El documento describe un estudio sobre el papel de la fosforilación de la proteína de choque térmico 27 (HSP27) en la apoptosis de células epiteliales y la migración epitelial durante la cicatrización de heridas en el epitelio corneal humano. Los investigadores encontraron que la HSP27 fosforilada aumentó después de una herida de rascado, lo que indica que esta proteína está relacionada con los primeros pasos de la cicatrización epitelial de la herida. También descubrieron que la HSP27 fos

1. Heat shock protein 27 phosphorylation is
involved in epithelial cell apoptosis as well as
epithelial migration during corneal epithelial
wound healing
In Seok Song, Soon-Suk Kang, Eun-Soon Kim, Hyun-Min Park, Chul Young
Choi, Hungwon Tchah, Jae Yong Kim
Ana María Gutiérrez T.
Simón Hoyos P.
Medical students
III Semester
2014

2. INTRODUCTION

3. CHAPERONES





Was discovered like heat
shock protein.
Its synthesis increases
with the high temperature.
Required for appropriate
unfolding, transport,
folding and degradation of
proteins.
Prevent protein
aggregation before folding
ending.
Increases the folding
velocity.

4. APOPTOSIS




Programmed cell
death.
Normal, clean and
tidy process
Removed cells with
genetic damage,
infected or old.
Can be activated for
internal or external
stimulation.

5. CORNEA




•
•
•
•
•
Transparent front part of
the eye.
Covers the iris, pupil,
and anterior chamber.
Functions: protection,
transmission and refraction.
Has 5 layers:
Corneal epithelium
Bowman's layer
Corneal stroma: 90%
Descemet's membrane
Corneal endothelium

6. HSP27



•
•
•
•
•
•
•
•
•
Is a chaperone of
the sHsp group
ATP-independent chaperone
Functions:
Chaperone activity
Thermotolerance
Inhibition of apoptosis
Regulation of cell development
Cell differentiation
Implicated in architecture of the
cytoskeleton
Cell migration
Cell survival
Tumor progression.

7. INTEGRATION
HSP27 is a chaperone who protects in a
stress situation, inhibiting the apoptosis
and activating the cell migration in human
corneal epithelial cells

8. GENERAL OBJECTIVE

9. GENERAL OBJECTIVE
Found the exactly role of HSP27
phosphorylated for the wound healing on
human corneal epithelial cells by certain
series of molecular methods that
demonstrate specificity for the apoptosis
and migration process

10. MATERIALES Y
MÉTODOS

11. MATERIALES Y
MÉTODOS
LINEA CELULAR:
• Es un cultivo celular
transferido o subcultivado
•Uniforme y homogéneo
•Podrá ser propagado,
transferido y almacenado
•De fácil manejo
En este estudio se usó
una línea celular de
células epiteliales de la
córnea humana

12. MATERIALES Y
MÉTODOS
WESTERN BLOT
•También llamado Inmunoblot
•Usada para
detectar proteínas específicas
en una muestra con la
interacción antígeno-anticuerpo
Pasos
1. Extracción y
solubilización de las
proteínas
2. Electroforesis en gel
(SDS-PAGE)
3. transferencia a
una membrana
absorbente
4. Detección de las
proteínas de la membrana
mediante el uso de anticuerpos específicos

13. MATERIALES Y
MÉTODOS
WESTERN BLOT
Estudiar la presencia de
la proteína en el extracto
y analizar su cantidad
relativa respecto a otras
proteínas.
Para la visualización de
las bandas de interacción
antígeno-anticuerpo se
usó reactivos de
quimioluminiscencia
En el estudio se usó para
medir la expresión de
HSP27 después de le
lesión en las células
epiteliales de la córnea
humana

14. MATERIALES Y
MÉTODOS
TRANSFECCIÓN
Introducción de ADN
foráneo dentro del núcleo
de una célula eucariota
mediante plásmidos,
vectores víricos u otros
Se lleva a cabo al abrir
poros transitorios en la
membrana plasmática
para permitir paso de
material genético
En el estudio se usó para
introducir siRNAs-HSP27
específica y siRNAs de
control en las células
epiteliales de la córnea
humana, mediante
lipofección

15. MATERIALES Y
MÉTODOS
WESTERN BLOT DE TRASFECCIÓN
Este método se usó para
determinar el papel de
HSP27 en la
sobrevivencia celular.

16. MATERIALES Y
MÉTODOS
MIGRACIÓN CELULAR
Mecanismo por el cual la
célula se moviliza en
forma activa en
condiciones in vivo o in
vitro.
Utiliza como soporte
componentes de la
matriz extra celular, otras
células o sustratos no
biológicos.
Se da en la formación de
tejidos en el desarrollo
embrionario,
cicatrización y
la respuesta inmune.
En el estudio se midió
mediante fotografías en
puntos específicos para
cuantificar el número de
células en la migración de
las áreas lesionadas de las
células del epitelio cornea.

17. MATERIALES Y
MÉTODOS
MICROSCOPÍA CONFOCAL
Técnica de imagen
utilizada para incrementar
el contraste de las
fotografías, para
reconstruir imágenes en
tercera dimensión con una
resolución mayor.
En el estudio se usó
para analizar los
filamentos de actina y
su citoesqueleto.

18. MATERIALES Y
MÉTODOS
CITOMETRÍA DE FLUJO
Tecnología compleja, de
gran especificidad, que
permite analizar una
población celular.
En el estudió se utilizó
este método para evaluar
la apoptosis celular.
Proporcionando gran
variedad de parámetros
como el recuento y
clasificación de células
según sus características
morfológicas

19. MATERIALES Y
MÉTODOS
ENSAYO DE PROLIFERACIÓN CELULAR
La proliferación celular se
da en numerosos
procesos fisiológicos y
patológicos como el
crecimiento, la
cicatrización, la hipertrofia,
el desarrollo de tumores
La células en proceso de
proliferación pasan por
ciclo celular, durante el
cual las células se
replican y se dividen en
dos células hijas.
En el estudio de la
proliferación de las
células se midió mediante
densidad óptica, entre
mayor densidad, más
proliferación se había
dado.

20. RESULTADOS

21. EXPRESIÓN DE HSP27
LUEGO DE LA HERIDA

22. EFECTO DEL KNOCKDOWN EN
LA HSP27 EN HCEC LUEGO DE
LA HERIDA
Akt: marcador de supervivencia
celular
Bax: proteína proapoptótica.

23. MIGRACIÓN CELULAR LUEGO
DE LA HERIDA

24. INMUNOFLUORESCENCIAREORGANIZACIÓN DE LOS FILAMENTOS
DE ACTINA

25. CITOMETRÍA DE FLUJO
C.N
F.A
P.A

26. Discussion
Jain
Phosphorylated
HSP27 has a
role during the
early phase of
the corneal
epithelial wound
healing process
Yes

27. Discussion
Shi and
Isseroff
HSP27
can
protect
cells
stabilizing
actin
filaments
Yes

28. Discussion
Hedges and
Kwon
Phosphorilation
of HSP27 is
involved in the
mediation of cell
migration
Yes

29. Discussion
Garrido
and
Mjahed
When
HSP27 is
associated
with stress
blocks cell
death and
promotes
survival
Yes

30. CONCLUSIONS

31. CONCLUSIONS
• HSP27 phosphorylated was increased
after scratch wounding, so this protein is
related with the first steps of epithelial
wound healing.
• It’s very important to improve every day in
the way to induce apoptosis, because it's a
form to fight with cancer.

32. CONCLUSIONS
• With this discovering, scientists can think
in new ways to treat corneal problems and
it can revolutionize ophthalmology.
• We can elucidate the importance of
molecular biology in medicine, with this
research we have an idea of the behavior
of proteins involved in specific cellular
functions.

33. MAPA

34. MAPA

36. BIBLIOGRAFÍA
•GOMEZ MARÍN,Jorge Enrique; GONZÁLEZ MARÍN, ángel; CASTAÑO
OSORIO, John Carlos; PATARROYO GUTIÉRREZ, Manuela Alfonso. 2011.
Biología molecular: principios y aplicaciones. Medellín, Colombia. Corporación
para investigaciones biológicas. Pág: 423-425,497.
•KARP, Gerald. 2009. Biología celular y molecular: Conceptos y experimentos.
Quinta edición. México D.F, Mexico. Mc Graw Hill. Pág: 139-140,155.
•MARTINEZ SÁNCHEZ, Lina Maria; VARGAS GRISALES, Natalia; TORO
MONTOYA, Andrés; PAMPLONA SIERRA, Ana Paulina; QUEVEDO ORREGO,
Esteban. 2012. Biología molecular. Séptima edición. Medellín, Colombia.Pág
138-140.
•In Seok Songa, Soon-Suk Kanga, Eun-Soon Kima, Hyun-Min Parka, Chul Young
Choib, Hungwon Tchaha, c,Jae Yong Kim. 2014. “Heat shock protein 27
phosphorylation is involved in epithelial cell apoptosis as well as epithelial
migration during corneal epithelial wound healing”. Experimental Eye Research.
Volume 118. pp: 36-41