2. CITOGENETICA MOLECULAR
Se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para
hibridizarse entre sí.
Permite la detección y localización de secuencias específicas de ADN.
3. CITOGENÉTICA MOLECULAR
Biología molecular y citogenética.
Utilización de una serie de técnicas del estilo de hibridación
por fluorescencia in situ (FISH).
4. FISH
Método Directo: Utiliza nucleótidos marcados con
sustancias fluorescentes puede observarse la señal
inmediatamente después del FISH al microscopio de
fluorescencia.
Método Indirecto: Utilizan sondas unidas a moléculas
como la biotina o digoxigenina marcadas con sondas
fluorescentes que permiten su observación al
microscopio de fluorescencia. Hay una amplia variedad
de sondas comerciales y tambien pueden fabricarse con
la técnica “nick translation
9. - Reconoce 2 - 3% secuencias
centromericas.
- Detección de cromosomas
concretos
- Anormalidades numéricas
-
Secuencia especifica del ADN:
LOCUS DETERMINADO
- Reordenamiento estructurales
- Anormalidades estructurales
Detección de cromosomas
concretos
Anormalidades numéricas
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14. TECNICA DE FISH
PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA
PREPARACION DE LAS PLACAS
PREPARACION DE LAS SONDAS
HIBRIDACION
LAVADOS POST-HIBRIDACION
DETECCION
TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o
DAPI)
VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)
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20. PCR
Técnica que permite la amplificación in vitro de una
secuencia específica de ADN hasta generar millones de
copias de una manera rápida y sencilla
Permite analizar muestras con cantidades mínimas de
ADN
21. FASES DE AMPLIFICACIÓN DE PCR
Separar las hebras molde para la síntesis de
nuevas hebras
“Aparear” primers a la hebra molde para dirigir
la síntesis de DNA .
La síntesis de DNA requiere de primers para
comenzar.
Adición de nucleótidos, uno a la vez, para extender la
hebra de DNA (extremo 3’) utilizando a la hebra
madre como molde
A partir de este ciclo, se empieza a acumular, de
forma exponencial, la secuencia diana de ADN
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24. Sondas marcadas
fluorescentemente son para
cada cromosoma hechas
para marcar DNA específico
de cada cromosoma con
diferentes fluoróforos.
La diferencia espectral generada por el
etiquetado combinatorio son capturadas y
analizadas usando un interferómetro agregado a
un microscopio de fluorescencia.
El programa de procesamiento de imágenes
entonces asigna un pseudocolor a cada
combinación espectralmente diferente,
permitiendo la visualización de cromosomas
coloreados.
