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- 1. UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA Profesor: Bioq. Farm. Ricardo León. Alumnas: Cynthia Ortega Quezada. Fecha: 10 de Enero del 2014 Curso: 5to Paralelo: “B” Grupo #1 Práctica Título de la Práctica: TOXICIDAD AGUDA ORAL Animal de Experimentación: Rata Vía de Administración: Oral 10 OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA Observar si las 3 ratas de bioterio presentan signos de intoxicación ante la administración de 300mg/Kg del extracto de moringa. Observar los signos clínicos que presentan las ratas durante un periodo de 14 días. Conocer los daños presentes en los órganos de las ratas mediante la realización de una necropsia. MATERIALES Bisturi #11 Equipo de disección Vaso de precipitación Equipo de destilación Jeringuilla de 10cc SUSTANCIAS Extracto de moringa Tiopental sódico PROCEDIMIENTO Cánula Guantes de látex Mascarilla Mandil
- 2. Escoger del bioterio 3 animales de experimentación con similar peso que estén en ayuna antes de la administración, 3-4 horas antes del inicio del experimento Se administra una sola dosis o varias tomas en 24 horas para completar la dosis, divididas en tomas iguales separadas de 3-4 horas La administración es por gavage utilizando una cánula de administración intragastrica Terminada la dosificación la comida se volverá a colocar de 3 a 4 horas después (1 dosis) y cuando son varias en dependencia del periodo de exposición. Para la sustancias acuosas 2ml/100mg Para las sustancias oleosas 1ml/100mg Realizar durante los 14 dias si los animales de experimentación presentan alguna alguna alteración. GRÁFICOS Administración de tiopental sódica 0.3ml Administración oral de extracto de moringa Observación diaria de los signos clínicos De las ratas Pesos en tiempos: 0,7,14 días
- 3. NECROPSIA Rata 1 Rata 2 Rata 3 ENSAYO DE TOXICIDAD AGUDA ORAL Producto: Dosis: 300mg/Kg Peso Facha de Inicio:10/01/2014 Grupo Peso Inicial Fecha de Término: 24/01/2014 Volumen (ml) Pesadas en gramos (días) 7 14 1 210gr 0.7ml 221gr 223gr 2 218gr 0.72ml 224gr 225gr 3 196gr 0.64ml 205gr 210gr Media y Desviación Estándar 208gr 216gr 219gr Peso 220 218 216 214 212 210 208 206 204 202 1 7 Días 14
- 5. ANÁLISIS DE RESULTADOS Las 3 ratas que se le administraron 300mg/kg de extracto de moringa, durante los 14 días que estuvieron bajo observación no presentaron ningún signo clínico, dándonos a conocer que el extracto a dicha dosis administrada no es tóxico. Lo que se pudo confirmar al realizarles la necropsia donde sus órganos no presentaron ninguna anomalía. El incremento de peso corporal observado estadísticamente es normal, la cual se relaciona con el consumo diario de alimentos. OBSERVACIONES Durante las observaciones realizadas a las tres ratas durante los 14 días consecutivos no se reportó ningún cambio en su comportamiento, ni clínico. Sin embargo su peso aumentó durante aquel periodo, siendo esto un aspecto normal. CONCLUSIONES El extracto de moringa a una dosis de 300mg/Kg administrada a una dosis única por vía oral a tres ratas de bioterio se la puede clasificar como no tóxica, debido que en el ensayo no se produjeron muertes ni signos tóxicos posteriores a la administración. En la necropsia no se constató ninguna alteración de los órganos y tejidos examinados. RECOMENDACIONES Tomar las medidas de precaución respectivas al realizar la práctica, utilizando los materiales e implementos necesarios para evitar cualquier tipo de accidente o intoxicación. Desarrollar el ensayo conforme a los esquemas determinados. Registrar cada signo observado en las ratas durante el periodo de tiempo establecido. Machala 25 de Enero del 2014 FIRMA Cynthia Ortega
- 6. TOXICIDAD AGUDA ORAL La toxicidad aguda describe los efectos adversos que son el resultado de una sola exposición a una sustancia, por esto difiere de la toxicidad crónica que describe la acción tóxica de la sustancia en exposiciones repetidas en un periodo de tiempo más largo (meses a años). Por la vía oral, se usan tres ensayos en animales: La dosis fija, clase tóxica aguda y los métodos arriba/abajo usan menos animales, aunque con efectos tóxicos similares y algunas muertes ocurren. Existen dos modos principales a través de los cuales pueden ejercer los productos químicos su toxicidad. Los efectos locales tienen lugar en la zona del cuerpo que ha estado en contacto con el producto. Así ocurren las quemaduras provocadas por ácidos o los daños pulmonares por inhalación de gases reactivos.2 Los efectos sistémicos tienen lugar después o una vez que el producto se ha absorbido y distribuido desde el punto por el que penetró hasta otras zonas del organismo. Casi todos los compuestos causan efectos sistémicos, aunque algunos pueden causar ambos. Tal es el caso del aditivo tetraetilo de plomo para gasolinas, que provoca efectos cutáneos en la zona de contacto y por otra parte, se absorbe y causa efectos característicos sobre el sistema nervioso central y en otros órganos. La frecuencia de exposición se refiere al número o el tiempo en el cual una persona u animal es expuesta y el tiempo entre las exposiciones. Típicamente las exposiciones pueden ser clasificadas según la duración de la exposición. La duración de la exposición puede ser aguda, subcrónica o crónica. En la actualidad, la toxicología alcanza enorme trascendencia social debido al importante número de sustancias químicas comercializadas y su posible impacto sobre la salud pública y ambiental. Ello ha conducido al desarrollo de estrategias de evaluación de riesgos con fines normativos: es el caso de la llamada "toxicología reguladora". Por ende es de vital importancia que los profesionales en esta rama de la toxicología experimental conozcan los métodos abreviados que existen hoy en el mundo para evaluar la toxicidad aguda de un producto, las cuales en su momento se crearon para cumplir con el principio de las 3 “R” (reducción, refinamiento y reemplazo), y de esta forma trata de utilizar la menor cantidad de animales posibles y que la muerte no fuese el objetivo fundamental de este tipo de investigación sino la aparición de la llamada toxicidad evidente o signos y síntomas de toxicidad como criterio de punto final (endpoint) de su protocolo de trabajo investigativo. Para lo cual nos trazamos como objetivo de este trabajo dar algunas consideraciones actualizadas sobre la determinación de la toxicidad aguda de una sustancia, Para lo cual incluimos los tipos de datos, tipos de daños causados por los materiales tóxicos, objetivos de
- 7. la toxicidad aguda, su importancia, clasificación de las evaluaciones agudas, efectos tóxicos generales, determinación de la dosis letal media (DL50), principio de las 3 “R”, métodos clásicos y alternativos y por último como se debe medir la toxicidad aguda de una sustancia. La toxicidad aguda se refiere al desarrollo rápido de síntomas y efectos después de la aplicación de dosis única relativamente altas o daños inmediatos generados por dosis únicas suficientemente grandes. Un solo compuesto puede generar efectos tóxicos agudos y " crónicos estos dependen de la dosis y duración a la exposición. La observación de los animales se lleva a cabo después de la administración de la sustancia y dura hasta 14 días, después de los cuales los animales son sacrificados y autopsiados.6 En general el estudio se realizaba con 5 grupos o 5 niveles de dosis del producto a administrar, de 10 animales por sexo, pero en nuestros días existen algunos métodos abreviados ya aceptados, que intentan reducir el número de animales a sacrificar. En estos estudios se tienen en cuenta la dosificación la cual incluye dosis, frecuencia y duración de la administración. Para que las predicciones sean de interés, es necesario contar con cierta información sobre los aspectos siguientes: El compuesto y sus propiedades físicas y químicas. El organismo afectado. Los efectos o la respuesta que el compuesto causa. La exposición (dosis, tiempo, situación). En toxicología existen dos tipos de datos: Datos Cuánticos: 1. Mortalidad. 2. Incidencia de signos fármaco-tóxicos. Datos Graduados: 1. Peso corporal. 2. Consumo de alimento.
- 8. Evaluación de signos y síntomas de toxicidad, reflejos y otros WEBGRAFÍAS http://www.sertox.com.ar/img/item_full/22001.pdf Goodman J.L. The traditional toxicologic paradigm is correct: Dose influences mechanism. Environ. Health Persp 1998; 106(1):285-288.