Microbiologia practica nro 01

GUÍA DE PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA VETERINARIA I 2015
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 1
PRACTICA N° 01
RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO
I.INTRODUCCION:
Uno de los factores que nos permiten obtener un resultado confiable en un Laboratorio de
Microbiología, es que los equipos e instrumentos funcionen correctamente y podamos
asegurar que los valores que indican son los reales.
En la presente practica el estudiante se familiarizara con los equipos y material utilizado
en un laboratorio de Microbiología que es muy variado y depende fundamentalmente de las
líneas de trabajo a las que está dedicado; evidentemente, no se precisa el mismo
equipamiento en un centro de investigación con un alto grado de especialización.
Por tanto, aquí sólo nos referiremos al material básico que se suele encontrar en un
laboratorio mínimamente dotado
II. OBJETIVOS:
 Familiarizar al estudiante con los implementos usados en la sala de practicas de
microbiología veterinaria.
 Capacitar al estudiante para adquirir habilidad en el manejo de los equipos y
materiales usados en la sala de prácticas de microbiología veterinaria.
 Instruir al estudiante en las reglas básicas de comportamiento y seguridad dentro de
la sala de prácticas de microbiología veterinaria.

III. MARCO TEÓRICO:
A. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO: Conjunto de medidas preventivas
reconocidas internacionalmente que protegen la salud y la seguridad de riesgos
como los agentes físicos, químicos y mecánicos.
1. Es imprescindible el uso de bata de laboratorio.
2. Al iniciar y finalizar las prácticas, el estudiante se lavará las manos con agua y
jabón.
3. El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar
cada práctica es conveniente desinfectar la superficie de trabajo. Los
desinfectantes más habituales para este propósito son la lejía y el etanol 70-96°.
4. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben
evitar los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que crean
corrientes que originan contaminaciones o pueden producir accidentes.
5. Durante las prácticas está prohibido comer, beber y fumar. Cuando se
manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz,
ojos...
6. Libros, carpetas, abrigos y cualquier otro material que no se utilice en la
realización de la práctica deben ser apartados del lugar de trabajo.
7. Para deshacernos del material contaminado utilizaremos los recipientes
adecuados. Estos recipientes serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe
tirar nada por el fregadero o la basura común
8. Bajo ningún concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del
laboratorio.
9. El suministro de gas para los mecheros Bunsen requiere las precauciones
propias de estas instalaciones. Los escapes de gas son muy peligrosos, por lo
que hay que cerrar todas las llaves de paso de gas al finalizar la práctica, evitar
la presencia de sustancias inflamables y revisar periódicamente las
conducciones.
10. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar siempre pipeteadores manuales.

11. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de
microorganismos...) se comunicará inmediatamente al instructor
B. EQUIPOS:
1. MICROSPOCIO BINOCULAR: Los microscopios magnifican la imagen y
aumentan nuestra capacidad para ver detalles que de otro modo no podríamos
percibir, es un instrumento que sirve para observar objetos demasiado pequeños
para el ojo humano o detalles de los mismos mediante un proceso de ampliación.
PARTE MECÁNICA
 Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en él se encuentra la fuente de
iluminación.
 Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se
encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema
de pinza o similar, para sujetar el portaobjetos con la preparación, y unas escalas
que ayudan a conocer qué parte de la muestra se está observando. La platina
presenta 2 tornillos, generalmente situados en la parte inferior de la misma, que
permiten desplazar la preparación sobre la platina, en sentido longitudinal y
transversal respectivamente.
 Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte
de oculares y objetivos.
 Revólver porta objetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.
 Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomar el
microscopio para trasladarlo de lugar.
 Tornillo macrométrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer enfoque
de la muestra al utilizarse el objetivo de menor aumento. Desplaza la platina
verticalmente de forma perceptible.
 Tornillo micrométrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque preciso de la
muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el macrométrico. También
desplaza verticalmente la platina, pero de forma prácticamente imperceptible. Es

el único tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer enfoque, al
ir cambiando a objetivos de mayor aumento.
PARTE ÓPTICA
 Oculares: son los sistemas de lentes más cercanos al ojo del observador, situados en
la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes
convergentes cuyo aumento se reseña en la parte superior de los mismos
(normalmente 10X en los microscopios que se utilizarán en esta práctica).
Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden se mono o
binoculares.
 Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del
tubo, mediante el revólver.
 Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los
concentra sobre la preparación, de manera que proporciona mayor o menos contraste.
Se regula en altura mediante un tornillo
 Fuente de iluminación: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminación está
constituido por una lámpara halógena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del
microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que envía los
rayos luminosos hacia la platina.
 Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminación. Abriéndolo o
cerrándolo permite graduar la intensidad de la luz.
 Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es
necesario para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en
el pie del microscopio. Además, el transformador dispone de un potenciómetro para
regular la intensidad de la luz.
2. MICROSCOPIO ESTEREOSCOPIO: El microscopio estereoscópico tiene dos lentes
objetivos y posee una profundidad de foco mucho mayor que la del microscopio
compuesto; ambas características le permiten producir imágenes tridimensionales. Las
partes de este microscopio son prácticamente las mismas que las discutidas para el
microscopio compuesto

 El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo
general forma de Y o bien es rectangular
 El tubo. Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evitar las
molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan
los oculares.
 El revólver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los
objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en
posición de trabajo, la cual se nota por el ruido de un piñón que lo fija.
 La columna, llamada también asa o brazo, es una pieza colocada en la parte
posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo
inferior se adapta al pie.
 La platina. Es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto
que se va a observar. Presenta un orificio en el eje óptico del tubo que permite el
paso de los rayos luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso
permanece inmóvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos
laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.
 Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la
preparación con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a
izquierda.
 El tornillo macrométrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del
microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos
movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación.
 El tornillo micrométrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al
deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nítido de la preparación.
Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para
precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.

3. ESTUFA O INCUBADORA: La incubadora crea condiciones de temperatura,
la humedad y otras condiciones en grado óptimo, tales como el contenido de
dióxido de carbono (CO2) y de oxígeno en su atmósfera interior necesarios para
el desarrollo de un cultivo microbiano.
4. REFRIGERADOR: son indispensables para conservar los medios de cultivo,
productos biológicos y patológicos, así como mantener la supervivencia de
algunos microorganismos. Su temperatura oscila alrededor de los 2-10
5. CONGELADOR: alcanzan temperaturas entre -20 y -70° C y son indispensables
para conservar determinados productos biológicos (sueros, microorganismos).
Nos permite darles un tiempo más prolongado de almacenamiento.
6. CENTRIFUGA: Es un instrumento que utiliza la fuerza centrífuga para separar
estratos (capas) de diferente densidad. Ejemplo suero de los glóbulos rojos en la
sangre.
7. HOMOGENIZADOR VORTEX: Se utiliza para mezclar líquidos o
preparar disoluciones y suspensiones, a través de vibraciones, ideal para agitar
tubos de ensayo. para un solo tubo de ensayo con cabezal de goma
intercambiable.
8. CUENTA COLONIAS: Un contador de colonias es un instrumento utilizado
para contar colonias de bacterias o de otros microorganismos que crecen en una
placa de agar. Los primeros contadores sólo eran superficies iluminadas sobre
las que se colocaba la placa, con las colonias marcadas con un rotulador en la
superficie externa de la placa mientras el operador realizaba el recuento manual
9. BALANZA: Se denomina con el término de balanza al instrumento que sirve y
se utiliza para medir o pesar masas.
10. JARRA DE ANAEROBIOSIS: La jarra de anaerobiosis, es un recipiente ideal
para realizar incubaciones en anaerobiosis ya que en su soporte de acero
inoxidable se pueden instalar las bolsas de generación de atmósfera libre de
oxígeno.
11. ESTUCHE DE PLACA PETRY Y DE PIPETAS: Son utilizados para realizar la
esterilización.

12. EQUIPO DE SIEMBRA
a. Mechero de bunsen: Nos brinda un margen de esterilidad de 10-15 cm de
diámetro
b. Asa de Kolle: Compuesto de un mango y alambre de micrón que termina
en argolla, utilizado para realizar siembras por estría.
c. Aguja de Kolle: Posee un mango y un alambre de micrón que termina en
punta, que se utiliza para realizar las siembras por punción o picadura.
d. Espátula o asa de Drigalsky: Es de material de vidrio y termina en una
forma triangular, sirve para realizar una siembra por diseminación.
EQUIPO DE ESTERILIZACIÓN:
1. HORNO ELÉCTRICO: La esterilización puede llevarse a cabo mediante calor
seco y en este caso se realiza en una estufa denominada. La destrucción
microbiana se produce por oxidación de los componentes celulares y
desnaturalización de proteínas. Este es un proceso menos eficaz por la ausencia
de agua y por lo tanto deben incrementarse tanto las temperaturas como los
tiempos de exposición. 180°C -200°C(1 hora)
2. AUTOCLAVE: El calor húmedo por medio de utilización de vapor de agua es
el agente esterilizante más frecuentemente utilizado. Este mecanismo destruye
eficazmente los microorganismos por desnaturalización de proteínas y enzimas,
y desestabilización de membranas. Deben llegar a una temperatura de 121°C X
15 min y a presión de 15 libras.
3. FILTRACION: Los microorganismos no son destruidos sino que son retenidos
físicamente o adsorbidos por los filtros con un tamaño de poro adecuado. El
tamaño de poro que se considera en la actualidad esterilizante es el de 0,22 µm
aunque más recientemente se tiende a la utilización de poros de 0.1 µm
a. Filtro de seitz
b. Matraz de kitasato
c. Bomba de vacio:

4. POTENCIOMETRO: Equipo que es utilizado para medir el pH de los medios
de cultivo, constituido por un par de electrones sensibles a la concentración de
hidrogeniones.
5. DESTRILADOR ELÉCTRICO: se usa para purificar el agua corriente,
mediante procesos controlados de vaporización y enfriamiento. Al aplicar
energía térmica al agua en fase líquida, luego de un proceso de calentamiento, se
convierte en vapor de agua. Esto permite separar las moléculas de agua, de las
moléculas de otras sustancias o elementos que se encuentran mezclados o
diluidos. El vapor de agua se recolecta y
MATERERIALES DE VIDRIO:
1. PROBETA: Este material permite medir volúmenes, las hay de
vidrio y de plástico y de diferentes capacidades
2. MATRAZ DE ERLENMEYER: vasijas o recipientes de vidrio de diversas
formas que se emplean en el laboratorio para calentar líquidos citando hay
peligro de pérdida de vaporación, o para titular en el análisis cuantitativa.
3. MATRAZ AFORADO O FIOLA: Instrumento de vidrio de cuello largo y
angosto se usa para preparar soluciones.
4. VASO DE PRECIPITACIÓN:
5. PLACA PETRI: son recipientes de vidrio o de plástico de forma cilíndrica
compuestos de caja y tapa, recipientes destinados a contener medios de cultivos
sólidos cuando se desea disponer de una gran superficie
6. PIPETA: Son instrumentos de vidrio que se usan para medir los líquidos con
mayor exactitud.
7. PROBETA GRADUADA: Instrumento de vidrio, que se emplea, para medir el
volumen de los líquidos.
8. TUBOS DE ENSAYO: para disolver, calentar o hacer reacciones pequeñas
cantidades de sustancias líquidas o sólidas y preparación de cultivos. Estos
pueden ser grandes medianos y pequeños.

9. VARILLA DE VIDRIO: sirve como agitador, son de vidrio para que no se
oxiden, corroen ni reaccionan con las sustancias y miden de 20 a 30 cm
10. PORTAOBJETOS: son láminas rectangulares de vidrio, de bordes biselados
que miden 76 mm de largo, 26 mm de ancho y 1 mm de espesor. Son utilizados
para realizar preparaciones microscópicas coloreadas o sin colorear.
11. CUBREOBJETOS: son laminillas delgadas de vidrio, de tamaños variados, de
forma cuadrada o redonda, son empleados para cubrir preparaciones y facilitar
la observación microscópica del material que se desea examinar.
12. EMBUDO: Sirve para trasvasar líquido de un recipiente a otro, evitando que se
derrame líquido, también se utiliza en operaciones de filtración.
13. TRÍPODE: este puede ser fijo o desmontable, se utiliza para colocar matraces y
recipientes en observación, o para poner estos al fuego y aumentar su
temperatura.
MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS:
1. MEDIO DE CULTIVO: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes,
factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de los microorganismos
2. BATERIAS DE COLORACIÓN DE GRAM: Los colorantes que lo componen
son el cristal violeta, lugol, alcohol acetona y safranina.
3. BATERIA DE COLORACIÓN ACIDO RESISTENTE: La batería está
compuesto por: fucsina básica fenolada, alcohol ácido y azul de metileno.
4. ALCOHOL ISOPROPILICO: Utilizado para limpiar los objetivos del
microscopio óptico.
5. PEROXIDO DE HIDROGENO: Es un desinfectante, además se usa para
realizar pruebas bioquímicas por ejemplo la prueba de la catalasa
6. REACTIVO DE INDOL: Utilizado para realizar prueba de indol, para
identificar las especies bacterianas.

MATERIAL FUNGIBLE:
1. PAPEL DE CRAF: Papel utilizado para cubrir las placas Petri, tubos de ensayo,
para llevarlos al proceso de esterilización por calor húmedo.
2. GASAS: Nos sirve para elabora los tapones de los mataces de Erlenmeyer.
3. PABILO: Material utilizado para sujetar materiales.
4. JABON CARBÓLICO
5. PAPEL TOALLA
IV. MATERIALES Y METODOS:
1. El estudiante hará un reconocimiento a conciencia de todos los implementos que se
usan, así como las precauciones que se deben tomar durante su manejo, lo anterior
debe quedar consignado en el informe que entregara al profesor.
2. El profesor hará una demostración experimental de la forma como se llenan las
pipetas
V.RESULTADOS

VI. CONCLUCIONES
CUESTIONARIO
1. ¿Establezca la diferencia entre los siguientes términos?
 Esterilización:
 Desinfección:

 Antisepsia:
 Higienización:
 Germicida:
 Asepsia:
 Bactericida:
2. ¿Cuál es el método de esterilización más efectivo? Mencione las características.

3. ¿Cuál es la función de los siguientes equipos y coloque las partes en las
correspondientes flechas?

4. ¿Cuál es la diferencia entre la congeladora y refrigeradora?
5. ¿Dibuje el equipo de siembra y mencione cada una de sus funciones?

6. ¿Cuál es la función del microscopio y describa los diferentes objetivos?
7. ¿Cuantos placas Petri observamos según su tamaño?
8. ¿Dibuje la jarra de anaerobiosis mencione sus partes y funciones?
9. Dibuje el homogenizador vortex y menciones las funciones y partes?

10. ¿Defina el término siembra y medio de cultivo?
VII. BIBLIOGRAFIA:
1. GARCIA Valdez Elena. 2010. Prácticas de microbiología.
2. TORRES Miguel. 1996. Manual práctico de Bacteriología medica.
3. MANUAL DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA GENERAL.2012.

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