Práctica de laboratorio bases par microbiologia

1. PRÁCTICA # 2
Técnicas de tinción para la observación
de células y estructuras bacterianas
Claudia Bermúdez
Gabriela Cadena
Alexandra Flores
Daniela Rúales
Grupo # 1

2. Índice
1.- Objetivos
2.- Introducción
3.- Fundamentos
4.- Resultados
5.- Discusiones
6.- Conclusiones

3. Objetivo General
Conocer y manejar las diferentes técnicas de tinción simple, diferencial, de
capsula y endospora.
Objetivos Específicos
• Aprender el procedimiento adecuado para preparar un frotis y tinción
bacteriana.
• Distinguir las diferentes morfologías bacterianas por medio de la tinción.
• Distinguir y reconocer endosporas y cápsulas al observar al microscopio
placas teñidas.

4. Los microorganismos se
colorean para aumentar
el contraste de las
células con el medio que
las rodea
Las tinciones en microbiología son las primeras
herramientas que se utilizan en el laboratorio
para el diagnóstico de las enfermedades
infecciosas.
INTRODUCCIÓN

5. TIPOS DE TINCIÓN
Tinción simple
- Un solo colorante como el cristal violeta,
carbolfuscina o azul de metileno
- Crea contraste entre microorganismos y
medio que lo rodea
- Visualización de la morfología
bacteriana.
Tinción diferencial
- Más de un colorante
- Diferencia bacterias por su color
- Tinción Gram, se distingue Gram +
y Gram -
- (Gram+) Las que retienen el
colorante primario tras la
coloración.
- (Gram-) Las que se decoloran y se
tiñen con el colorante de contraste.

6. TIPOS DE TINCIÓN
Endosporas
- Métodos de coloración
especiales
- Soporta altas temperaturas,
baja humedad y radiaciones.
- Se forma dentro de la
célula.
- Resiste a la decoloración.
Cápsula
- Formadas por polisacáridos,
polipéptidos y glucoproteínas.
- Composición y grosor
variable.
- Protección ante acción
fagocítica
04

7. Procedimiento
E1:Homogenizar la mezcla
E2: Pasar 3 veces la placa por el
mechero
E3: Dejar el colorante actuar por 30
segundos
E4: Importante colocar el aceite de
inmersión
Tinción simple

8. Tinción
diferencial
E1: Los colorantes aplicados son:
• Cristal Violeta durante 1 minuto
• Lugol durante 1 minuto
• Alcohol Cetona durante 20 segundos
• Safranina durante 1 minuto: 30 segundos
E2: El exceso secar con papel absorbente

9. Endosporas
E1: Colorante aplicado verde de malaquita
E2: Debe realizarse cuidosamente , en caso de
evaporación agregar más colorante.
E3: Evita la ruptura del material por cambio brusco de
temperatura al lavar con agua.
E4: Colorante realiza su acción en 30 segundos.

10. Cápsulas
E1:Emplear una segunda placa
E2: Al ambiente
E3: Evita perder el frotis
E4:Colorantes empleados cristal violeta (1 minuto) y
safranina (1 minuto)

11. Resultados

12. Tinción simple Tinción diferencial
Endosporas
bacterianas
Cápsulas
Salmonella
typhimurium
Gram -
Forma de bacilo
Klebsiella pneumoniae
Gram -
Forma de bacilo
Bacillus cereus
Gram +
Forma de bacilo
Klebsiella pneumoniae
Gram -
Forma de bacilo
Tipos de tinción

13. Tinción simple Diferencial Endoespora Cápsula
Grupo
1
Salmonella
typhimurium
Klebsiella
pneumoniae
Bacillus
cereus Klebsiella pneumoniae
Grupo: 5 Grupo: 2 Grupo: 2 Grupo: 2 Grupo: 3
Grupo: 9 Grupo: 4 Grupo 5:
Comparación de resultados con otros grupos

14. Discución de
resultados

15. Tinción simple
Los grupos cromóforos cargados
positivamente del cristal violeta reaccionan
con el citoplasma bacteriano cargado
negativamente desencadenando la tinción.
Colorante Microorganismo
Cristal Violeta
Salmonella typhimurium
Gram -
Salmonella typhimurium
Morfología bacteriana:
Bacilos con forma redondeada.
Agrupación: forma irregular

16. Cápsula
Colorante Microorganismo
Tinta china
Cristal violeta
Safranina
Klebsiella pneumoniae
Capsula Bacteriana:
Cubierta gruesa gelatinosa
Hidrosoluble
Constituida por una capa de polisacáridos o polímeros
Función
Proteger de ser fagocitados;
se convierte en una barrera difícil de
atravesar
Adhesión y resistencia
Formación de biopelículas
Se basan
en el contraste
Cápsula
Bacteria
Medio

17. Endosporas
Colorante Forma Microorganismo
Verde de
malaquita
Safranina
Bacilos
esporas
color verde
Bacillus cereus
(gram+)
aeróbico
Verde malaquita débil
básico, carga positiva
débil
endospora
La safranina catiónico que
aporta color rojo(violeta
gram+) Células vegetativas

18. Diferencial
Gram + Retienen el 1er colorante (cristal violeta)
Gram - Las bacterias que se tiñen con el 2do
colorante (safranina)
Tinción diferencial
Colorante Microorganismo
Cristal violeta
Lugol
Safranina
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella pneumoniae
Morfologia:
Bacilo
Gram -
Estructura y composición
química de la pared celular
Tinción (Gram - ) Klebsiella pneumoniae

19. Conclusiones
Se comprendió y se
logró manejar las
diferentes técnicas de
tinción la cual nos
ayudó a identificar las
diferencias entre
bacterias, basándose
en factores
como composición de
la pared celular.
Se distinguió las
morfologías de cada
una de las bacterias
de estudio y se logró
distinguir el tipo de
tinción dependiendo
de la estructura que se
desea observar cómo
son endosporas en el
caso de Bacillus
cereus o cápsulas en
Klebsiella p.
Se comprendió el
adecuado
procedimiento de la
realización del frotis
con una extensión de la
muestra en forma de
una delgada lámina
para la correcta
visualización de
bacterias y su
morfología bacteriana y
posibles agrupaciones
de las células.

20. Bibliografía
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Colombia D,C.
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