tema 43

1. 43-Etapas en el proceso de la replicación: inicio (actividad de las
proteínas involucradas topoisomeras, helicasas, proteína de unión a
cadena sencilla y primasa), elongación (mecanismo de elongación en la
cadena continua y en la discontinua, fragmentos de Okazaki),
terminación, replicación de telómeros.
UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA
TRIMESTRE 15 – O
PROFESOR: JORGE ANTONIO AMÉZQUITA LANDEROS
MODULO: PROCESOS CELULARES FUNDAMENTALES
ALUMNA: THANIA SARAHI ÁLVAREZ ROMÁN
TEMA:

2.  Iniciación
 La replicación es el modo de perpetuar la información genética, y asegurar una copia fiel de la
información en cada una de las células producidas por división. Se divide en tres etapas: Iniciación,
elongación y terminación.
 La replicación comienza siempre en la secuencia ORI u origen de la replicación. En esta
sección se encuentran las llamadas proteínas iniciadoras (girasas) que se encargan de
desestabilizar la estructura helicoidal del ADN, abriéndola y fijándola para que no se vuelva a
enrollar. Al separar las cadenas, otras proteínas (helicasas) se encargan de romper los enlaces
de hidrógeno, a partir de aquí se forma la horquilla de replicación que es asimétrica.
 Por último las proteínas SSB y topoisomerasas impiden que se formen otras estructuras
secundarias, pues de la doble hélice original se formaran dos nuevas moléculas, siguiendo el
patrón semiconservativo.

3.  La replicación del cromosoma de E. coli se inicia en una secuencia de origen denominada oriC. Este origen
consta de 245 pb y contiene secuencias muy conservadas entre los orígenes de replicación bacterianos. Las
secuencias clave son dos series de repeticiones cortas: una de las series consta de tres repeticiones de una
secuencia de 13 pb, con una cantidad abundante de A y T (puede desnaturalizarse con facilidad) y la otra
serie está formada por cuatro repeticiones de una secuencia de 9 pb.
 En la fase de iniciación de la replicación participan al menos ocho enzimas o proteínas diferentes. Éstas se
encargan de abrir la hélice del ADN en el origen y establecen un complejo precebador para las reacciones
posteriores. El componente clave en el proceso de iniciación es la proteína DnaA. Un complejo formado por
unas 20 moléculas de proteína DnaA se une a las cuatro repeticiones de 9 pb en el origen, a continuación
reconoce y sucesivamente desnaturaliza el ADN en la región de las repeticiones de 13 pb. Este proceso
requiere ATP y la proteína bacteriana HU, del tipo de las histonas, que facilita que el ADN se doble y
desenrolle. Seguidamente, la proteína DnaB se une a esta región, en una reacción que requiere la proteína
DnaC. Dos hexámeros de DnaB, uno en cada horquilla, actúan de helicasa, desenrollando el ADN de manera
bidireccional y creando dos horquillas de replicación potenciales. Simultáneamente muchas moléculas de
la proteína de unión al ADN de cadena sencilla (SSB) se fijan de manera cooperativa al ADN, estabilizando
las cadenas separadas e impidiendo su renaturalización. Otra enzima, la ADN girasa (una ADN
topoisomerasa) alivia la tensión topológica creada por la DnaB helicasa.

5. iniciación es la única fase de la replicación que está regulada, de modo que sólo
tenga lugar una vez cada ciclo celular.

6.  Incluso con el molde de ADN expuesto,
no se puede sintetizar un nuevo ADN a
menos que se construya un cebador.
Recordemos que todas las ADNp
conocidas necesitan un cebador con un
grupo OH libre en el extremo 3´ para
sintetizar ADN en dirección 5´  3´.
Kornberg descubrió que durante la
replicación había sobre el ADN pequeñas
cantidades de ARN. Este ARN, de entre
10 y 60 nucleótidos, es precisamente el
que hace de cebador y es sintetizado
por la enzima primasa (proteína DnaG,
que es una ARN polimerasa, las cuales,
como veremos después, no necesitan
cebador) y sobre el que la ADNp III
añade desoxirribonucleótidos en la fase
de elongación

7.  Elongación
 La RNA primasa reconoce el inicio de la replicación y es la que genera el fragmento cebador
(de ARN 5’ a 3’), que luego se desprenderá. En esta etapa la ADN polimerasa reconoce el
extremo 3’ del cebador e inicia la elongación de la cadena. La ADN polimerasa es la que se
encarga de la síntesis de DNA, por lo que siempre va en dirección 5’ a 3’. En una de las
cadenas existe el límite que produce la abertura de la cadena madre (cadena retardada), por
lo que la elongación se produce discontinuamente gracias a la producción de pequeños
fragmentos (fragmentos de okazaki). La otra cadena (cadena líder) es continua hasta encontrar
un nuevo punto de iniciación de la replicación.
 La fase de elongación consiste en dos operaciones distintas pero relacionadas: la síntesis de la
hebra conductora y la síntesis de la hebra rezagada.
 La síntesis de la hebra conductora empieza con la síntesis del cebador de ARN por la primasa
en el origen de replicación. A continuación la ADNp III adiciona desoxirribonucleótidos a este
cebador. Una vez iniciada, la síntesis de la hebra conductora transcurre de manera continua, al
mismo ritmo que el desenrollamiento del ADN en la horquilla de replicación.

8.  La síntesis de la hebra rezagada se realiza a trozos. Primero, un cebador de ARN es
sintetizado por la primasa y, como en la síntesis de la hebra conductora, la ADNp III se une al
cebador de ARN y añade desoxirribonucleótidos. A este nivel, la síntesis de los fragmentos
de Okazaki parece sencilla, pero es en realidad muy compleja. Esta complejidad reside en
la coordinación de la síntesis de las hebras conductora y rezagada, puesto que ambas hebras
son producidas por un único dímero asimétrico de ADNp III. Para ello la hebra molde de la
cadena rezagada forma un bucle para aproximar los dos puntos de polimerización y
conseguir que las dos cadenas en síntesis tengan la misma polaridad.

9.  La síntesis de los fragmentos de Okazaki pone en juego complejas actividades enzimáticas. La helicasa
DnaB y la primasa constituyen una unidad funcional dentro del complejo de replicación, denominada
primosoma. La ADNp III usa un juego de subunidades núcleo (polimerasa núcleo) para la síntesis
continua de la hebra conductora, mientras que el otro juego de subunidades núcleo circula entre un
fragmento de Okazaki y el siguiente sobre el bucle. A medida que el ADN es desenrollado por la
helicasa DnaB en la horquilla de replicación, la primasa ocasionalmente se asocia con la helicasa DnaB
y sintetiza un corto cebador de ARN. Una nueva abrazadera deslizante β es entonces posicionada en el
cebador por el complejo cargador de la abrazadera de la ADNp III. Cuando se ha completado la síntesis
de un fragmento de Okazaki, la replicación se detiene y las subunidades núcleo de la ADNp III se
disocian de su abrazadera deslizante y se asocian con la siguiente. Ello inicia la síntesis de un nuevo
fragmento de Okazaki.
 EL proceso permite la síntesis de unos 1000 nucleótidos por segundo en cada hebra. Una vez finalizada
la síntesis de un fragmento de Okazaki, su cebador es eliminado y reemplazado con ADN por la ADNp I
(actividad exonucleasa 5´  3´ y polimerasa, respectivamente) y la mella restante es sellada por una
ADN ligasa.
 La ADN ligasa cataliza la formación de un enlace fosfodiéster entre un OH 3´, al final de un
fragmento, y un fosfato 5´ al final de otro fragmento. La energía necesaria se obtiene acoplando la
reacción a la escisión de NAD+ (E. coli y otras bacterias) o de ATP (eucariotas y algunos virus).

11.  Terminación
 Al finalizar la etapa anterior entra en participación la DNA polimerasa de tipo I con actividad
endonucleasa, la cual degrada los cebadores y rellena los huecos usando el extremo 3’ de la cadena
anterior. Otra enzima (ligasa) es la encargada de sellar los cortes que quedan.

12.  Finalmente, las dos horquillas de replicación del cromosoma circular de E. coli se encuentran
en una región terminal que contiene múltiples copias de una secuencia de 20 pb denominada
Ter (por terminal). Las secuencias Ter actúan en el cromosoma como una especie de trampa
donde una horquilla de replicación puede entrar pero no salir. Las secuencias Ter son lugares
de unión para una proteína denominada Tus (por sustancia de utilización del terminal en
inglés). El complejo Ter-Tus puede detener la replicación desde una sola dirección. Sólo actúa
un complejo Ter-Tus por ciclo de replicación. Cuando una horquilla de replicación topa con un
complejo Ter-Tus se detiene; la otra horquilla se detiene cuando encuentra a la primera ya
detenida. Los pocos centenares de pares de bases finales entre estos grandes complejos
proteicos son replicados a continuación mediante un mecanismo aún desconocido. El
resultado son dos cromosomas circulares ligados en el espacio. Los círculos de ADN unidos de
este modo se denominan concatenados; su separación requiere, en E. coli, una
topoisomerasa. Los cromosomas separados son segregados en las células hijas en la división
celular.

14. ORGANISMO SECUENCIA LONGITUD kb
Tetrahymena TTGGGG 0.4-0.6
Oxitrichia TTTTGGGG 0.032
Euplotes TTTTGGGG 0.18
Ratón TTAGGG 100-150
Hombre TTAGGG 2-20
• Replicación de telómeros
• Los telómeros son estructuras cuya función principal es dar estabilidad al cromosoma, de
hecho los cromosomas partidos se degradan por los extremos sin telómeros. Se ha visto que
los telómeros están formados por secuencias de longitud muy variable formadas por
repeticiones de secuencias muy cortas ricas en G, sobre todo se han estudiado en protozoos
ciliados, como Tetrahymena, Euplotes y Oxitrichia, ya que en su desarrollo los cromosomas
se fragmentan adicionándose 40 000-100 000 telómeros, dependiendo de la especie.

15.  Los telómeros tienen extremos protuberantes en 3’. Al eliminarse el iniciador, el DNA se iría
acortando en cada ronda de replicación, por lo que ha de haber un mecanismo que alargue
los telómeros en el que juega un papel central la telomerasa, un complejo
ribonucleoprotéico (RNA + proteínas) que sintetiza DNA con un molde RNA. La telomerasa
contiene un corto componente RNA de 159 bases (en Tetrahymena, 192 bases en Euplotes).
Cada RNA incluye una secuencia de 15-22 bases que es idéntica a 2 repeticiones de una
secuencia rica en repeticiones de C. Este RNA proporciona el molde para sintetizar
repeticiones ricas en G. Las bases son añadidas individualmente en la secuencia correcta. La
enzima avanza discontinuamente: el molde de RNA se posiciona sobre el primer de DNA,
varios nucleótidos se adicionan al primer y entonces la enzima se transloca (molde movible),
para comenzar otra vez y así se van sintetizando las secuencias repetidas del telómero. Este
mecanismo permite el alargamiento del extremo protuberante en 3’: No se conoce como la
cadena complementaria al telómero se ensambla, pero se puede especular que se sintetiza
usando los extremos 3’OH de una horquilla terminal GT como cebador para la síntesis de
DNA, así el telómero sintetizado a su vez sirve de molde para que la DNA polimerasa
sintetice la complementaria dando lugar a DNA de banda doble

17.  La longitud de los telómeros permanece más o menos constante en células con telomerasa.
Pero la telomerasa no es siempre activa en todos los organismos eucariotas, y en este caso
los telómeros se acortarán; la telomerasa es activa en:
 · Eucariotas unicelulares (levadura).
 · Células germinales de organismos superiores.
 · Algunas pocas células somáticas.
 · La mayor parte de células tumorales humanas.

18.  Fuentes de consulta:
 Dr. Rolando A. Hernández Fernández. (1999). Telómeros y telomerasas. Rev Cubana Invest
Biomed, 18, 128-9.
 CONFERENCIAREPLICACIÓN DEL DNA PÁGINA 5,2010 Sitio web:
http://fbio.uh.cu/sites/genmol/confs/conf4/index.htm

 Rocio Garcia. (2011). Fases del proceso de la replicación. 21 de abril 2011, de Enfermería en
Inmunología y Genética Sitio web:
http://enfermeraeninmunologaygentica.blogspot.mx/2011/04/fases-del-proceso-de-la-
replicacion.html