Radioinmunoensayo, ELISA y Western BlotBryan Priego
A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
Twitter.com/@bryanpriegop
La Inmunofluorescencia es una técnica de inmunomarcaje que se vale del uso de anticuerpos marcados con moléculas fluorescentes para demostrar la presencia de una determinada molécula de interés en un tejido. órgano, o solución de estudio.
Radioinmunoensayo, ELISA y Western BlotBryan Priego
A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
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La Inmunofluorescencia es una técnica de inmunomarcaje que se vale del uso de anticuerpos marcados con moléculas fluorescentes para demostrar la presencia de una determinada molécula de interés en un tejido. órgano, o solución de estudio.
Introducción a la técnica de Inmunofluorescencia en células y tejidos. Incluye conceptos de fluorescencia, uso de anticuerpos y descripción de los pasos fundamentales de esta técnica.
Introducción a la técnica de Inmunofluorescencia en células y tejidos. Incluye conceptos de fluorescencia, uso de anticuerpos y descripción de los pasos fundamentales de esta técnica.
Las luces ultravioleta se han utilizado durante décadas para ayudar a detectar la orina de roedores. Asociación Nacional de Control de Plagas (National Pest Management Association, NPMA)
practica 1 microscopia por flouresencia.pdfMontsColmena
¿Qué es la microscopía por fluorescencia?
La microscopia básica se basa en teñir mediante colorantes los componentes celulares que normalmente son incoloros y no se pueden distinguir al microscopio. Entonces mediante el contraste se permite distinguir las estructuras para su estudio. La microscopía de fluorescencia tomó esta idea fundamental y la modifico para su propio uso.
Entonces decidieron suplantar colorantes comunes por tintes fluorescentes que son moléculas capaces de absorber la luz en una longitud de onda específica. Para posteriormente con cierto tiempo de retraso emitir o reflectar su propia luz en una longitud de onda más larga de la que recibió. El retraso entre la absorción y la emisión es realmente insignificante, ya que hablamos de nanos segundos. A estos tintes que poseen esta capacidad se les conoce como fluorocromos o fluoróforos. (Tovar, 2016)
La fluorescencia refiere al proceso mediante el cual un espécimen absorbe y subsecuentemente irradia luz, en un intervalo de tiempo (entre la absorción de la luz de excitación y la emisión de la luz fluorescente) que es usualmente de pocos nanosegundos. (Pietrasanta & Bilderling, 2011)
La fluorescencia es un fenómeno de luminiscencia, propiedad de ciertos elementos químicos denominados fluorocromos o fluoróforos. El fluorocromo es utilizado como un marcador colorante fluorescente para crear contraste en zonas determinadas de elementos de interés (desde simples moléculas hasta microorganismos). El fluoróforo es una parte de una molécula (fluorocromo, proteína) que tiene propiedad de fluorescencia, i.e. que absorbe fotones con longitudes de onda cortas y emite fotones con mayores longitudes onda. La Figura 1 muestra el espectro de absorción de una substancia fluorescente y su respectivo espectro de emisión que está desplazado a mayores longitudes de onda. (Ormachea & Villazón, 2017)
Fundamentos de la microscopia de fluorescencia
CONSTITUCION FUNDAMENTAL:
Fuente luminosa (lámpara de mercurio o halógena): Debe emitir la mayor cantidad de luz ultravioleta en el límite del espectro visible, que atraviesan el material de la preparación de la misma forma en que lo hace un microscopio óptico común
Objetivos: Suelen ser de cuarzo ya que el vidrio absorbe la radiación ultra-violeta.
Filtros: Retienen la radiación ultra-violeta, peligrosa para el ojo humano, dejando pasar solamente la radiación visible, que no es peligrosa. Existen un gran número de juegos de filtros de excitación y de emisión para los diferentes fluorocromos:
*El de excitación: Ubicada entre la fuente de luz y el preparado. Permite el paso de ondas de luz con longitud que caiga en el rango azul con el fin que el preparado sea alcanzado exclusivamente por la luz azul y produzca emisión de luz fluorescente.
*El de barrera: Ubicada antes del ocular para prevenir daños retinianos que podrían ser causados por rayos ultravioleta que escapan el espejo dicrómico. Corta completamente la luz de excitación no deseada, es decir selecc
ACERTIJO DE CARRERA OLÍMPICA DE SUMA DE LABERINTOS. Por JAVIER SOLIS NOYOLAJAVIER SOLIS NOYOLA
El Mtro. JAVIER SOLIS NOYOLA, crea y desarrolla ACERTIJO: «CARRERA OLÍMPICA DE SUMA DE LABERINTOS». Esta actividad de aprendizaje lúdico que implica de cálculo aritmético y motricidad fina, promueve los pensamientos lógico y creativo; ya que contempla procesos mentales de: PERCEPCIÓN, ATENCIÓN, MEMORIA, IMAGINACIÓN, PERSPICACIA, LÓGICA LINGUISTICA, VISO-ESPACIAL, INFERENCIA, ETCÉTERA. Didácticamente, es una actividad de aprendizaje transversal que integra áreas de: Matemáticas, Neurociencias, Arte, Lenguaje y comunicación, etcétera.
2. INMUNOFLUORESCENCIA
es una técnica de inmunomarcación que hace uso de anticuerpos
unidos químicamente a una sustancia fluorescente para
demostrar la presencia de una determinada molécula y se aplica
en diagnósticos de patologías cutáneas, renales e investigación.
3. TIPOS DE INMUNOFLUORESCENCIA
PRIMARIA O (IFD) : permite la detección de antígenos en un paso.
Utiliza anticuerpos conjugados a isotiocianato de fluoresceína. La
reacción positiva en forma de fluorescencia verde manzana puede verse
con la ayuda de un microscopio de fluorescencia.
SECUNDARIA O (IFI): consta de dos etapas y permite la detección de
anticuerpos circulantes.
4. ETAPAS DE LA IFI:
PRIMERA: se fijan sobre un portaobjetos los antígenos que constituyen el substrato
conocido específico (células que contiene virus, T. gondii, T. pallidum, etc.) sobre él se
coloca el suero de quien se sospecha la presencia de anticuerpos específicos, si la reacción es
positiva se dará formación de complejo antígeno-anticuerpo no visible ya que el anticuerpo
no estaba marcado
SEGUNDA: se agrega una anti-inmunoglobulina humana marcada, que reaccionará con
el anticuerpo del complejo producido en la primera etapa.
6. LIMITACIONES
Al igual que la mayoría de las técnicas de fluorescencia, un problema muy significativo
con la inmunofluorescencia es el fotoblanqueo. Es decir la pérdida de la actividad
fluorescente causada por la exposición a la luz. Esta pérdida de actividad puede ser
controlada reduciendo la intensidad o el tiempo de exposición a la luz, incrementando
la concentración de fluoróforo, o empleando fluoróforos mas robustos que sean menos
propensos al fotoblanqueo.
7. MICROSCOPIO DE IF
fuente de luz (lámpara de mercurio o
halógena)
La cual
debe emitir la mayor cantidad de luz ultravioleta
conforma
Filtro de excitación Filtro de selección Filtro de barrera
es el de calor y está
ubicado entre la fuente
de luz y el filtro de
excitación en los
microscopios de luz
transmitida y entre la
fuente de luz y el espejo
dicrómico en los
microscopios de luz
incidente
colocado antes del
ocular para prevenir
daños retinianos que
podrían ser
causados por rayos
ultravioleta que
escapan el espejo
dicrómico
tiene por objeto
permitir el paso de
ondas de luz con
longitud que caiga en el
rango azul con el fin
que el preparado sea
alcanzado
exclusivamente por la
luz azul y produzca
emisión de luz
fluorescente.
8. VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Ventajas:
• Se pueden obtener resultados rápidos.
• No es necesario realizar cultivos.
• Se puede identificar microorganismos específicos en
un grupo mixto.
• Determina la identidad de un organismo muerto. Es
sensible.
9. DESVENTAJAS
• Costos en reactivo y equipo
• Debe ser realizado por personal muy especializado.
• Los resultados no son 100% específicos
10. APLICACIONES
• Técnicas analíticas (cuali-y cuantitativas) en Química y Bioquímica.
• Métodos inmunológicos de diagnóstico médico.
• Procedimientos microscópicos en Microbiología, Genética,
Histología, Histoquímica, Biología Celular, Biología Molecular,
Biología del Desarrollo, Patología (sondas vitales, ensayos de
viabilidad, indicadores,inmunofluorescencia, FISH).
• Análisis poblacional de células (citofluorimetría de flujo).
11. APLICACIONES
Treponema Pallidum
agente etiológico de la
Sífilis. Determinación
por inmunofluorescencia
donde se observa la forma
de espiroqueta
Anticuerpos anti
Toxoplasma gondii, agente
etiológico de la
toxoplasmosis. El sustrato
antigénico utilizado es una
suspensión
de Toxoplasma gondii.
Detecta antígenos de
membrana .
Virus respiratorios Virus
Influenza B (IFD detección de
antígeno)