El Northern blot es una técnica que permite detectar moléculas de ARN separadas por tamaño mediante electroforesis en gel y transferidas a una membrana. Similar al Southern blot pero optimizada para ARN, se utiliza para estudios de expresión génica, detección de mutaciones o splicing alternativos separando el ARN celular y hibridándolo con una sonda complementaria.

1. NORTHERN BLOT
TÉCNICAS DE HIBRIDACIÓN
VIRGINIA GUTIÉRREZ MARTÍNEZ

2. ÍNDICE
¿Qué es el Northern blot?
Curiosidad
En qué consiste el Northern blot
Protocolo
Aplicaciones
Resumen
Preguntas a los compañeros
Bibliografía

3. ¿ QUÉ ES EL NORTHERN BLOT?
El Northern blot es una técnica de detección de moléculas de ARN, con la que
conseguimos a partir de una muestra biológica de cualquier organismo,
aislar un ARN en particular si conocemos al menos parte de su secuencia.
Además permite separar los ARN dependiendo de su tamaño. Este método se
utiliza frecuentemente para realizar estudios de expresión génica.
Surge como variación del Southern blot, una técnica similar creada para
separar moléculas de ADN.

4. CURIOSIDAD
El Southern blot recibe su nombre de
su creador Edwin Southern, y por
eso, el Northern blot se denominó
de esta manera como oposición
(norte y sur) al Southern.
La técnica para separar ARN fue
diseñada por James Alwine, David
Kemp y George Stark, a finales de la
década de 1970, en la universidad
de Stanford.

5. EL NORTHERN BLOT CONSISTE EN:
Extraer el ARN de las células que vamos a tratar y
separarlo por tamaño mediante electroforesis en gel.

7. PROTOCOLO
En primer lugar,
partimos de una
muestra de ARN
purificado por
cualquiera de los
métodos que ya
conocemos. Nuestra
muestra no requiere
digestión enzimática
puesto que es ARN
Que purificado a
partir de un lisado
celular, ya es una
mezcla compleja
de moléculas
diferentes de ARN de
distintos tamaños.

8. ELECTROFORESIS EN GEL
El siguiente paso es someter nuestra muestra de ARN a una
electroforesis en gel para separar los fragmentos según su tamaño.

9. TRANSFERENCIA DEL ARN A LA MEMBRANA

10. HIBRIDACIÓN Y REVELADO
En el proceso de hibridación se llevan a cabo 3 etapas:
•Pre-hibridración
•Hibridación
•Lavados
El revelado de la sonda se realiza mediante autorradiografía con
una película de rayos X, de manera que aparecerá una mancha
oscura en los puntos de la membrana en que se localicen los
híbridos sonda-secuencia.
El Northern blot es una técnica que lleva muchos años usándose,
el único problema que presenta es la fragilidad del ARN durante el
proceso. Existen alternativas modernas al Northern blot como los
microarrays.

11. VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Ventaja:
- Detecta
pequeños
cambios en la
expresión de
genes que los
microarrays no
pueden
identificar.
Desventaja:
- Degradación de
la muestra por
ARNasas
endógenas de la
muestra o a través
de la
contaminación
ambiental.

12. APLICACIONES
Permite observar
un patrón
particular de
expresión
genética entre
tejidos, órganos,
estadios del
desarrollo,
niveles de estrés
ambiental,
infecciones
causadas por
patógenos y
durante el curso
del tratamiento
de las mismas.
Mostrar
sobreexpresión
de oncogenes y
la
desregulación
de genes
supresores
tumorales en
células
cancerosas
cuando son
comparadas
con tejidos
normales.
La variación en
el tamaño del
producto de un
gen puede
además
indicarnos
deleciones o
errores en el
proceso de
transcripción.
Alterando la sonda
podemos conocer
la secuencia e
incluso determinar
la región del ARN
que ha sido
delecionada.

13. RESUMEN
El Northern blot es una técnica de hibridación
que permite detectar moléculas de ARN
separadas por electroforesis en gel y
transferidas a una membrana de nailon o
nitrocelulosa.
Es similar al Southern blot pero optimizada para
estudiar ARN.
Se utiliza para estudios sobre expresión génica,
detección de mutaciones o splicing alternativos.

14. PREGUNTAS
¿Cuál es la principal
diferencia en el
procedimiento con ARN
en el Northern blot y el
de ADN en el Southern
blot?
¿Me podríais decir una
ventaja sobre utilizar el
Northern blot antes que
el microarrays?
¿Conoces alguna
aplicación de ésta
técnica?

15. BIBLIOGRAFÍA
• http://biologia.laguia2000.com/tecnicas-en-
biologia/northern-blot
• Libro de biología molecular
• http://slideplayer.es/slide/3615692/