoglucemia
La hipoglucemia se produce cuando la glucosa es inferior a 2,8 mmol/L
(50,4mg/dl)
Se debe a un desequilibrio entre la ingesta de glucosa, la producción endógena
y su utilización
Existen numerosas causas de hipoglucemia, pero estas se pueden clasifican en dos
categorías:
1.Hipoglucemia de ayunas
2.Hipoglucemia posprandial
El mayor riesgo de la hipoglucemia es la lesión cerebral por que la
glucosa es fundamental para la obtención de energía.

10. Estudio analítico de la hipoglucemia
El estudio analítico de la hipoglucemia se basa en la:
1.Determinación de la glucosa
2.Insulina
3.Péptido C
A. El paciente no ingiere calorías por 48hrs-se obtienen espécimen cada 6
horas en que se realiza la determinación de glucosa y insulina y cada
2h cuando la concentración de glucosa desciende por debajo de 3,5
mmol/l.
Para poner de manifiesto la hipoglicemia de ayuno se efectúan los siguientes tets

11. B. Estudio de hipoglicemia posprandial se determina la concentración de la
glucosa cada 30 min durante 6 horas después de una comida.
C. Una alternativa es realizar una curva de sobrecarga prolongada
de glucosa, en la cual, tras la administración de 75 g de glucosa,
se recogen especímenes cada 30min durante 6h.
La investigación analítica de la hipoglucemia incluye frecuentemente las
determinaciones de las hormonas contra reguladoras de la glucosa de la glucemia
cuando se sospecha de fallo en su síntesis o secreción, como el cortisol, la hormona
de crecimiento, las hormonas tiroideas o el glucagón.

12. Diabetes mellitus
La diabetes mellitus es un grupo de enfermedades metabólicas caracterizado
por hiperglucemia resultante de defectos en la secreción de insulina en la
acción de la insulina o en ambas.
Si la hiperglucemia excede la capacidad de reabsorción renal, se produce
glucosuria.
Con la glucosa se excreta agua por un proceso de diuresis osmótica, que causa
sed(polidipsia).
La American Diabetes Association (ADA) propuso en 1997 una clasificación de la
diabetes mellitus en 4 grupos:
1.De tipo I
2.De tipo II
3.Gestacional
4.Otros tipos: Defectos genéticos de la función de las células β, defectos
genéticos de acción de la insulina, enfermedades del páncreas exocrino,
endocrinopatías, provocada por medicamentos o drogas, infecciones,
autoinmunes

13. Criterios diagnósticos de la diabetes mellitus
El diagnostico de la diabetes mellitus se basa en demostrar la hiperglucemia.
La ADA ha propuesto como diagnóstico que el paciente cumpla alguno de
estos tres criterios y, si el resultado está alterado, debe confirmar de nuevo
en otra ocasión.
1. Síntomas de diabetes y glucemia aleatoria superior a 11,1 mmol/l (200mg/dl.
2. Glucemia en ayunas superior a 7,0 mmol/l (126mg/dl).
3. Glucemia superior a 11,1 mmol/l(200mg/dl) a las 2h tras la sobrecarga oral de glucosa

14. Criterios de diagnóstico de la diabetes mellitus gestacional
El cribado de diabetes gestacional está indicado para todas embarazadas, excepto las
que pueden considerarse de bajo riesgo, las menores de 25 años, con peso normal,
ausencia de historia familiar de diabetes, ausencia de historia de metabolismo
anormal de la glucosa.
El estudio se realiza al resto de las embarazadas entre las 24 – 28 semanas de
gestación y en la primera visita a las de alto riesgo: mayores de 35 años, con
glucosuria, obesidad, antecedentes de diabetes gestacional
1. Test de O’Sullivan. No es necesario la ayuna, consiste en una
sobrecarga oral de 50 gramos de glucosa y realizar la determinación de
glucosa pasada 1h, en la que no deben superarse los 7,8 mmol/l
(140mg/dl).
2. Si la concentración de glucosa en sangre es superior a 7,8 mmol/l, otro
día se realiza la prueba con una sobrecarga oral de 100 gramos de
glucosa.

15. Se indicara una diabetes gestacional si se obtiene, al menos, dos valores
superiores a los siguientes:
1h 10 mmol/L.
2h 8,6 mmol/l.
3h 7,6 mmol/l.
Seguimiento de la diabetes mellitus
• Glicemia
• HbA1c –Glicohemoglobina- hemoglobina glicosilada.
• Micro albuminuria.
La valina amino terminal de la cadena β de la
hemoglobina A se une de forma no enzimática a
azucares.
Glicemia media estimada(mmol/L):1,583xHbA1c-2,52

16. Determinaciones analíticas para estudiar el metabolismo de la glucosa
1. Glucosa.
2. Prueba de sobre carga oral de glucosa.
3. Detección de glucosuria
4. Cuerpos cetonicos
5. Glicohemeglobina (HbA1c)
6. Fructosamina.
7. Insulina y Péptido C
8. Micro albuminuria.

17. Métodos para
determinación de
Glucosa
Lic. Robert Ochoa Morales

18. Método de Reducción del
Cobre• Método
• Fosfomolibdato (Folin-WU)
• Tipo de análisis
• Cuantitativo
• Principio
Cu2+
+ Glucosa Cu2O (coloreado)
• Usos
• Reacción poco usada interés histórico
• Comentarios
• Gran tendencia positiva debido a interferencia química por
otros azucares, creatinina, ácido ascórbico y otros
compuestos.
Calor
OH-

19. • Método
• Benedict
• Tipo de análisis
• Cualitativo –Semi cuantitativo
• Principio
Cu 2+
+ Glucosa Cu2O + CuOH
• Usos
• Base de pruebas semicuantitativo para azúcares
reductores totales en orina
• Comentarios
• Junto con los métodos más específicos de CO/PO para
orina, distingue glucosuria de otros azúcares en orina, en
particular en neonatos.
Calor
OH-
(rojo) (amarillo)

20. Enzimático
• Método
• Hexoquinasa (HK)
• Tipo de análisis
• Cuantitativo espectrofotométrico, C o PF
• Principio
Glucosa + ATP Glucosa-6 fosfato + ADP
Glucosa-6 fosfato + NADP+
6-fosfogluconato + NADPH + H+
*aumenta la absorbancia a 340 nm en relación con la concentración de
glucosa.
• Usos
• Suero LCR, orina; automatizado el método más usado.
• Comentarios
• Ha sido propuesto como base para método de referencia; muy buena
exactitud y precisión.
HK
G6DP

21. • Método
• Glucosa oxidasa, reacción acoplada (“Trinder”)
• Tipo de análisis
• Cuantitativo, usa varios tipos de colorantes como aceptor
final, C o PF
• Principio
Glucosa + O2 Ácido glucónico + H2O2
H2O2 + Colorante reducido Colorante-oxidado
Reacción indicadora con peroxidasa
*Aumento de la absorbancia relacionada con la concentración de glucosa.
• Usos
• Suero LCR, orina; adaptado fácil y usualmente al análisis automatizado.
• Comentarios
• Segunda reacción indicadora susceptible de interferencias positivas
falsas por diversos compuestos; buena exactitud y precisión.
Glucosa
oxidasa
PO
+H2O

22. • Método
• Glucosa deshidrogenasa
• Tipo de análisis
• Cuantitativo, PF, C .
• Principio
Glucosa + NAD+
D-Gluconolactona + NADH + H+
* El aumento de la absorbancia a 340 nm está relacionado con la concentración de glucosa.
• Usos
• Raro suero, LCR
• Comentarios
• Puede ser adaptado a instrumentos automatizados.
GDH

24. Muestra
• La muestra de elección es suero o plasma.
• Líquidos orgánicos como LCR y orina.
• La glucosa en sangre entera a temperatura
ambiente puede sufrir una glucólisis con una
velocidad de 5% por hora, es necesario separar el
coágulo o las células tan pronto como sea posible.

25. Intervalo de Referencia
No se observan diferencias significativas por
sexo o raza, pero si existen algunas
relacionadas con la edad.
En los niños menores de 5 años los niveles normales
de glucosa pueden ser 10-15 % inferiores a los
correspondientes para los adultos.
Los recién nacidos puede presentar concentraciones
de glucosa sanguínea que oscilan entre 200 y 800
mg/L (1,11 a 4,44 mmol/L).
Los niveles de glucosa en LCR son
aproximadamente 40% a 80% de los suero o plasma

26. Prueba de Sobrecarga oral de la glucosa
La prueba de sobrecarga oral de glucosa se basa en realizar determinaciones seriadas
de glucosa durante 2h antes y después que el paciente ingiera oralmente 75 g de
glucosa, o 1.75 g/kg de peso hasta un máximo de 75g.
Es una de las pruebas diagnosticas de diabetes mellitus por que tiene mayor
sensibilidad que la glucosa plasmática.
Normalmente, la glucemia supera en algún momento los 11,1mmol/L, pero
desciende a los 120 min por debajo de 7,8 mmol/l.

27. Detección de la glucosuria
La medida semicuantitativa se realiza en una tira reactiva orina que emplea
la reacción de la glucosa oxidasa acoplada a una reacción cromogenica
sensible al H2O2.

28. Cuerpos cetónicos
La determinación de los cuerpos cetonicos en sangre u orina se realiza por
métodos de detección semicuantitativos, utilizando tiras reactivas o tabletas que
se basa en la reacción del acetoacetato con nitroprusiato en medio alcalino para
formar un compuesto púrpura.
Acetoacetato + nitroprusiato complejo coloreado
pH alcalino

29. Glicohemoglobina (HbA1c
1. Los basados en la diferencia de carga, como son los de
cromatografía de intercambio iónico.
2. Los basados en la diferencia estructural entre la hemoglobina
glicosilada y la no glicosilada, como los inmunoanálisis.
Reactivos – Soluciones de trabajo
HbA1c
R1 Tampón MES**: 0,025 mol/L; tampón TRIS***: 0,015 mol/L, pH 6,2;
anticuerpo anti-HbA1c (suero ovino): ≥ 0,5 mg/mL; estabilizantes
R2 Tampón MES: 0,025 mol/L; tampón TRIS: 0,015 mol/L, pH 6,2; polihapteno
HbA1c: ≥ 8 μg/mL; estabilizantes
3a-d Hemolizado derivado de sangre humana y sangre ovina;
TTAB: 9 g/L; estabilizador * TTAB = Bromuro de tetradeciltrimetilamonio
Hemoglobina
R1 Tampón fosfato: 0,02 mol/L, pH 7,4; estabilizadores
** MES = Ácido 2-morfolino etanosulfónico
*** TRIS = Tris (hidroximetil)-aminometano

30. Hemoglobina A1c
La determinación de HbA1c se basa en el ensayo inmunoturbidimétrico de
inhibición (TINIA) para sangre completa hemolizada.
• Muestra y adición de R1 (tampón/anticuerpo) La glucohemoglobina (HbA1c) de
la muestra forma con el anticuerpo anti-HbA1c un complejo antígeno-anticuerpo
soluble. Ya que en la molécula HbA1c existe solamente un sitio de fijación
específico para el anticuerpo anti-HbA1c, no se forman estructuras más
complejas.
• Adición de R2 (tampón/polihapteno) e inicio de la reacción: Los polihaptenos
forman con los anticuerpos anti-HbA1c un complejo anticuerpo-polihapteno
insoluble que se mide turbidimétricamente.

31. Hemoglobina
La concentración de hemoglobina se determina en un segundo canal. La
hemoglobina liberada de la muestra hemolizadas es transformada a un derivado
con un espectro de absorción característico y se mide bicromáticamente.
Protocolo 1 según la IFCC
La concentración porcentual de hemoglobina A1c se calcula a través del
cociente HbA1c/Hb por ejemplo como:
HbA1c [g/dL]
% HbA1c = —————— x 100
Hb [g/dL]
Protocolo 2 según DCCT/NGSP
La concentración porcentual de hemoglobina A1c se calcula a
través de la fórmula correctiva:
HbA1c [g/dL]
% HbA1c = (91,5 x —————— ) + 2.15
Hb [g/dL]
La Federación Internacional de Química Clínica (IFCC) y el programa nacional
de estandarización de la glucohemoglobulina de los EE.UU. (NGSP

32. Valores teóricos
Personas de metabolismo sano
Protocolo 1 (según la IFCC):
2,9-4,2% de HbA1c
Protocolo 2 (según DCCT/NGSP):
4,8-5,9% de HbA1c

33. Fructosamina
La determinación de fructosamina no tiene mucha utilidad y no suele
realizarse en el laboratorio clínico. Existe métodos colorimétricos que
se basan en que la fructosamina en condiciones alcalinas reduce el azul
de nitrotetrazolio.
La velocidad de formación del formazan, que se mide a 540nm, es
proporcional a la concentración de fructosamina.

34. Insulina y péptido C
La determinación de insulina y péptido C se realiza mediante
métodos de inmunoanálisis competitivos o, más
frecuentemente de tipo sándwich.
Microalbuminuria
La determinación de Microalbuminuria se realiza normalmente con
diversas técnicas que emplean anticuerpos antialbumina, como
Inmunonefelometría o inmunoturbidimetria.
El espécimen estándar es la orina recogida durante 24h, pero existe una
elevada correlación con aquella que se recoge a primera hora de la
mañana.
Los valores teóricos son entre 15 – 20 mg/L