Tatiana Zamora

1. ANÁLISIS INSTRUMENTAL
SESIÓN 2
CROMATOGRAMA Y PARÁMETROS
CROMATOGRÁFICOS
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE QUÍMICAY FARMACIA
Dra. Tatiana Zamora Z.
Docente de la asignatura

2. UNIDAD 1
• Cromatograma.
• Parámetros cromatográficos.
• Eficacia de la separación.
CONTENIDO DE LA SESIÓN
• Analizar el fundamento de las técnicas de
separación cromatográfica para el desarrollo y
optimización de métodos analíticos de
separación.
OBJETIVO DE LA UNIDAD

3. CROMATOGRAMA
tM
 LÍNEA DE BASE
 PICO
 ALTURA DE PICO
 ANCHURA DE PICO (W)
 ANCHURA DE PICO EN LA
SEMIALTURA
 ÁREA DE PICO
 TIEMPO DE RETENCIÓN
(TR)
 TIEMPO MUERTO (TM)
 VOLUMEN DE RETENCIÓN
(VR)
 FACTOR DE CAPACIDAD
(K´)
 RETENCIÓN RELATIVA ()
 RESOLUCIÓN ENTRE PICOS
(R)
Dra. Tatiana Zamora Z.
tR
 Gráfico que representa la respuesta del detector en función del tiempo
de elución.
 Parametriza la forma, la posición y la resolución de las bandas de una

4. PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS
Tiempo de retención
ajustado:
t´r = tr - tm
Factor de
separación o
Retención
relativa:

=
t´r1
t´r2
 >1
Factor de
capacidad o
factor de
retención:
k´
=
tm
tr -
tm
Dra. Tatiana Zamora Z.
 LÍNEA DE BASE
 PICO
 ALTURA DE PICO
 ANCHURA DE PICO (W)
 ANCHURA DE PICO EN LA
SEMIALTURA
 ÁREA DE PICO
 TIEMPO DE RETENCIÓN
(TR)
 TIEMPO MUERTO (TM)
 VOLUMEN DE RETENCIÓN
(VR)
 RETENCIÓN RELATIVA ()
 FACTOR DE CAPACIDAD
(K´)
 RESOLUCIÓN ENTRE PICOS
(R)
R =
tr2 – tr1
½(w2 + w1)
Resolución entre
picos
cromatográficos:

5. • PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS
EJERCICIO:
Se inyecta en un cromatógrafo de gases una mezcla de benceno, tolueno y
metano.
El metano da un pico a los 42 segundos, mientras que el benceno se eluye
a 251 segundos y el tolueno a 333 segundos. Hallar los tiempos de
retención ajustados y los factores de capacidad de cada compuesto. Así
también, hallar las retenciones relativas del benceno y tolueno.
Tiempo de retención ajustado: t´r = tr - tm
Benceno: t´r = 251 – 42 = 209 s
Tolueno: t´r = 333 – 42 = 291 s
Factor de capacidad:
Benceno: k´ = 251 – 42 / 42 = 5,0
Tolueno: k´ = 333 – 42 / 42 = 6,9
Retención relativa:
k´ =
tm
tr - tm
 =
t´r1
t´r2 tolueno
benceno
 =
251 - 42
333 - 42
=
1,39
SOLUCIÓN
Dra. Tatiana Zamora Z.

6. • PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS
EJERCICIO:
Un pico con tr 407s tiene una anchura de base de 13 s. Otro pico ´próximo se
eluye a 424 s, con una anchura de 16 s. Hallar la resolución de los dos
compuestos respectivamente.
SOLUCIÓN:
Resolución =
tr
Wpr
424 - 407
½ (13 + 16)
= 1,17
R =
tr2 – tr1
½(w2 + w1)
Dra. Tatiana Zamora Z.

7. EFICACIA DE LA SEPARACIÓN
 RESOLUCIÓN
Cuanto más tiempo pasa el soluto en la columna más ancha
se hace la banda
Resolución = =
tr
Wpr
Vr
Wpr
 Wpr promedio de las
anchuras de picos en
las unidades
correspondientes
Resolución =
Separación de picos
Ancho medio de pico
R =
tr2 – tr1
½(W2 + W1)
Dra. Tatiana Zamora Z.

8. EFICACIA DE LA SEPARACIÓN
Formas de medición de la anchura de
banda:
1. La anchura w1/2 medida a una altura
igual a la mitad de la altura del pico, y
2. La anchura de la base w, medida entre
los cortes de las tangentes trazadas en
las porciones de mayor pendiente de la
curva.
• A partir de la ecuación de un pico
gaussiano se muestra que w1/2 = 2,35 σ
y w = 4σ.
w1/2 = 2,35 σ
w = 4 σ
Resolución 
1,5
Dra. Tatiana Zamora Z.
 RESOLUCIÓN

9. EFICACIA DE LA SEPARACIÓN
PROBLEMAS DE INTEGRACIÓN
Dra. Tatiana Zamora Z.
 RESOLUCIÓN

10. EFICACIA DE LA SEPARACIÓN
 NÚMERO DE PLATOS TEÓRICOS
 Diferencia de tiempos de elución
 Cuanto más distantes, mayor será la
separación
 Anchura de los picos
 Cuanto más anchos sean los picos, peor
será la separación
EFICACIA CROMATOGRÁFICA (N)
PARÁMETRO QUE CUANTIFICA LA
PREFERENCIA POR LAS BANDAS
ESTRECHAS
2 factores que
determinan el grado
de separación de los
componentes
N = 16
tr
W
2
N = 5,55
tr
W½
2
Dra. Tatiana Zamora Z.

11. EFICACIA DE LA SEPARACIÓN
Diferencia entre Eficacia (N) y Resolución (R)
 La RESOLUCIÓN o grado de separación obtenida; se determina por la elección de
la fase estacionaria, la fase móvil, la temperatura y la longitud de la fase
estacionaria a través de la cual se produce la separación.
 La EFICACIA es una medida de la dispersión de las bandas; está determinada por
factores como la construcción y empaquetamiento de la columna y la velocidad de
la fase móvil.
Medida de la Eficacia de la Columna
Eficacia: NÚMERO DE PLATOS
TEÓRICOS
ALTURA DE PLATOS TEÓRICOS
Es la constante de proporcionalidad entre varianza (2) de la banda y la distancia que ha
recorrido (x). También denominada Altura Equivalente de Platos Teóricos (AEPT). Relaciona
anchura de una banda con la distancia que ha recorrido a través de la columna.
N = 16
tr
W
2
H = =
2
x
L
N
Dra. Tatiana Zamora Z.

12. • EFICACIA DE LA SEPARACIÓN
EJERCICIO:
Un pico con tr 407s tiene una anchura de base de 13s. Otro pico próximo se
eluye a 424s, con una anchura de 16s. Hallar la resolución de los dos
compuestos respectivamente.
SOLUCIÓN:
16 · 4072
132
= 1,57 x 104
N =
H =
L
N
N = 16
tr
W
2
H = = 0,78 mm
12,2 cm
1,57 x 104
Cuanto más pequeño es
el valor de AEPT, el
sistema cromatográfico
es mejor
Pequeña altura de plato
ocasiona picos estrechos
y esto ocasiona mejores
separaciones.
Dra. Tatiana Zamora Z.

13. CONCLUSIONES
En resumen…
• CONSTANTE DE
REPARTO:
• FACTOR DE
RETENCIÓN
(FACTOR DE
CAPACIDAD):
• FACTOR DE
SEPARACIÓN
(FACTOR DE
SELECTIVIDAD):
K=
Cs
Cm
MIDE LA DISTRIBUCIÓN DEL
ANALITRO ENTRE LA F.E. Y LA F.M.
k´ = tm
tr - tm DESCRIBE LA VELOCIDAD DE
MIGRACIÓN DEL ANALITO EN LA
COLUMNA
 =
t´r1
t´r2 MIDE LA SELECTIVIDAD DE LA
COLUMNA DE UN ANALITO
RESPECTO A OTRO
Dra. Tatiana Zamora Z.

14. CONCLUSIONES
Dra. Tatiana Zamora Z.
En resumen…

15. BIBLIOGRAFÍA
RECOMENDADA
 Skoog, D. A. (2008), Principios del Análisis
Instrumental, Cengage Learning Editores,
México.
• Pag 765-771
 Harris, D. A. (2008), Principios del Análisis
Instrumental, Cengage Learning Editores,
México.
• Pag 765-771
Dra. Tatiana Zamora Z.