104140922 guia-de-practicas-de-analisis-clinicos-i

3B-2
GUÍA DE PRÁCTICA
Unidad académica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ANÁLISIS CLÍNICOS I
Autor: Dr. Juan Manuel Parreño Tipian
F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

INTRODUCCIÓN
El laboratorio clínico dispone de los métodos de análisis clínicos, que estudia los diversos procesos
utilizados en la exploración clínica y hace la interpretación bioquímica y patológica de los
resultados.
Por su amplitud y por la evolución vertiginosa de especialización se ha dividido en: hematología,
inmunohematología, bioquímica clínica, microbiología clínica, parasitología clínica y líquidos
biológicos. Es por ello que para fines didácticos se desarrollará dichos campos en los 2 semestres
académicos que corresponden a los análisis clínicos I y II.

I. PRÁCTICA No. 1: TOMA DE MUESTRA PARA LOS DIVERSOS LÍQUIDOS
BIOLÓGICOS. SANGRE TOTAL, SUERO, PLASMA, SANGRE DESFIBRINADA.
RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES EN SANGRE FRESCA Y
COLOREADA. RESISTENCIA GLOBULAR
1.1 Marco Teórico
La toma de muestra de sangre o de cualquier fluido biológico tiene importancia en la
buena determinación de los análisis clínicos ya que constituyen el primer paso en todo el
proceso dependiendo de una serie de factores. El reconocimiento de los elementos
formes nos informa acerca de las características y diferenciaciones en una muestra de
sangre fresca y sangre coloreada.
Líquidos Biológicos:
1. Sangre
2. Orina
3. Esputo
4. Jugo Gástrico
5. Contenido Duodenal
6. Líquido Cefalorraquídeo
7. Liquido sinovial
8. Lìquidos serosos (pleural, peritoneal, articular)
9. Líquido amniótico y seminal
10. Heces
Las determinaciones hematológicas y bioquímicas pueden realizarse en sangre total, suero
o plasma.
1.2 Competencias
1.-Distingue los diversos métodos para la toma de muestra de los diversos líquidos
biológicos
2. Explica las diferencias entre los líquidos de sangre total, plasma y suero sanguíneo.
3. Identifica los diversos elementos formes
4. Diferencia los elementos formes en sangre fresca y coloreada.
1.3 Materiales y Equipos
 Materiales
1. Agujas descartables 20 G x 1 ½
2. Algodón
3. Alcohol
4. Tubos de ensayo
5. Viales con anticoagulantes
6. Perlas de vidrio
7. Matraz
8. Pipetas

 Reactivos
a. Anticoagulantes:
De Wintrobe:
Oxalato de Amonio ------ 1.2 gr.
Oxalato de Potasio ------ 0.8 gr.
Agua destilada ------ 100 mL.
Formol al 40% ------ 1 mL.
Haskins Trotman: Oxalato de potasio al 2%
Citrato Trisódico al 3.8%
Oxalato de Sodio al 1.34%
Heparina al 0,75%
EDTA
1.4 Procedimiento
A. Toma de muestra.
SANGRE VENOSA:
1. El paciente permanecerá sentado con el brazo extendido reposando sobre la mesa
apoyado sobre una almohadilla.
2. Se colocará una ligadura de goma a unos 7 cm. por encima del codo, teniendo la
precaución de no comprimir fuertemente. Esta ligadura colocada más de 2' provoca una
hemoconcentración con acumulaciones subproductos metabólicos.
Se elige la vena más prominente sobre la superficie de flexión del codo (VENA MEDIANA
CEFALICA)
3. Se desinfecta la región con una torunda de algodón empapada al alcohol yodado.
4. Se atraviesa la piel con la aguja manteniendo el bisel hacia arriba directamente sobre
la vena penetrando en ella.
5. Una vez lograda la cantidad de sangre necesaria se afloja la ligadura mientras la aguja
permanece aun en la vena.
6. Se saca la aguja y se aplica una torunda ligeramente humedecida en alcohol
flexionando el codo.
7. Para efectuar los frotises se tomará una gota de sangre tomada directamente de la
aguja antes de mezclarla con el anticoagulante sobre para objetos desengrasados y secos.
En niños que no son muy palpables las venas se tomará la sangre de la vena yugular.
SANGRE CAPILAR:
Se obtiene por punción cutánea y se utiliza cuando se requieren pequeñas cantidades de
sangre.
Debe utilizarse una lanceta
En la yema del dedo. En los niños en el lóbulo de la oreja o bien en el talón dilatado y la
sangre fluya espontáneamente.
Obtener los siguientes componentes:
1. SANGRE TOTAL Y PLASMA
En une vial con anticoagulante colocar 5 ml. de sangre, Mezclar Colocar en un tubo de
ensayo y centrifugar 10 minutos a 1500 rpm.

2. SUERO
En un tubo de ensayo colocar 5 mL. de sangre
Centrifugar 10 minutos a 1500 rpm.
3. SANGRE DESFIBRINADA
En un vaso pequeño o matraz que contiene perlas de vidrio, colocar 3 a 5 mL. de
sangre sin anticoagulante. Se agita durante 15 minutos. La FIBRINA se deposita sobre
estos cuerpos en forma de filamentos elásticos y blancos.
El líquido que queda se denomina sangre desfibrinada y está constituida por suero y
glóbulos que se puede confirmar por centrifugación.
La fibrina es de color blanco y se observa lavando con agua destilada.
RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES:
a. EN MUESTRA FRESCA
b. EN MUESTRA COLOREADA
1. Colocar 1 gota de sangre en un porta-objeto se coloca un cubreobjeto y observar.
Elementos de forma discoidea de color amarillo: eritrocitos unidos formando pilas por
el fenómeno de la tensión superficial, estos discos se observan de color rosado.
Elementos transparentes e incoloros: Leucocitos.
Plaquetas: no se visualizan por ser muy pequeños.
Tamaño: eritrocitos: 7.2 u
leucocitos: 5 a 20 u
plaquetas: 2 a 4 u
2. Otro portaobjeto: 1 gota en uno de los extremos y con otro portaobjeto haciendo un
ángulo de 45 grados hacer un frotis. Secar al medio ambiente.
Se lleva a colorear con colorante Wright: con 10 a 12 gotas cubriendo el frotis. Mezclar
soplando por 30 segundos.
Se adhiere agua destilada, nuevamente se sopla mezclando.
Dejar en reposo por 10 minutos.
Lavar con agua de caño escurrir la lámina en forma vertical.
Una vez seco se coloca 1 gota de aceite de cedro, elevar el condensador y observa con
objetivo de inmersión.
Se observa: Eritrocitos en forma discoidea con un halo en la parte central
Leucocitos: Mononucleares: Monocito 16 a 22 u
Linfocito 7 a 10 u
Polimorfonucleares: Neutrofilos, Eosinófilos, Basófilos: 9 a 12 u
1.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
1.6 Cuestionario
1. ¿Qué diferencia encuentra Ud. entre sangre capilar, sangre venosa y sangre arterial?
2. ¿Cómo se obtiene la sangre desfibrinada?
3. ¿Cuál es la composición química del anticoagulante de Wintrobe y como actua en la
sangre evitando la coagulación de la misma?
4. ¿Qué diferencias existen entre suero y plasma?
5. ¿Cómo se observan los elementos formes en sangre fresca y sangre coloreada? Dibuje
utilizando colores.

1.7 Fuentes de información
1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A; 2001.
2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3a ed. Buenos
Aires: El ateneo; 1985.
3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patología estructural y funcional. 6a
ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999.
4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana;
1999.

II. PRÁCTICA No.2: HEMATIMETRIA. RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.DOSAJE
DE HEMOGLOBINA.
A. HEMATIMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.
2.1 Marco teórico
La hematimetría es un método para contar los glóbulos rojos de la sangre. La hemoglobina
es una proteína que se encuentra en el interior de estos elementos y su función fundamental
es la de transportar el O2 y el CO2.
El concepto de anemia descansa sobre la determinación de estos componentes. Estas pruebas
se realizan habitualmente como parte del hemograma completo.
2.2 Competencias
1. Reconoce la cámara de Neubauer y los campos donde se efectúan los contajes
correspondientes de los elementos formes.
2. Opera con destreza el proceso del recuento de glóbulos rojos.
2.3 Materiales y equipos
 Materiales
Camara de Neubauer
Pipeta de Thoma para glóbulos rojos
 Reactivos
LIQUIDO DE DILUCIÓN:
Las más conocidas son las de HAYEM, GOWER y MARCANO
SOLUCIÓN DE GOWER:
Sulfato de Sodio ........ 12.5 gr.
Cloruro de Sodio ......... 1 g.
Bicloruro de Mercurio..... 0,5 g.
Agua destilada csp ....... 200 ml.
2.4 Procedimiento
1. Aspirar sangre hasta 0.5 ó 1 según la dilución 1 en 200 ó 1 en 100.
2. La sangre que moja la superficie externa de la pipeta se limpia rápidamente con papel
especial o con gasa.
3. Si la sangre pasa la marca de 0.5 ó 1 se retira por capilaridad tocando la punta de la pipeta
con gasa o algodón.
4. Completar con el líquido de dilución hasta la marca de 1.1.
5. Mientras se aspira el líquido de dilución, se hace girar la pipeta entre el pulgar y el índice
de la mano derecha.
6. Retirando la boquilla se imprimen movimientos durante 1 ó 2 minutos.
7. Desechar las primeras gotas y sin perdida de tiempo tocar con una gota pequeña el borde
de la superficie pulimentada en que están en contacto la cuadricular de la cámara y el
portaobjeto.

8. Esta gota se insinúa por debajo del cubreobjeto por capilaridad.
9. La suspensión no debe escurrirse en los surcos laterales ni debe formarse burbujas de aire.
10. Dejar transcurrir 3 minutos para que se depositen los glóbulos.
11. Llevar la cámara a la platina del microscopio. Iluminar bien. Comprobar si hay uniforme
distribución de hematíes.
12. Efectuar el recuento con el objetivo de gran aumento, manteniendo el condensador bajo
y el diafragma parcialmente cerrado, nunca se tocara el cubreobjeto con la lente, ello
induce a groseros errores al modificar la posición de los corpúsculos.
Para evitar toda confusión al contar los glóbulos, se incluyen los hematíes que tocan las líneas
divisorias izquierda y superior como i estuviera dentro de los cuadrados, los que tocan los
lados derecho e inferior no se toman en cuenta.
No debe haber diferencia de más de 18 unidades de número de glóbulos rojos entre los 5
cuadrados.
Cálculos:
Con la dilución al 1 en 200 contar los glóbulos comprendidos en 5 grupos de 16 luego se aplica
la siguiente fórmula: (Cálculo razonado)
N x 10 x 200 x 400
------------------------- = Hematíes por mm3 de sangre.
80
De donde:
N: número total de hematíes en 80 cuadraditos.
10: altura de la cámara. Para referir a 1mm3 de sangre diluida.
200: dilución de la pipeta para referir al 1 m3 de sangre sin diluir.
400: número total de cuadraditos.
80: para referir al número de cuadraditos en el que se ha llevado acabo el recuento.
O también: los glóbulos rojos de los 5 cuadrados se le agregan 4 ceros
Cifras normales:
En estado de salud existe aproximadamente 5’000,000 de hematíes por mm3
de sangre.
El número es un poca menor en las mujeres 4’500,000 por mm3
.
Interpretación:
La disminución de hematíes se denomina ANEMIA u OLIGOCITEMIA y se da también en
leucemia y después de hemorragias.
El aumento se denomina POLICITEMIA o POLIGLOBULIA.
Hay poliglobulia en el recién nacido hasta 7!000,000 y va descendiendo gradualmente
para llegar al del adulto hacia los 15 años.
La policitemia carece de importancia y en patología es infrecuente.
2.5 Resultados
2.6 Cuestionario
1.¿Cuál es el fundamento del proceso de la hematimetria?
2.¿Cuál es la composición química de los líquidos de dilución utilizados en hematimetría?
3.Explique mediante un esquema el reticulo de Thoma
4.Explique la fórmula utilizada en el recuento de glóbulos rojos.

1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray
Masson S.A; 2001.
2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3a
ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985.
3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patología estructural
y funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999.
4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires:
Interamericana; 1999.
B. DOSAJE DE HEMOGLOBINA
2.1 Marco teórico
La Hemoglobina es una molécula formada por 2 estructuras el grupo Hemo y la Globina.
Todas las moléculas de Hb se encuentran en el interior de los glóbulos rojos y su función
fundamental es la de transportar el O2 y el CO2.
La determinación de Hb en sangre es un parámetro que nos ayuda en el diagnóstico de una
anemia.
2.2 Competencias
1. Explica bioquímicamente el proceso para la determinación de la hemoglobina.
2. Determina en el laboratorio el dosaje de hemoglobina.
 Materiales
Pipeta de Sahli
Tubos de ensayos
 Equipos
Espectrofotometro
 Reactivos
a. REACTIVO DE DRABKIN:
o Bicarbonato de Sodio 1 gr.
o Cianuro de Potasio 50 mg.
o Ferricianuro de potasio 200 mg.
o Agua destilada csp 1000ml.
o Guardar en frasco oscuro, la solución de es de color amarillo pálido. Es un reactivo
tóxico.
b. SOLUCIÓN STANDARD:
o Solución de cianometahemoglobina titulada según las recomendaciones del Comité
Internacional para Estandarizar de Hematología. Contiene preservantes.
2.4 Procedimiento
METODO DE LA CIANOMETAHEMOGLOBINA:
1. Rotular dos tubos con Problema y banco. Deben estar bien secos.

2. Agregar a cada uno de ellos 5ml de reactivo de Drabkin.
3. Adicionar al tubo Problema con la Pipeta de Sahlí 20µl de sangre (capilar o venosa)
4. Mezclar y dejar en reposo por espacio de 10 minutos.
5. Realizar la lectura del tubo Problema ajustando el instrumento a 0 de densidad óptica o
el tubo Blanco.
6. La lectura obtenida llevar a la curva de calibración o multiplicar por el factor para hallar
la concentración de hemoglobina.
7. Leer al espectrofotómetro con filtro verde ó 540 nm.
CALCULOS:
FACTOR= 15 / Absorbancia del Standard
Hb (g/100ml) = Absorbancia de la muestra x FACTOR
FACTOR DE CALIBRACION:
Se sigue el siguiente cuadro:
TUBO# STANDARD SOL. DRABKIN CONCENTRACIÓN
(mL) (mL) (gr %)
1 6.0 0.0 20
2 4.5 1.5 15
3 3.0 3.0 10
4 1.5 4.5 5
Blanco 0.0 6.0 0
El quinto tubo sirve para llegar a 0 con el espectrofotómetro. Aplicando la fórmula de
concentración sobre lectura para cada tubo y sacando el promedio tenemos el factor % en
vista de que el standard viene en g %.
SE realizan 4 divisiones y luego se obtiene el factor promedio, que en este caso es factor por
100.
VALORES NORMALES:
Nacimiento 14 - 24 g/100 mL
3 meses 10.5 - 14.5 g/100 mL
Adulto sexo femenino 12-16 g/100 mL
sexo masculino 14-18 g/100 mL
INTERPRETACIÓN:
AUMENTO: hipercromemia: niños recién nacidos, personas que viven en altura, procesos
hematopoyéticos.
DISMINUCION: Hipocromemia u oligocromemia: anemias
2.5 Resultados
2.6 Cuestionario
1. Explique el fundamento del dosaje de Hemoglobina
2. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de la hemoglobina?
3. ¿Cómo se puede hallar el valor del hematocrito a partir de la determinación de la

hemoglobina?
1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 7ª ed. Buenos Aires: Panamericana; 1997.
2. Gradwhol. Métodos y diagnóstico del laboratorio clínico. 8ª ed. Buenos Aires: Médica
Panamericana; 1986.
3. Guerci A. Laboratorio. Métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3ª ed. Buenos
Aires: Librería El Ateneo; 1985.
4. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México DF: Manual Moderno
S.A.; 1986.

III. PRÁCTICA No. 3: VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR.
HEMATOCRITO. MICROHEMATOCRITO
A. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR
3.1 Marco teórico
Prueba de laboratorio inespecífico importante para evaluar el curso de una enfermedad; es
inespecífico porque no sirve para el diagnóstico etiológico de una enfermedad.
Esta sencilla prueba es utilizada como índice de la presencia activa de enfermedades diversas
3.2 Competencias
1. Utiliza con precisión el tubo de Wintrobe para la lectura del hematocrito y la
eritrosedimentación.
2. Realiza la lectura de la velocidad de sedimentación utilizando la escala adecuada.
 Materiales
Tubo de Wintrobe
 Reactivos
Anticoagulante de Wintrobe
3.4 Procedimiento
A. METODO DE WINTROBE Y LANDSBERG
La eritrosedimentación se determina con el tubo de Wintrobe en la siguiente forma:
Recoger 5 mL. de sangre con anticoagulante.
Llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca "O" de sangre utilizando la pipeta de Wright y
antes de que la muestra tenga más de dos horas de extraída.
Mantener el tubo en posición vertical tapar con un capuchón de goma y esperar UNA HORA
para hacer una sola lectura o con intervalos frecuentes para expresar en gráficas.
VALORES NORMALES:
Hombre: 1 - 11 mm
Mujeres 1 - 15 mm
Determinada la velocidad de sedimentación puede centrifugarse a 3000 rpm durante 30
minutos para comprobar el volumen globular.
En esta forma se corrige la eritrosedimentación si existen alteraciones ocasionadas por
anemia.
En el mismo tubo puede medirse el volumen de leucocitos, plaquetas y el índice ictérico.
B. METODO DE CUTLER
Se emplea el tubo de sedimentación de Cutler que tiene 1 ml. de capacidad, 5mm de
diámetro interno y está graduado en 40 divisiones con el "O" a nivel del "Y que representan
milímetros.
Procedimiento:
Llenar el tubo con sangre con anticoagulante. Colocar en posición vertical y hacer la
lectura a la hora, cada 5 minutos para construir la gráfica.

Es mejor trabajar con sangre citratada en la siguiente forma:
Con una jeringa de 2 mL. aspirar 0.1 mL. de solución de citrato de sodio al 3.8 g % y
completar a 1 mL con sangre venosa.
Mezclar llenar el tubo de Cutler, tapar con un tapón de goma y mantener en posición
vertical.
En el nuevo tubo modificado de Cutler, se deposita 0.5 ml de anticoagulante citrato de
sodio 3.8% y se completa a 5ml con sangre venosa en la marca "O". la cantidad insuficiente
de citrato aumenta la VSG y un exceso disminuye o retarda.
Valores normales:
Las cifras normales a la hora de lectura son de:
2 - 10 mm para mujeres
2 8 mm para hombres.
Estas cifras deben estar en líneas casi horizontal cuando se gráfica a intervalos de 5
minutos.
El carácter de la curva en estado patológico se interpreta según su forma:
Si la línea es diagonal, apartándose ligeramente de la curva normal, indica proceso leve o
en quietud.
Cuando la curva sigue diagonal con gran descenso indica estado morboso activo o recaídas
de mucho cuidado.
Si la curva es caso vertical se trata de una enfermedad muy grave.
Se debe indicar el método, tiempo en minutos, índice de sedimentación en mm y el
carácter de la gráfica.
INTERPRETACION CLINICA:
Prescindiendo del embarazo, la determinación de la VSG.
Está aumentada en los estados patológicos mas dispares, sin ser esto específico de ninguno
en particular.
La VSG aumenta sobre todo, cuando existe un foco inflamatorio en estrecha conexión con
el árbol vascular; por ello son especialmente aceleradores los focos vecinos a las serosas
(Infarto al miocardio, focos pulmonares, etc.)
Todas las infecciones generales de cierta intensidad, salvo raras excepciones evolucionan
con VSG aumenta principalmente cuando coinciden los períodos de fiebre y anemia.
En las inflamaciones locales agudas (por ej. apendicitis) la velocidad no esta alterada,
sobre todo en las fases iniciales.
Las neoplasias malignas al principio no modifican la eritrosedimentación, pero si la
aceleran cuando hay lísis de los tejidos derivados de la proliferación neoplásica.
La VSG está más o menos aumentada en todos los tipos de anemias. En el curso del
embarazo la VSG se acelera, debido a una hemodilución de la sangre circulante.
En la mujer normal la menstruación produce variaciones muy ligeras de la velocidad.
Por último los focos sépticos muy aislados del torrente sanguíneo (caries dentarias,
sinusitis, amigdalitis crípticas) apenas aumentan la VSG.
3.5 Resultados
3.6 Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de la velocidad de sedimentación?
2.- ¿Qué diferencias existen en la utilización de los diversos métodos para determinar la
eritrosedimentación?

3.- ¿Cuál es la importancia clínica de la velocidad de sedimentación?
4. ¿Por qué la diferencia de valores en la eritrosedimentación en varones y en mujeres?
4. 4.Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana;
1999.
B. HEMATOCRITO Y MICROHEMATOCRITO
3.1 Marco teórico
El hematocrito es otra de las pruebas de laboratorio que ayuda en el diagnóstico de las
anemias corroborando los otros parámetros como el recuento de glóbulos rojos y la
hemoglobina.
3.2 Competencias
1.- Determina los valores del hematocrito por el método correspondiente.
2.- Realiza el procedimiento en el laboratorio del hematocrito.
 Materiales
Tubo de Wintrobe
Equipos
Centrifuga para capilares
 Reactivos
3.4 Procedimiento
A. Toma de muestra.
 SANGRE VENOSA:
La Sangre venosa obtenida y que se encuentra mezclada con el anticoagulante de
Wintrobe llenar con la pipeta capilar el tubo de Hematocrito hasta la marca 10.
Centrifuga a 3,000 rpm durante 30 minutos.
Cálculos:
Para calcular el Hc la altura de la columna de hematíes sedimentados dado en mm se
multiplica por 10.
Valores normales:
Mujeres: 42 mL%
Hombres: 45 mL%

Interpretación
Están disminuidas en las anemias, en los casos de hemodilución tales como la hidremia
fisiológica (exceso de agua en la sangre) del embarazo.
Es alto en las poliglobulias genuina a una hemoconcentración debida a considerables
perdida de agua como en la deshidratación, quemaduras y schock.
SANGRE CAPILAR:
MICROHEMATOCRITO:
En pediatría se esta difundiendo el uso del microhematocrito que utiliza sangre
obtenida por punción digital.
Se emplea el método DE GUEST-WICHSEBAUN: se llena con sangre capilar.
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos capilares de 7 cm de largo por 1mm de diámetro interior cubiertos interiormente
con heparina al 1/1000 se tapona con arcilla moldeable (plastilina).
PROCEDIMIENTO:
1. Se llena con sangre por capilaridad las tres cuartas partes del capilar.
2. Centrifugar y leer sobre los normogramas que viene en cada equipo.
Cuando no se dispone de centrifugadora de microhematocrito se pone el tubo dentro de
un tubo de ensayo y se centrifuga por 10 minutos a 2000 rpm. Luego se aplica la
siguiente formula:
a
- x 100 = ml%
b
a= longitud de la columna roja en ml
b= longitud total de sangre que llena el tubo capilar
100= para referirse al Hc en ml%
3.5 Resultados
3.6 Cuestionario
1. ¿Qué diferencias en los valores se pueden dar entre el microhematocrito y el hematocrito
de Wintrobe?
2. ¿Qué diferencias existen entre la eritrosedimentación y el hematocrito?
3. ¿Cómo se hallan las constantes corpusculares. Explique las fórmulas correspondientes?
2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3a ed. Buenos Aires:
El ateneo; 1985.
4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana; 1999.

IV. PRACTICA No. 4: LEUCOMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS
4.1 Marco teórico
La leucometría es una de las técnicas para realizar el recuento de los leucocitos, que
corresponde al número de elementos celulares por unidad de volumen presente en una
muestra de sangre después de provocar la lisis de los hematíes. Diversas son las causas o
patologías que pueden aumentar (Leucocitosis) o disminuir (Leucopenia) los glóbulos blancos
e influenciar en el diagnostico clínico.
4.2 Competencias
1. Conoce el procedimiento para el recuento de glóbulos blancos.
2. Diferencia los recuentos de glóbulos blancos y rojos.
3. Aplica formulas para el recuento de glóbulos blancos.
4.3 Material y equipos
 Materiales
Pipeta de Thoma para el recuento de Leucocitos
 Reactivos
Líquido de Turck:
Violeta de genciana ...1 mL.
Ácido Acético glacial .. 3 mL.
Agua destilada csp. ...100 mL.
4.4 Procedimiento
1. Aspirar sangre hasta 0.5 ó 1 (1:20 ó 1:10) según la dilución en la pipeta de Thoma.
Limpiar la punta para eliminar el exceso de sangre.
2. Completar con diluyente hasta 11, haciendo 9 girar la pipeta.
3. Dejar en reposo de 5 a 15 minutos para la completa destrucción de los hematíes y
perfecta tinción de los núcleos leucocitarios.
4. Cargar la cámara cuenta glóbulos, esperar 5 minutos para que se depositen los
leucocitos sobre el retículo.
5. Llevar a la platina del microscopio, comprobar con débil aumento la uniforme
distribución celular y verificar el recuento.
Con el objetivo de menor aumento contar los leucocitos contenidos en los 4 campos
cuadrados situados en las esquinas de retículo.
Se consideran los elementos que se encuentran en los interiores de la derecha y de
arriba, pero se omiten las que se hallan sobre la línea de izquierda.
Se volverá a repetir el procedimiento si la diferencia entre 2 cuadrados sea mayor de 8
células.

Cálculos:
La cantidad encontrada en los 4 cuadrados se divide entre 2 y al resultado se añade 2
ceros (o se multiplica por 50)
También:
N x 10 x 20 = Leucocitos por mm3 de sangre
N = Total de leucocitos en 4 cuadrados dividido entre 4
10 = par referir al mm3
20 =.dilución cuando se aspira sangre hasta 0.5
Valores normales:
6,000 a 9.000 por mm3
de sangre.
Interpretación:
La disminución de leucocitos se denomina LEUCOPENIA y se presenta en algunas
enfermedades infecciosas como ocurre en la angina agranulocítica o granulocitopenia
idiopática, anemia perniciosa, clorosis, mala nutrición, fiebre tifoidea, malta, virales:
rubéola, sarampión, hepatitis, parotiditis, etc.
El aumento de denomina LEUCOCITOSIS:
Existe una leucocitosis fisiológica con neutrofilia entre 12,000 y 14,000 en el recién
nacido, durante el embarazo en el 9º mes, durante el parto, durante la digestión.
De orden patológico: la leucocitosis se debe a la quimiotaxis y al estimulo de los
órganos hematopoyéticos (la quimiotaxis es la propiedad que tiene ciertos agentes de
atraer o repeler células vivas) Una inflamación tiene poder quimiotáctico de atraer
muchos leucocitos, lo mismo ocurre con las bacterias y alguno tóxico se que atraen
leucocitos a la circulación general.
4.5 Resultados
4.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento del reactivo de Turck en el recuento de leucocitos?
2. Indique que otros líquidos de dilución se emplean para el recuento de leucocitos y su
composición química.
3. ¿Qué importancia clínica tendría el recuento de leucocitos?
4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana; 1999.

V. PRÁCTICA No. 5: FÓRMULA LEUCOCITARIA. HEMOGRAMA DE SCHILLING
5.1 Marco teórico
Es el método analítico más frecuentemente solicitado en la práctica médica diaria, no solo
para el diagnóstico, valoración y seguimiento de las diversas patologías hematológicas, sino
también de las que no lo son, pero que curan con alguna alteración valorable del mismo. Su
facilidad de realización y rápida modificación en muy diversas circunstancias fisiológicas y
patológicas hacen también de él un método analítico de práctica casi obligada. El
hemograma incluye la cuantificación de los elementos formes que contiene la sangre por
unidad de volumen, recuento porcentual de los leucocitos(habitualmente compuestos sólo
por linfocitos, monocitos, y granulocitos, neutrófilos, eosinófilos y basófilos), además informa
sobre valores o índices relacionados con el contenido hemoglobínico de los glóbulos rojos y
el tamaño de éstos y el de las plaquetas. La formula leucocitaria indica la presencia relativa
de los diferentes tipos de leucocitos en la sangre periférica y se expresa en porcentajes
sobre el total.
5.2 Competencia
1. Utiliza el colorante adecuado para la identificación de los elementos formes en sangre
coloreada.
2. Identifica los diversos tipos de leucocitos de acuerdo a su forma, tamaño y color.
3. Aplica el método más conveniente para el recuento de los diversos tipos de leucocitos.
 Materiales
Laminas portaobjetos
 Reactivos
Colorantes:
En general los colorantes hematológicos que más se utilizan son los derivados de
Rowanowsky, entre los que tenemos el de Giemsa, Leishman, Wright y Hastings.
Colorante de Wright:
Es una combinación especial a base de azul de metileno y eosina que, para los trabajos
de rutina da excelentes resultados.
Pesar 0,4g. de colorante Wright en polvo, agregar 194 mL de alcohol metílico libre de
acetona, añadir 6 ml. de glicerina. Agitar enérgicamente. Conservar en frasco oscuro
agitando un minuto diario durante una semana. Finalmente filtrar cada vez que ha de
usarse, después de cumplida la semana. Dura seis meses.
5.4 Procedimiento
ESTUDIO CITOMORFOLOGICO DE EXTENDIDOS COLOREADOS:
Métodos para el examen del extendido sanguíneo en el recuento diferencial:
a. Observación reglada en 4 campos

b. Observación reglada en dos campos
En indispensable para obtener el porcentaje de cada tipo de leucocito que estos se
hallen uniformemente distribuidos en el extendido sanguíneo. Como los granulocitos
generalmente están en los márgenes del extendido y los linfocitos en el centro, se
recomienda el método aconsejado por Schilling, que consiste en tomar 4 puntos
marginales distintos recorriendo el campo en zigzag desde el borde hacia la parte
central y contar 25 o 50 elementos en cada uno de los 4 puntos.
Debe anotarse el tamaño celular; en el núcleo: forma, posición, color, estructura de la
cromatina, membrana nuclear, presencia o ausencia de nucleolos; en el citoplasma:
cantidad relativa(cociente núcleo citoplasma), color, presencia o ausencia de zona
perinuclear clara y características de los gránulos: número, color, tamaño y
distribución, granulación tóxica, vacuolas o degeneración del citoplasma.
FORMULA LEUCOCITARIA
La formula leucocitaria permite conocer la cantidad de cada tipo de célula, y para ello
se procede a contar un número determinado de leucocitos (100-200 ó más), en un frotis
bien coloreado, anotando por separado cada variedad celular. Procediendo en estar
forma, la llamada FORMULA RELATIVA, o sea el porcentaje de cada tipo de leucocitos.
La condición indispensable para justipreciar el porcentaje de cada tipo de leucocitos
más bien en la mitad de la extensión la técnica más recomendable para obviar el
inconveniente anotado, es de recorrer el preparado en la forma que aconseja
SCHILLING, siguiendo el método serpenteando los cuatro campos.
La
HEMOGRAMA DE SCHILLING
Schilling clasifica a los neutrófilos en dos grupo fundamentales: neutrófilos no lobulados
e incompletamente lobulados neutrófilos completamente lobuladados (2 ó más lóbulos)
En el primer grupo incluye: los mielocitos, las formas juveniles o metamielocitos y las
formas en banda o cayado.
El hemograma normal según Schilling es el siguiente:
Tipo de leucocitos Porcentajes
Neutrófilos Mielocito 0
Metamielocito 0-1
Núcleo en cayado 3-5
Núcleo segmentado 55-65
Eosinófilos 2-4
Basófilos 0-1
Linfocitos 20-30
Monocitos 4-8
INTERPRETACION:
Se habla de desviación hacia la izquierda del hemograma cuando aumentan las formas
no segmentadas o inmaduras de los neutrófilos; y se dice que hay desviación hacia la
derecha, cuando aumentan las células maduras o adultas.
Así mismo se determinaran los posibles aumentos de los demás leucocitos
denominándose eosinofilia, basofilia, linfocitosis, monocitosis.

5.5 Resultados
5.6 Cuestionario:
1. Esquematice a través de dibujos los diferentes tipos de leucocitos.
2. ¿En que patologías se presentan linfocitosis, monocitosis, neutrofilia, eosinofilia y
basofilia?
3. ¿Cual es la diferencia entre el Hemograma de Schilling y el Esquema de Arneth?
5.7 Fuente de información:
1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica
panamericana; 1999.
2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a
ed. Barcelona: Masson; 2005.
3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos.
Madrid: Masson; 2005.
4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.:
Manual moderno, 2006.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en
hematología. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

VI.PRÁCTICA No. 6: RECUENTO DE PLAQUETAS, RECUENTO DE
RETICULOCITOS Y RECUENTO DE EOSINÓFILOS
A. RECUENTO DE PLAQUETAS
6.1 Marco teórico
El recuento de plaquetas es el número de esos elementos (Trombocitos) por milímetro
cúbico de sangre. La actividad plaquetaria esencial es la de conformar el tapón hemostático
primario en los mecanismos de la coagulación (Hemostasia). La visualización de una
extensión de sangre permite descubrir ciertas alteraciones de la serie plaquetaria y su
cuantificación para determinar si existe una disminución (Trombocitopenia) ó un aumento
(Trombocitosis).
6.2 Competencias
1.- Distingue los métodos directos e indirectos para el recuento de plaquetas
2.- Aplica el método más conveniente para el recuento de plaquetas
 Materiales
Pipeta de Thoma para glóbulos rojos
Camara de Neubauer
 Reactivos
1. Reactivo de Sulfato de Magnesio al 14%
2. Colorante de Wright
3. Reactivo de Rees-Ecker:
Citrato de sodio 3.8 gr.
Formaldehído al 40% 0.2 mL.
4. Azul brillante de cresil 0.05 gr.
Los métodos para el recuento se pueden clasificar en:
METODOS INDIRECTOS:
Se basa en determinar la relación entre plaquetas y eritrocitos
M. de Fonio
M de Clef
M. de Demeshek
METODOS DIRECTOS:
Se basa en contar directamente las plaquetas de la sangre diluida en una cámara
hemocitométrica.

M. Rees - Ecker
M. Wright
6.4 Procedimiento
METODO DE FONIO:
1. Sobre la yema del dedo limpio, seco y desinfectado colóquese una gota grande de
solución esterilizado de sulfato de magnesio al 14% para que la sangre no tome contacto
con el aire. A través de la gota puncionar la piel con una lanceta de tal manera que
salga espontáneamente una pequeña gota de sangre a razón de 1:5 aproximadamente.
2. Mezclar con el borde de un portaobjeto para homogeneizar e impedir la aglutinación
de las plaquetas.
3. Con la misma lanceta llevar una gota de la suspensión sobre un portaobjetos y
verificar el frotis como si tratara de sangre sola.
Al sacar la preparación toma un brillo aterciopelado y casi incoloro al trasluz, teñir con
Whright en la forma habitual dejando actuar el colorante un tiempo mayor de dedicado
a la formula leucocitaria.
4. Con objetivo de inmersión y aceite de cedro contar en varios campos
simultáneamente los glóbulos rojos y las plaquetas hasta completar 1000 a 2000
hematíes.
CALCULOS
Para los cálculos se multiplica el número de plaquetas, contadas en el frotis, por el
número de hematíes por mmc. y dividir entre el número de eritrocitos contadas en la
extensión.
Hematimetria: 4'8000,0000 por mm.c.
50 x 4'800,000
----------------- = 240,000 plaquetas por mm3
.
1000
METODO DE REES-ECKER:
Se debe operar con suma rapidez y limpieza para evitar la aglutinación y para no
confundir impurezas con los trombocitos.
1. Aspirar líquido de dilución hasta la marca de 0.5 con la pipeta para glóbulos rojos
2. Llenar con sangre capilar hasta completar con líquido de dilución hasta la marca de
101.
3. Dejar en reposo por espacio de 5 minutos.
4. Cargar la cámara cuenta glóbulos y dejar en reposo de 15 a 20 minutos para que
sedimente las plaquetas.
5. Con el objetivo potente contar en todo el cuadrado central de retículo para
hematíes (25 cuadrados de 16 cuadraditos cada uno)
CALCULOS: N X 10 x 200 = plaquetas por mm3
.
N : numero de plaquetas en el mm central de retículo
10 : para referir al 1 mm3
200 : dilución cuando se toma sangre hasta 0.5
Las plaquetas se presentan redondeadas, ovales, alargadas, en forma de cono o
poliédricas e irregulares.
Se las ve muy refringentes, plateada, veces de color lila.
CIFRAS NORMALES: 50,000 a 400,000 plaquetas por mm3
de sangre

INTERPRETACION:
Las variaciones fisiológicas se presentación la ingestión de alimentos, actividad
muscular, menstruación, etc.
TROMBOPENIAS:
Por debajo de 30,000 dan manifestaciones hemorrágicas. Estados alérgicos, anemia
aplástica, leucemia linfática, intoxicaciones crónicas, atrofia de la medula ósea,
púrpura trombopénica esencial.
TROMBOSIS O TROMBOCITOSIS: (escasa significación clínica)
hemorragias copiosas, anemia poshemorrágica, después de las intervenciones
quirúrgicas, anemia hemolítica, policitemia genuina, leucemia mieloide crónica,
traumatismo, esplenomegalia, infecciones crónicas, fiebre reumática.
6.5 Resultados
6.6 Cuestionario:
1. Mencione los principales métodos directos e indirectos para el recuento de plaquetas.
2. Explique el fundamento del método de fonio y mencione los valores normales.
3. Explique el fundamento del método de Rees-Ecker
6.7 Fuentes de información:
1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica panamericana; 1999.
2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a ed. Barcelona:
Masson; 2005.
3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Madrid: Masson;
2005.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual moderno,
2006.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 3a ed. Madrid:
Elsevier-Masson; 2006.

B. RECUENTOS DE RETICULOCITOS
6.1 Marco teórico
Son hematíes jóvenes inmaduros pero de tamaño superior (macrocitos), reconocibles en las
extensiones de sangre por tinción especial, se observa en las anemias hemorrágicas y
hemolíticas.
6.2 Competencias
1. Utiliza el método en forma conveniente para el recuento de reticulocitos
2. Realiza el recuento de reticulocitos y aplica los cálculos correspondientes.
 Materiales
 Reactivos
Según el método humedo en tubo:
Azul brillante de cresil 0.25 gr.
Citrato de Sodio 0.1 gr.
Formol al 40% 0.05 mL.
Soluc. Fisiológica cps. 25 mL.
Según El método de Wolfer:
Azul cresil brillante.... 0.5 gr.
Alcohol absoluto........... 100 mL
6.4 Procedimiento
METODO HUMEDO EN TUBO:
En un tubo de Kahan se mezclan 2 gotas de sangre venosa o capital y 2 gts del reactivo.
Se tapa el tubo y se mantiene a la temperatura ambiente por el término de 2 a 30
minutos.
Luego se extrae 1 gota de la mezcla y se hace un frotis delgado, se seca al aire y se
práctica el recuento.
Cálculos:
Se cuentan 1000 hematíes anotando todos los que tienen filamentos azules de
reticulos.
Dividir por 10 para obtener el porcentaje.
Ej. 20/10 = 2%
METODO DE WOLFER
Procedimiento:
1. Sobre portaobjetos hace extensiones de la solución de azul cresil brillante. Secar al
aire.
2. Depositar 1 gota de sangre capilar y hacer un frotis sobre el cresil, cuyo alcohol se
ha evaporado. Dejar en reposo 10 minutos.

3. La sustancia retículo gránulo filamentoso de los reticulocitos se tiñe de azul claro
con este colorante supravital y ofrece el aspecto de madeja.
4. Mientras mas tenues son las capas de la solución alcohólica y de las sangres mejor
será la lectura.
5. Después del desecado las muestras son ligeramente teñidas por Wright
6. Se observa con objetivos de inmersión.
Valores Normales
Adultos: 0.5 -2.5%
Niños: 5-10%
Interpretación:
Aumento: Recién nacidos hasta 2 a 5 días después del nacimiento. Anemias hemolíticas
constitucionales Anemias que evoluciona con regeneración por tratamiento
específico de vit. B 12 en la anemia perniciosa, Acido fólico en anemia
megaloblásticas del sprue Hierro, anemia microcítica e hipocrómica
ferroprivas. Anemia hemolítica hereditaria (10-20%). Cuando la sangre se
regenera rápidamente después de una hemorragia (aumenta hasta constituir
el 50% de hematíes)
Disminución Anemia aplástica (falta absoluta) anemias que evolucionan con
insuficiencia e hiperactividad funcional de la medula ósea (anemia
perniciosa muy avanzada)
6.5 Resultados
6.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia clínica del recuento de reticulocitos?
2. ¿Cuáles son los cálculos para el recuento de reticulocitos?
3. Mencione y explique los métodos para el recuento de reticulocitosis.
1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 7ª ed. Buenos Aires: Panamericana; 1997.
2. Gradwhol. Métodos y diagnóstico del laboratorio clínico. 8ª ed. Buenos Aires: Médica
Panamericana; 1986.
3. Guerci A. Laboratorio. Métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3ª ed. Buenos Aires:
Librería El Ateneo; 1985.
4. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México DF: Manual Moderno S.A.;
1986.

C. RECUENTO DE EOSINOFILOS
6.1 Marco teórico
Serie celular que pasa por las mismas etapas que la serie neutrófila polimorfonuclear. El
recuento es de importancia clínica para determinar las eosinofilias características en
enfermedades alérgicas y parasitarias.
6.2 Competencias
1. Desarrolla el método de Dunger para el recuento de eosinófilos.
2. Efectúa los cálculos correspondientes para el recuento de eosinófilos
 Materiales
Cámara de Neubauer
Pipeta de Thoma para glóbulos blancos
 Reactivos
REACTIVO DE DUNGER
Solución acuosa de Eosina al 2% ------------- 15 mL.
Acetona -------------------------- 10 mL.
Agua destilada csp. ----------------------- 100 mL.
Debe conservarse bien tapado y a baja temperatura.
La solución de Dunger lisa los hematíes y leucocitos pero los eosinófilos son más
resistentes.
La eosina tiñe de amarillo brillante los gránulos eosinófilos y la acetona disminuye la
tendencia de los eosinófilos a romperse.
El líquido puede conservarse durante dos semanas en la nevera.
6.4 Procedimiento
METODO DE DUNGER:
Seguir la misma técnica que para el recuento de Leucocitos con dilución 1/20 (marca
0.5) y los cálculos son iguales.
CIFRAS NORMALES:
Hasta 500 eosinófilos
EOSINOFILIA:
En infestaciones parasitarias y afecciones alérgicas, asma bronquial, urticarias se llegan
a contar hasta 3000 eosinófilos raramente puede encontrarse cifras mayores de 10,000
por mm3.
EOSINOPENIA:
Provocada por la hormona adrenocorticotrofica (ACTH), ciertosesteroides de la corteza
suprarrenal y la adrenalina.

La misión exacta de los eosinófilos en la reacción inmunológica alérgica no está
determinada. Se supone que los complejos Ag-Ac o la histamina que están implicados
en estas reacciones, atraen los eosinófilos por quimiotactismo.
6.5 Resultados:
6.6 Cuestionario
1. Explique el fundamento del recuento de eosinófilos?
2. ¿Cuál es la interpretación clínica de los eosinófilos?
3. ¿En que casos se solicita un recuento de eosinófilos por parte del profesional médico?
Masson; 2005.
2005.
2006.

VII.PRÁCTICA No. 7: TIEMPO DE COAGULACIÓN, TIEMPO DE SANGRIA, TIEMPO
DE PROTROMBINA, DOSAJE DE FIBRINÓGENO
7.1 Marco teórico
Debido a la enorme complejidad de todos los procesos que intervienen en el hecho
hemostático, resulta imposible determinar la verdadera capacidad hemostática in vivo de un
individuo mediante la realización de pruebas en el laboratorio, llevada acabo, además bajo
condiciones artificiales. Sin embargo, la realización y valoración de unas cuantas técnicas
puede ser suficientes muchas veces para presuponer, con un alto margen de seguridad, la
existencia, o no de un riesgo hemorrágico. Atendiendo a los puntos fundamentales de la
fisiología de la coagulación de la sangre, se deduce que la valoración rutinaria de la
hemostasia debe englobar por lo menos la prueba de Quick, el tiempo de coagulación
sanguínea, cuantificación del fibrinógeno y de las plaquetas.
7.2 Competencias
1. Aplica las técnicas apropiadas para determinar el tiempo de coagulación, tiempo de
sangría y de protrombina.
2. Hace la interpretación clínica y correlacionar las coagulopatias.
3. Utiliza el método espectrofotométrico para el dosaje de fibrinógeno.
 Materiales
Cronometro
Tubos capilares
Tira de papeles secantes
Tubos pequeños
Tubo cónico graduado
Equipos
Espectrofotometro
 Reactivos
Reactivo de Tromboplastina
7.4 Procedimiento
1. TIEMPO DE COAGULACIÓN:
A. METODO DE BURKER: 2' - 8'
1. En una lámina portaobjeto colocar 2 gotas de sangre
2. Dejar en reposo 3'. Con el estilete a la 1ra. gota levantar c/ 30". Hasta formar la
FIBRINA.
3. Luego de 30" pasar a las 2da gota. Levantar hasta formar la FIBRINA.
4. Anotar dicho tiempo.
NOTA: El índice de coagulación está dado por el tiempo trascurrido entre colocar
la gota y la formación de fibrina
B. METODO DE SABRAZE: 3' - 8'
1. 3 tubos capilares (8 en. de largo)

2. Obtener sangre capilar detectar la 2 primeras gotas en la 3ra cargar los capilares.
3. Se deja en reposo 3'. Luego romper su trozo c/ 30' hasta que al romper se forme
un filamento de FIBRINA. Toma el tiempo.
C. METODO DE LEE Y WHITE: 5' - 10'
1. Sangre venosa (3,5 ml) verter en 2 tubos 1 mL de sangre.
2. Anotar el tiempo cuando la sangre entra en la jeringa.
3. La indica uno de los tubos c/ minuto. ángulo de 45° hasta que la sangre coagulada
no se desplace. Anotar el tiempo.
4. Para el otro tubo hacer la misma operación. Anotar el tiempo, se recomienda
reportar la lectura del 2do tubo, porque la agitación y manipulación aceleran la
coagulación.
2. TIEMPO DE SANGRIA O DE HEMORRAGIA
METODO DE DUKE: 1' - 3'
1. Desinfectar el lóbulo de la oreja y pinche con una profundidad de 3 mm.
2. C/30" límpiese con papel de filtro la gota de sangre que fluye el papel no debe
rozar la piel.
3. Cuando ya no haya hemorragia toma el tiempo no debe haber menos de 2
manchas ni más de 6.
4. Se recomienda hacer 2 determinaciones.
NOTA: El lapso transcurrido entre la aparición de la 1ra. gota y la toma de la
última es el tiempo de sangría.
3. TIEMPO DE PROTOMBINA
METODO ORTHO-BRAIN
1. En un tubo de prueba de 13 x 100 mm colocar 0,5 ml de solución de oxalato de sodio
0.1 M y adicionar 4.5 mL de sangre venosa recién obtenida, mezclar y separar el
plasma mediante centrifugación.
2. En otro tubo de 13 x 100 mm depositar 0.2 ml de tromboplastina activada + cloruro
de calcio 0.02 M.
3. Incubar los tubos del plasma y del reactivo a 37o
C por 2'.
4. Con una pipeta terminal de un mL graduada en décimos, medir 0.1 mL de plasma
oxalatada y agregar rápidamente al tubo que contiene el reactivo de
tromboplastina, el agregado debe hacer desde una distancia de 2 cm. soplando el
contenido, simultáneamente poner en marcha el cronómetro, el contenido debe
mezclarse por movimientos laterales del tubo dentro del agua a 37o
C.
5. Observar la formación de una masa de coagulo que es el final de la reacción de
protombina.
Valores normales: 10 segundos a 12 segundos
4. VALOR PROTOMBINICO O INDICE PROTROMBINICO
Se obtiene dividiendo el Tiempo de Protrombina Normal entre el tiempo de Protombina
encontrado y multiplicado por 100.
V.P. = T.P.N. x 100
T.P.E.
4. TIEMPO DE RETRACCION DEL COAGULO

La retracción del coagulo es la contracción espontánea de la sangre total, obteniéndose
una masa sólida con todo los componentes sanguíneos y la exudación de suero; dicha
actividad es función retráctil de las plaquetas y del Fibrinógeno para formar fibrina.
METODO DE MAC FARLAND.
El método utiliza un tubo de centrífuga graduada en divisiones de 0.1 mL; un alambre
de 1 mm de espesor, 12 cm. de longitud con un ensanchamiento en forma de botón de
1.2 cm. de diámetro en un extremo; un corcho que se adapta a la boca del tubo, el
corcho debe tener un orificio para dar paso al alambre del extremo opuesto al botón.
1. En un tubo de centrífuga graduado depositar 5 mL de sangre venosa recién extraída.
2. Colocar la varilla de alambre de modo que quede el ensanchamiento dentro de la
sangre, adopte el corcho en la boca del tubo.
3. Llevar el tubo a un baño de agua a 37o
C y observar de tiempo la coagulación de la
sangre.
4. Permanezca el tubo dentro del agua a 37o
C por una hora después de la formación
del coagulo.
5. Con cuidado retirar el alambre con el coagulo hacia arriba, dejar escurrir el suero
dentro del tubo por 1 ó 2 minutos.
6. Leer el volumen del suero que ha quedado en el tubo sobre la escala graduada.
Cálculos:
El tiempo de retracción del coagulo se expresa en función del volumen del suero
obtenido, multiplicado por 100 y dividido entre el volumen de sangre total obtenido.
Ejemplo:
Se ha obtenido 5 ml de sangre venosa y después de coagular ha dejado 3 ml de suero, la
retracción porcentual será:
3 x 100 = 60%
5
Valores normales: De 44 - 67%
Interpretación Clínica:
Está aumentada en las anemias por disminución del volumen celular, en la
trombocitopenia, eritremia y en enfermos con defectos en la coagulación.
5. DOSAJE DE FIBRINOGENO
Constituye el 5% de las proteínas plasmáticas.
Es una proteína soluble en el plasma sanguíneo muy lábil debido a su punto isoelèctrico
(pH 6,6 - 7). Un litro de plasma contiene 4 g de fibrinógeno.
Precipita por el calor de 52 a 56 o
C y por solución de cloruro de sodio al 0,85% a
semisaturación.
El fibrinógeno se origina en el hígado y en todo el sistema reticuloendotelial
Se relaciona estrechamente con todo el proceso de la coagulación de la sangre.
METODO DE GORNALL - BARDAWILL Y DAVID
Fundamento:
Por este método se determina dosando proteínas totales séricas en el plasma y el suero,
la diferencia de ambas proteínas totales corresponde a la cantidad de fibrinógeno.
1. Reactivo de Gornall: (Biuret)
Sulfato de cobre con 5H2O . . . . . . . . . . . . . 1,5 g.
Tartrato de sodio y potasio . . . . . . . . . . . . 6.0 g.
Disolver en 500 mL de agua destilada, agregar 300 mL de hidróxido de sodio al 10%,
enfriar y completar a 1000 mL con agua destilada.

2. Solución del Cloruro de sodio al 0.85%
PROCEDIMIENTO:
En tres tubos de prueba limpios y secos membretar y colocar:
S P B
Suero Problema 0.1 mL - -
Plasma Problema - 0.1 mL -
Cloruro de Sodio al 0.85% 1.9 mL 1.9 mL 2 mL.
Reactivo de Gornall 8 mL 8 mL 8 mL.
Mezclar por inversión y dejar en reposo por 20 minutos a temperatura ambiente.
Leer a 540 nm. contra el blanco del reactivo.
Cálculos.
Por ejemplo si las lecturas para proteína totales en el plasma es de 130 y para el suero
de 125, ambos se multiplican por el factor de proteínas (0.060), luego los resultados
obtenidos se restan obteniéndose mg. % de fibrinógeno.
Proteínas totales en el plasma: 130 x 0.060 = 7.80 g -
Proteínas totales en el suero: 125 x 0.060 = 7.50 g
= 0.30 g
O sea: 300 mg. %
Valores normales: 200 - 400 mg. %
METODO DE STIRLAND:
FUNDAMENTO:
Se basa en la propiedad del fibrinógeno de coagular a 56 o
C mientras que las demas
proteínas plasmáticas solo coagulan por encima de los 60 o
C
El fibrinógeno se precipita con solución de Cloruro de Sodio al 0.85%
La intensidad del enturbamiento es proporcional a la concentración de fibrinógeno.
PROCEDIMIENTO:
1.En un vial con anticoagulante obtener 5mL de sangre venosa.
2.Transferir a un tubo y centrifugar por 5 minutos a 3000rpm
3.En 2 tubos P y B depositar 0.6ml de plasma y agregar 6ml de ClNa al 0.85%
4.Mezclar ambos tubos.
5.El tubo P se pone en Baño Marìa a 56 °C por 15 minutos
6.el tubo B se deja a temperatura ambiente y sirve para llevar a “O” de D.O.
7.Retirar el tubo del baño y enfriar a temperatura ambiente.
8.Lectura: Se lee el enturbamiento al espectrofotometro a 660 nm.
9.Dicha lectura se lleva a la curva de enturbamiento del Timol. Cada unidad de
enturbamiento equivale a 29.5mg% de Fibrinógeno.
INTERPRETACIÓN:
Cifras altas: Hiperhinosis: Neumonía, Embarazo normal, TBC pulmonar, hepatitis tóxica,
fiebre reumática, artritis reumatoidea, nefritis, tumores malignos, septicemia.
Disminución: Fibrinopenia: desnutrición, fiebre tifoidea, Anemia intensa, lesiones
difusas de las células hepáticas, intoxicaciones por fósforo y cloroformo.
7.5 Resultados
7.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de coagulación?
2. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de sangría?

3. ¿Cuál es el fundamento bioquímico del proceso de retracción del coagulo?
4. ¿Cuál es el fundamento del dosaje de fibrinógeno?
Masson; 2005.
2005.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Edit. Manual
moderno, 2006.

VIII. PRÁCTICA No. 8: DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: SISTEMA
ABO, VARIANTE DU y PRUEBA DE COOMBS.
A. DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: SISTEMA ABO Y FACTOR RH.
8.1 Marco teórico:
El polimorfismo mas significativos de los eritrocitos depende de las características
inmunológicas, basándose en la presencia o ausencia de las propiedades químicas en la
superficie de los hematíes que permiten diferenciarlos y clasificarlos en un gran número de
grupos sanguíneos bien definidos por sus reacciones con las hemaglutininas específicas.
8.2 Competencias:
1.-Distingue los diversos grupos sanguíneos del sistema ABO
2.- Diferencia el Rh positivo del negativo
3.-Aplica la Variante Du para la comprobación del Rh negativo.
 Materiales
Laminas de porcelana
Tubos de ensayo
 Reactivos
8.4 Procedimiento
Método Indirecto de Beth Vincent:
1. Colocar una gota de sangre en un portaobjeto.
2. Agregar 1 gt. del suero tipificado anti-A y 1 gt. del suero tipificado anti-B, mezclar y
observar.
Si no hay aglutinación el grupo será CERO.
Si hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-A será GRUPO A
Si hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-B: grupo B.
Si hay aglutinación en ambos el grupo será AB.
FACTOR Rh .-
En un porcentaje se coloca 1 gota de sangre mas 1 gto. del anti-Rho (D). Mezclar y observar.
Si hay aglutinación es Rh positivo.
8.5 Resultados

B. VARIANTE Du DETERMINACION DEL ANTIGUO Rho DEBIL O D
8.1 Marco teórico
El término Du se refiere a la expresión débil del antígeno D normal es decir, la menor
concentración del antígeno D por glóbulo rojo esta es una característica heredada. Como
entre los anti-D existen ligeras diferencias la potencia de la reacción de los eritrocitos Du
varia con el suero utilizado.
8.2 Competencias
1. Aplicar la variante Du para la comprobación del Rh negativo.
2. Realiza el proceso para la determinación de la variante Du
8. 3 Materiales y equipos
 Materiales
Tubos de ensayo
 Reactivos
Suero antihumano de Coombs
8.4 Procedimiento
1. Hacer una suspensión globular al 2% en SSF.
2. En un tubo pequeño depositar:
1 gota de suero anti-Rh + 2 gotas de la suspensión globular al 2%.
3. Incubar a 37 oC por 60 minutos para sensibilizar a las células.
4. Sacar el tubo de la incubadora y lavar las células 3 veces en tubo de ensayo llenos de
solución salina hasta cerca del borde del tubo.
Decantar completamente después del último lavado, acercando a la boca del tubo
un papel de filtro para absorber el líquido. (centrifugación a 2,000rpm por 5 minutos)
5. Agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs. Agitar bien el tubo para homogenizar.
6. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto.
7. Retirar el tubo y suspender nuevamente las células empaquetas mediante agitación
moderada y examinar si existe aglutinación o no.
Si hay aglutinación: Du es Rh positivo
Si no hay aglutinación: Du es Rh negativo
C. PRUEBA DE COOMBS
8.1 Marco teórico
Se basa en que los dos anticuerpos llamados incompletos pueden encontrarse revistiendo los
eritrocitos o bien estar en suspensión en el plasma,. Como corresponden a la fracción
gammaglobulínica de las proteínas séricas, un suero antigamaglobulina humana de conejo
(suero de Coombs) aglutinan directamente los eritrocitos cuando están revestidos, pero no
cuando los anticuerpos están en suspensión. De esta diferencia surgen dos tipos de pruebas
de Coombs: la directa y la indirecta.

8.2 Competencias
1. Diferencia las pruebas de Coombs directa e indirecta
2. Emplea las técnicas adecuadas para determinar los anticuerpos incompletos.
 Materiales
Tubos de ensayo
Equipos
Centrifuga
 Reactivos
1. Suspensión globular al 2%
2. Solución salina fisiológica
3. Suero antihumano de Coombs
8.4 Procedimiento
A. PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA:
Se emplea para detectar isoanticuerpo circulantes en el suero que cubren pero no aglutinan a
los glóbulos suspendidos en solución Salina fisiológica.
La aglutinación solo se produce al tratar los glóbulos recubiertos con suero de Coombs.
1. Prepara suspensión globular al 2% en solución salina fisiológica de la sangre del grupo O
Rh positivo.
2. En un tubo de ensayo: 2 gotas de la solución preparada + 2 gotas del suero de la madre
3. Incubar en B.M. a 37 o
C por 60 minutos.
4. Llenar con solución salina fisiológica. Mezclar. Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos.
5. Decantar el sobrenadante. Repetir por 3 veces dicho lavado. Absorber con papel filtro.
6. Al sedimento que queda agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs.
7. Mezclar.
8. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto.
9. Retirar el tubo y agitar moderadamente a las células.
Examinar el Tubo: Si hay aglutinación POSITIVO (contiene anticuerpos anti-Rh incompleto
o bien anticuerpos cuya especificidad y nombre está determinado por la calidad de
glóbulos empleados).
No hay aglutinación NEGATIVO.
B. PRUEBA DE COOMBS PRUEBA DIRECTA:
Es empleada para detectar anticuerpos que se han fijado en los glóbulos del paciente in vivo,
por ejemplo en la eritroblastosis hemolítica del recién nacido, en ciertas anemias hemolíticas
auto-inmunes y pacientes que hay recibido transfusiones incompatibles.
En los niños no tratados de eritoblastosis fetal, la reacción positiva persiste durante varias
semanas, mientras que en las exanguineo - transfusión va seguida de una negativización a los
pocos días.
1. En un tubo de ensayo se colocan 5 gotas de la sangre en estudio y se llena con solución
fisiológica.

2. Mezclar invirtiendo el tubo varias veces, y centrifugar a 1500 rpm durante 5 minutos.
Decantar el líquido sobrenadante.
3. Repetir el lavado dos veces, retirando cada vez todo el líquido remanente.
4. Luego se prepara una suspensión de hematíes al 2% en SSF.
5. En un tubo se coloca: 1 gota de susp. Globular + 1 gota del suero antiglobulínico
6. Centrifugar 1 minuto a 1000 rpm y observar si hay aglutinación.
La aglutinación en el tubo contenido los hematíes problemas y su ausencia en el tubo testigo
evidencia su sensibilización.
Esta prueba es utilizada para el diagnóstico de la eritroblastosis fetal (ictericia hemolítica del
recién nacido).
Se estudia la sensibilización de los eritrocitos de la sangre umbilical.

Como profilaxis de la enfermedad, se buscan los Anticuerpos antes del parto en el suero de la
madre mediante la prueba indirecta.
También se emplea para el diagnóstico de algunos tipos de anemias hemolíticas.
8.5 Resultados
8.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia clínica de los sistemas ABO y Rh-Hr?
2. ¿Porque es importante la determinación de la Variante Du?
3. Explique el fundamento bioquímico de la prueba de Coombs Directa.
4. Explique el fundamento bioquímico de la prueba de Coombs Indirecta.
Masson; 2005.
2005.
2006.
IX. PRACTICA No 9: PRUEBAS SEROLÓGICAS: DETERMINACIÓN DE FIEBRE
TIFOIDEA, PARATIFOIDEA, MALTA, SIFILIS
A. AGLUTINACIONES
9.1 Marco teórico
Las pruebas inmunológicas son muy útiles para el diagnóstico de muchas patologías a través
de los métodos cualitativos y cuantitativos.
Los antígenos febriles se utilizan para efectuar diagnósticos rápidos de las fiebres tificas,
paratificas y brucellosis. Se utilizan en la prueba rápida de aglutinación en lámina mediante
la reacción antígeno-anticuerpo con el objeto de detectar la presencia en suero de
anticuerpos que los pacientes producen durante las enfermedades mencionadas.
9.2 Competencias
1. Realiza las determinaciones inmunológicas de las pruebas de aglutinaciones.

2. Explica los resultados obtenidos a través de las pruebas cualitativas y cuantitativas.
 Materiales
Lamina de vidrio
 Reactivos
a. Antígenos febriles
o Suspensiones de cepas bacterianas estabilizadas y standarizadas: tifico o,
tifico h, paratífico a, paratífico b y brucella abortus.
9.4 Procedimiento
Las determinaciones comprenden dos etapas:
1. Prueba presuntiva:
Con una pipeta serológica o una micropipeta depositar una gota de suero problema en
cada cuadrado.
A cada gota de suero se le añade una gota de cada antígeno previa agitación.
Mezclar con un palillo mondadientes para cada cuadrado y leer en el término de uno a
tres minutos.
Lectura: La reacción es positiva cuando aparece aglutinación en uno de los 5 cuadrados.
2. Prueba de titulación:
Se preparan 5 cuadrados limpios y con una pipeta depositar en cada uno el volumen de
suero:
0,08, 0,04, 0,02, 0,01 y 0,005 mL de suero respectivamente.
Los títulos serán: 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 y 1/320.
Agregar a cada suero una gota del antígeno. Mezclar.
Luego hacer la lectura.
Los resultados se expresan en términos de la más alta dilución que presenta
aglutinación.
9.5 Resultados
9.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de las aglutinaciones?
2. ¿Cuál es la interpretación clínica de los valores TO y TH elevados?
9.7 Fuente de información
Masson; 2005.
2005.
2006.
B. DIAGNÓSTICO DE SIFLIS
9.1 Marco teórico
La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual causado por una bacteria espiritada, el
treponema pallidum . Para el diagnóstico se emplean pruebas serológicas treponémicas y
no treponémicas, dentro de las no treponémicas: VDRL y RPR.

9.2 Competencias
1. Determina los anticuerpos del treponema pallidum a través de los métodos serológicos no
treponémicas.
2. Realizar una correcta interpretación de los resultados de las pruebas serológicas.
 Materiales
Equipos
Rotador eléctrico
Microscópio
Baño María
 Reactivos
1. Solución antigénica de VDRL
2. Solución salina al 0,9%
3. Sueros controles
9.4 Procedimiento
A. MÉTODO DE VDRL
 VDRL CUALITATIVO EN SUERO
1. Numerar los anillos de la lámina
2. Cargar 0.05ml de los surcos control reactivo y no reactivo al primer y segundo anillo
respectivamente
3. A partir del tercer anillo cargar las muestras problemas.
4. Añadir con la micro pipeta 0.017ml de solución antigénica preparada sobre el suero
contenido en cada uno de los anillos de la lámina.
5. Colocar la lámina serológica con las muestras en un rotador a 1800 rpm por 4 min.
6. Terminada la rotación examinar la lámina inmediatamente usando un microscopio con
objetivo de 10x.
LECTURA E INFORME
1. Reactivo (R)- grumoso grandes y medianos
2. Reactivo débil (RD) grumos pequeños
3. No reactivo (NR) sin grumos.
 VDRL CUANTITATIVA EN SUERO
Colocar 0.05ml de solución salina al 0.9% del anillo dos al anillo seis de la lámina
serológica
1. Añadir 0.05ml de suero problema en el anillo 1 y 2
2. Mezclar la solución salina y el suero del anillo dos y transferir de este anillo, 0.05ml
al anillo tres.
3. Mezclar el contenido del anillo tres y transferir 0.05ml al anillo cuatro.
4. Mezclar el contenido del anillo cuatro y transferir 0.05ml al anillo cinco y asi
sucesivamente hasta el anillo seis.
5. Añadir con una micropipeta 0.017 ml de la solución antigénica sobre el contenido
de cada anillo de la lámina serológica. Del anillo 1 al 6.
6. Colocar la lámina con las muestras sobre el rotador a 180 rpm por 4 min. o rotarlo
manualmente.
7. Examinar al microscopio con objetivo de 10x y ocular de 10 x
8. De obtener reactivo sobre el título 1/8 continuar con las diluciones.
LECTURA E INFORME
1. - Reactivo.- (R)
2. - Reactivo debil (RD)
3. - No reactivo (NR)

 B. MÉTODO DE RPR
Es una prueba serológica plasmática de floculación macroscópica
RPR CUALITATIVO EN PLASMA
1. Colocar 0.05ml de los sueros a evaluar o una gota utilizando el aplicador del kit no
olvidar colocar los sueros control.
2. Con ayuda del aplicador extender la muestra dentro del círculo sin salir del margen.
3. Agregar 0.017ml del antígeno con micropipeta o una gota con el gotero del kit sobre
la muestra a evaluar.
4. Colocar la tarjeta con las muestras sobre el rotador, por 8 min a 100 RPM, o hacerlo
manualmente.
5. Luego de los ocho minutos hacer la lectura con ayuda de la lámpara de luz.
6. - LECTURA E INFORME
7. Reactivo.-(R) Grumos grandes medianos, o pequeños pero definidos
8. No reactivo (NR) Sin grumos si se observa grumos definidos o pequeños debe
realizarse la prueba cuantitativa.de igual manera que para VDRL .
9.5 Resultados
9.6 Cuestionario
1. ¿En que se diferencian las pruebas de VDRL y RPR?
2.¿Cuáles son las pruebas confirmatorias de un VDRL positivo?
9. 7 Fuentes de información
Masson; 2005.
2005.
2006.
X. PRACTICA No 10: DETERMINACIÓN DE CRIOAGLUTININAS, PRUEBA A.R.,
PRUEBA DE PCR, ANTIESTREPTOLISINA (ASO)
A. DETERMINACIÓN DE CRIOAGLUTININAS
10.1 Marco teórico
Las crioaglutininas son anticuerpos que en el suero son capaces de causar la aglutinación de
sus propios eritrocitos (autoaglutininas), asi como las de otras personas (isoaglutininas), a
una temperatura comprendida entre o y 5 oc. Estos anticuerpos que también se les conoce
con el nombre de crioaglutininas se hallan presentes en títulos muy bajos en las personas
sanas.
La aglutinación es de carácter reversible, es decir que desaparece a 37 oc y reaparece a
baja temperatura. Este es un buen procedimiento para detectar una aglutinación auténtica
al frío.
10.2 Competencias
1.Determina el proceso para la determinación de crioaglutininas

2.Interpreta los resultados encontrados en la prueba de crioaglutininas
 Materiales
Tubos de ensayo
 Reactivos:
Oxalato de Potasio al 2%
Solución de citrato de sodio al 3,8%
Solución de cloruro de sodio al 0,85%
10.4 Procedimiento
MÉTODO DE AIQUEL
1. Extraer 10 mL de sangre: colocar 4,5mL en un tubo que contiene 0,5mL de
anticoagulante y el resto de sangre colocar en otro tubo sin anticoagulante.
2. A los dos tubos llevar a la temperatura de 37 o
C los dos hasta que la sangre del segundo
tubo coagule.
3. Centrifugar el tubo que contiene el coagulo, a fin de separar el suero.
4. Del tubo con anticoagulante tomar una cantidad determinada y lavar los eritrocitos por
3 veces con SSF.
5. Después de eliminar el líquido del último lavado preparar una suspensión al 2% en SSF.
TITULACION:
6. En 8 tubos de ensayo colocar en el primer tubo o,8mL de SSF y a los demás 0,5mL luego
se agrega 0,2 mL de suero se mezcla y se pasa 0,5mL al 2do tubo y así sucesivamente
hasta el séptimo tubo de donde se extraen 0,5ml que se desechan. El tubo octavo sirve
de testigo.
7. Se agregan a todos los tubos 0,5mL de la suspensión de hematíes. Las diluciones serán:
8. 1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320 y 1/640.
9. Colocar los tubos en la heladera a 4º hasta el día siguiente.
10. Hacer las lecturas.
MÉTODO DE TRÖNBERG:
1. Obtener 6 mL de sangre, mezclar con 1,5mL de citrato de sodio al 3,8%
2. Centrifugar a 2,000rpm durante 5 minutos.
3. Separar el plasma en un tubo de ensayo.
4. Con el paquete de glóbulos rojos preparar una suspensión de hematíes al 0,5% (0,05ml
de glóbulos rojos y completar a 10mL de SSF)
TITULACIÓN:
5. En 6 tubos de ensayo colocar en cada uno 0,3mL de SSF
6. Al primer tubo colocar 0,3mL del plasma, mezclar y pasar al segundo tubo y así
sucesivamente hasta el sexto tubo del cual se desecha 0,3mL
7. Las diluciones serán: ½, ¼ , 1/8, 1/16, 1/32 y 1/64.
8. Adicionar 0,3mL de la suspensión de hematíes al 0,5% a cada uno de los tubos.
9. Colocar en una gradilla y llevar a refrigeración (2-5 oC por 24 horas).
10. Examinar todos los tubos balanceándolos o girando ligeramente para apreciar la
intensidad de aglutinación en caso de ser positiva se considera al de mayor dilución y
son negativas cuando no existe aglutinación.
SIGNIFICANCIA CLÍNICA
Se asocia con el síndrome clínico de la neumonía atípica primaria causado por el
Micoplasma pneumoniae, así mismo en la anemia hemolítica adquirida y congénita, en el
falciformismo, en la tripanosomiasis, algunas hepatitis se pueden encontrar títulos
elevados.
B. ANTIESTREPTOLISINAS O
10.1 Marco teórico

La antiestreptolisina “o” prueba que a menudo se designa el nombre de asto , es útil para
el diagnóstico y tratamiento de la fiebre reumática , la glomérulo nefritis aguda y otras
infecciones por estreptococo beta hemolítico.
entre los anticuerpos antiestreptococicos destaca por su interés clínico la
antiestreptolisina o, cuyo título se expresa en unidades de todd, siendo la cifra normal 102
u Todd/mL. Con un límite máximo de 250u .
Un título alto de antiestreptolisina o significa infección estreptocócica sobrepasada o actual
y concretamente debido a estreptococos beta – hemolíticos del grupo serológico a
(excepcionalmente de los grupos c y d de la clasificación de lancefield) amigdalitis,
escarlatina, sepsis puerperal, erisipela etc. Pero tienen especial interés en los procesos
estreptocócicos que aparecen como segunda enfermedad: fiebre reumática y glomérulo
nefritis aguda. No es por, lo tanto una prueba específica de fiebre reumática, pero apoya su
diagnóstico cuando la historia y los signos clínicos la sugieren; sin embargo un título
superior a 500 u solo se registran en fiebre reumática, lo cual concede su diagnóstico a
esta prueba.
10.2 Competencias
1. Explica el fundamento de la determinación de antiestreptolisina.
2. Realiza el proceso para determinar antiestreptolisina.
3. Interpreta los resultados cuantitativos para un asto positivo.
 Materiales
Tubos de ensayo
Pipetas automáticas
 Reactivos
1. Suspensión de eritrocitos humanos lavados dos veces con solución fisiológica y una
con solución buffer de ASTO, se suspende al 5% en este buffer..
2. Buffer de ASTO, cloruro de sodio 7.40 g, fosfato monopotásico 3.17g , fosfato disódico
anhidro 1.81g, se disuelve c.s.p 1000cc con agua destilada conservar en heladera..
3. Antígeno de estreptolisina “O”
4. Suero del paciente no hemolisada ni contaminada debe ser inactivada a 56 oCx 30min ó
60 oC x 10min.
10.4 Procedimiento
1. Se hace una dilución del suero 1/20
2. En ocho tubos numerados del 1 al 8 colocar 0.20mL de buffer de ASTO.
3.En el primer tubo colocar 0.20mL del suero diluido 1/20 se mezcla bien y de el se
toma 0.20mL y pasar al siguiente tubo y así sucesivamente hasta el séptimo tubo
eliminando finalmente 0.20mL del tubo siete el octavo sirve de control.
4.De esa manera obtenemos las siguientes diluciones 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640,
1/1280, 1/2560.A los ocho tubos se coloca 0.10 mL de antígeno y se incuban en
baño maría a 37 o
C durante 15 minutos, luego añadir 0.10 ml de las suspensión de
eritrocitos al 5% en buffer de ASTO. Se agita para homogenizar y se incuba
nuevamente a baño de agua a 37 o
C por 45min.
VALORES NORMALES. Por este método los valores normales van de 1/40
a 1/60 unidades Todd.
INTERPRETACIÓN. La presente determinación es útil para el diagnóstico y
tratamiento de la fiebre reumática y sirve para la comprobación serológica de las
antitoxinas de defensa contra las toxinas bacterianas, es decir para la
comprobación de una infección existente o pasada por estreptococos beta
hemolítico de los grupos serológicos humanos A, C y G.
10.5 Resultados

10.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de ASTO?
2. Mencionar los estados fisiológicos y medicamentos que interfieran con la prueba de
antiestreptolisina.
3. ¿En que se diferencian las pruebas de PCR y LATEX?
1. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed.
Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001.
2. Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 8a ed.
Barcelona: Elsevier España SL; 2008.
3. Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros
s.l.; 2007.
4. Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1992.
5. Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.: McGraw –
Hill Interamericana; 2002.
XI. PRACTICA Nº 11: EXAMEN DE ORINA COMPLETA: EXÁMEN FÍSICO, QUÍMICO
y MICROSCÓPICO
11.1 Marco teórico
La utilidad del análisis de orina tiene una doble vertiente: por un lado, permite la valoración
directa del propio aparato urinario, por otra, más indirecta, resulta ser un reflejo de
determinadas situaciones bioquímicas de la sangre. A estas ventajas hay que añadir, además
la facilidad de su recogida, que habitualmente no representa ninguna molestia valorable
para el paciente .el examen de orina completa significa que se realizara varias pruebas
física (densidad, pH, color. Etc.), bioquímicas (glucosa, proteínas, nitritos, pigmentos
biliares, etc.) Y microscópicas del sedimento urinario (leucocitos, hematíes, cilindros,
bacterias ,cristales, etc.)
11.2 Competencias
1. Aplica el proceso físico-químico para el examen de orina
2. Identifica los diversos elementos en el examen microscópicos de la orina
3. Explica la interpretación clínica de los resultados del examen de orina
 Materiales
Tubos de ensayo
Equipos
Microscopio
Centrifuga
Urodensimetro
 Reactivos
Tiras reactivas para determinaciones bioquímicas en orina
11.4 Procedimiento
Según la finalidad del análisis y no mediando indicaciones especiales del médico se instruirá
al paciente acerca de como procederá para la recolección de muestra de orina, teniendo en
cuenta:

Par los exámenes de rutina, es suficiente una muestra de reciente micción salvo en los casos
en que se necesario practicar determinaciones casos es preciso realizar los exámenes en un
muestra correspondiente a la mezcla de la orina total de 24 horas, es decir que compensa el
metabolismo de un almuerzo o de una cena. Para reunir esta muestra, el paciente iniciará la
recolección a las 8 a.m. vaciando la vejiga y desechando esa primera micción. Luego las
distintas micciones se recogerán en un recipiente de boca ancha y perfectamente limpio
incluyendo la micción de las 8 de la mañana del día siguiente.
El recipiente conteniendo la muestra deberá conservarse en un ambiente fresco como para
impedir la descomposición prematura de la orina.
Para el examen microscópico del sedimento, se utiliza preferentemente una muestra de
reciente micción y en especial la obtenida por la mañana al levantarse el paciente.
Se prefiere las primeras muestras de la mañana, que suelen ser las más concentradas.
En todo examen de orina se tomará en cuenta:
1. EXAMEN FISICO:
Cantidad
Color
Olor
Espuma
Reacción
Densidad
2. EXAMEN QUIMICO:
Determinación de:
acidez total proteínas
cloruros glucosa
fosfatos cuerpos cetónicos
urea pigmentos biliares
urobilinógeno hemoglobina
Hoy en día existe en el mercado la utilización de papeles o tiras reactivas para el análisis
de orina que facilita la determinación cualitativa y cuantitativa de los componentes
químicos de la orina.
3. EXAMEN MICROSCOPICO DE SEDIMENTO:
El sedimento se obtiene centrifugando 10 ml. de orina a 1500rpm durante 5 minutos,
transcurrido dicho tiempo se vuelca el líquido sobrenadante y se suspende el sedimento
en el liquido remanente o sea que queda adherido a las paredes del tubo de centrífuga.
Se coloca entre porta y cubreobjetos se observa al microscopio con objetivo de menor
aumento y luego con el de mayor aumento.
Los constituyentes del sedimento urinario pueden agruparse dentro de 3 grupos: no
organizados, organizados y cuerpos extraños.
Sedimento no organizado:
En la orina normalmente no hay cristales y su presencia en orina no tiene significado
clínico salvo si se trata de cristales de oxalato, uratos o de cistina.
Sedimento organizado:
Células epiteliales
Escamosas o pavimentosas
Células redondas o poliédricas
Células de transición
Cilindros
Cilindroides
Leucocitos y Piocitos
Eritrocitos
11.5 Resultados
11.6 Cuestionario

1. ¿Cuales son las condiciones para una buena toma de muestra de orina?
2. ¿En que casos se presentan proteínas positivas en un examen de orina?
3. ¿En que procesos patológicos se presenta Thevenon positivo?
4. ¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que se utilizan para el examen de orina?
5. ¿Cual es la importancia clínica de encontrar piocitos en una muestra de orina?.
1.Aiquel f. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos aires: médica panamericana; 1999.
2.Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a ed. Barcelona:
Masson; 2005.
3.Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Madrid: Masson;
2005.
4.Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.
5.Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual moderno,
2006.
6.Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 3a ed. Madrid:

XII. PRÁCTICA No. 12 : UROCULTIVO: COLORACIÓN GRAM, PRUEBAS
BIOQUÍMICAS, ANTIBIOGRAMA.
12. 1 Marco teórico
El urocultivo es uno de los métodos de análisis microbiológico de suma importancia para
el diagnóstico de las enfermedades infecciosas del tracto urinario y asi dar un tratamiento
adecuado y oportuno
12.2 Competencias
1. Aplica técnicas de laboratorio para la determinación del urocultivo y coprocultivo.
2. Utiliza los medios de cultivo adecuado para el desarrollo de los microorganismos
3. Interpreta los hallazgos de laboratorio
12.3 Material y equipos
 Materiales
Tubos de ensayo
Asa de Kole
Placas Petri
 Reactivos
1. Colorante Gram
Cristal violeta alcalino:
Sol. A: cristal violeta 1g. Agua destilada csp. 100 mL.
Sol. B: bicarbonato de sodio 5g. Agua destilada csp 100mL.
Sol. De yodo 1g. Ioduro de potasio 2g. Agua destilada csp 200mL.
Sol. Decolorante: eter 1 vol. Acetona 3 vol.
Colorante de contraste: safranina 0.5g agua destilada csp 100 mL.
2. Medios de cultivo:
Agar Mac Conkey ó EMB
Agar Azida Sangre
Agar Chapman
3. Coloración de Ziehl-Nelsen (bacilos ácido-resistente)
4. Sol. A: fucsina básica 0.3g alcohol de 95º. 10ml.
5. Sol. B: fenol 5ml. Agua destilada csp. 95ml.
6. Mezclar las soluciones a y b
7. Sol. Alcohólica de ácido clorhídrico
8. Sol. De azul de metileno
12.4 Procedimiento
RECOLECCION DE MUESTRAS:
1. La muestra para cultivo debe ser material del verdadero sitio de infección y debe
recogerse con un mínimo de contaminación de tejidos, órganos o secreciones
adyacentes.
2. Establecer periodos óptimos para la recolección de muestras a fin de tener la
mejor oportunidad de aislar los microorganismos causantes.
3. Obtener suficiente cantidad de muestra para llevar a cabo las técnicas de cultivo
solicitada.
4. Utilizar dispositivos de recolección, recipientes para las muestras y medios de
cultivo adecuados para asegurar el óptimo aislamiento de microorganismos.
5. Siempre que sea posible obtener las muestras antes de la administración de
antibióticos.
6. El envase recolector de la muestra debe estar correctamente rotulado.
UROCULTIVO:

Primer Día: Recolección de la muestra.
- Examen de orina completo: físico, químico, microscopio, sedimento.
- Coloración gram del sedimento:
- Sembrar en: Agar Mac Konkey ó EMB
Agar Azida Sangre
Agar Chapman
- Si el sedimento se observará además de leucocitos, bacilos y en la coloración
estos últimos aparecen teñidos, entonces se práctica una coloración de Ziehl-
Neelsen (bacilos ácido-resistente)
Segundo día: Lectura del recuento microbiano. Si hay mas de 100 colonias:
No existe infección. Si hay entre 10 a 1000 colonias realizar nuevamente la técnica.
No. de colonias X 1000 = bacterias / mL de orina
1.Crecimiento en agar Mac Conkey:
Coloración gram negativo
Siembra en diferenciales: LIA,TSI,CS,SIM-INDOL, UREA.
Siembra en agar MH o TSA por diseminación general.
(usar discos antibióticos para gram negativos)
2. Crecimiento en Agar Azida Sangre
Coloracion gram positivo
Observar si hay hemolisis.
Observar si hay crecimiento en Agar Chapman (Positivo)
• Si hay crecimiento en Azida Sangre y Agar Chapman es: Stf sp (si las colonias son
amarillas son Stf aureus)
• Si hay crecimiento en Azida Sangre y no en Agar Chapman: existe hemólisis, puede
ser Stp. (puede demorar 36 a 48 horas).
Resembrar (cuarta parte) en agar Chapman colonias sospechosas del Azida Sangre.
Diferenciales para Stp:
Resembrar (en la cuarta parte) de colonias sospechosas: por diseminación y colocar
discos de Optoquima y Bacitracina. Observar a las 24 horas.
Sembrar por diseminación en Agar MH o TSA y usar discos de antibióticos para gram
positivos.
Tercer día:
1. Lectura de diferenciales: identificacion de Enterobacterias
2. Lectura: sensible a la optoquima: Stp pneumoniae
Sensible a la bacitracina:Stp tipo A.
3. Sea 1 o 2 leer antibiograma y definir
ANTIBIOTICOS: A: SENSIBLE
B: MEDIANAMENTE SENSIBLE
C: RESISTENTES
12.5 Resultados
12.6 Cuestionario
1. ¿Cuáles son los medios de cultivo utilizados en la identificación de microorganismos
gram negativos?
2. ¿Desarrolle un mapa conceptual de un urocultivo.
3. ¿Cómo es el proceso para la toma de muestra de un hemocultivo?
4. ¿qué importancia tiene el antibiograma?
5. ¿qué importancia tienen los medios de enriquecimiento en un coprocultivo?

1. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona: Salvat
Editores S.A.; 2001.
2. Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 8a ed. Barcelona:
Elsevier España SL; 2008.
3. Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros s.l.; 2007.
4. Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: Editorial JIMS; 1992.
5. Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.: McGraw –Hill
XIII. PRACTICA No. 13: ESTUDIO DE LAS HECES: EXÁMEN PARASITOLÓGICO.
METODO DE FAUST
13.1 Marco teórico
En la patología parasitaria tiene importancia la investigación de los parásitos intestinales
en las heces, utilizando técnicas del laboratorio más usadas como las del método directo,
método de concentración de faust,, jarabe fenolado, willis, método de sedimentación de
teleman, etc. De esta manera se contribuye al mejor conocimiento de la sintomatología,
diagnóstico, tratamiento y prevención de la parasitosis intestinal.
13.2 Competencias
1. Identifica los parásitos mas frecuente en muestro medio utilizando las técnicas de
examen directo y concentración
2. Relaciona el parásito hallado con el fármaco a utilizar para el tratamiento
CONSERVADORES
Cuando las muestras provienen de lugares lejanos o no van a ser examinados
inmediatamente, se aconseja conservarlos mediante diversas formas:
Conservación por el frío.
Son para huevos de helmintos y quiste de protozoarios, así podemos mencionar:
a. Solución fijadora y conservadora por el agua formolada.
La aplicación y conservación de esta solución, varía según las consistencia de las
heces, así por ej:
Las heces duras emplean agua formolada al 5%.
Las heces pastosas emplean agua formolada al 10%
Las heces conteniendo huevos de helmintos muy resistentes, emplean agua formolada
al 20%.
La cantidad que se utiliza para cualquiera de las 3 formas volúmenes de agua
formolada por 1 volumen de muestra de heces.
b. Líquido de Deschiens:
Glicerina 100 mL.
Formaldehído al 40% 100 mL
Agua destilada 800 mL
c. Solución de De la Plaza:
Formaldehído al 40% 12.5 mL
Glicerina 12.5 mL
Sol. de Ringer o sol. fisiológica 250 mL
Sol. de Ringer >ClNa 6 g
ClK 75 g

Cl2Ca 100 mg
HCO3Na 100 mg
Agua destilada csp 1000 mL
Existe otros conservadores tales como: Sol. MIF (Mertiolato-Yodo-Fromaldehido) de
Sapreso y Lawles.
Sol de PVa (Alcohol Polivinilico)
REACTIVO DE FAUST:
Sulfato de Zinc al 33% (D>1,180)
REACTIVO DEL JARABE FONOLADO:
Reactivo: Azúcar granulada 400 g
Agua destilada 300 mL
Fenol 1 g
Disolver el azúcar en agua caliente de 80 a 90 oC (No debe hervir) hasta consistencia de
jarabe y añadir 1g de fenol como conservador.
13.4 Procedimiento
El estudio debe identificarse en las heces:
Las formas vegetativas
Huevos
Larvas
Quiste de los parásitos.
RECOLECCION DE LAS MUESTRAS
El paciente colocará la primera deposición sin mezclar con la orina en un recipiente de
vidrio de boca ancha limpia y seca, rotulará su nombre y será remitido inmediatamente al
laboratorio cerrándole herméticamente, no debe utilizar recipientes porosos; ya será de
papel o de cartón.
Cuando se quiere investigar protozoarios en su forma vegetativa se requiere muestra fresca.
Las muestras formadas son mejores para encontrar quiste, en cambio las líquidas nos
permite identificar trofozoitos y deben se examinadas de inmediato o pueden ser
conservadas.
Ciertos parásitos para ser investigados requieren procedimientos especiales, por ej. Por el
método de Graham (cinta adhesiva) para Enterobius vermicularis.
En todo examen de heces para la búsqueda de parásitos deben considerarse el siguiente
orden:
1. EXAMEN MACROSCOPICO:
Este examen consiste en buscar por simple observación visual y minuciosa la consistencia de
las heces, mucus, sangre y formas adultas de parásitos tales como: Enterobius vemincularis,
Tenias, Ascaris Lumbricoides, Ancylostoma duocenales, Trichuris trichiura, etc.
Cuando las heces son blancas o líquidas, las larvas o formas adultas de los parásitos pueden
encontrarse ocultos en medio de la masa fecal, en esta caso se filtrarán la muestra a través
de un tamiz y se hará la observación.
2. EXAMEN MICROSCOPICO:
En este examen parasitológico obligatoriamente debe realizarse dos procedimientos:
1. Examen por el método directo de heces frescas, empleando sol. de lugol parasitológico y
sol fisiológica de cloruro de sodio.
2. Examen por el Método de Concentración, empleando un método de rutina.
METODO DIRECTO
Permite encontrar mayoría de los parásitos, quiste de protozoarios con núcleos teñido de
amarillo, las vacuolas de color pardo, larvas y huevos de helmintos.
En dos láminas portaobjetos limpios y secos, colocar en uno de ellos dos gotas de sol. de
lugol, en la otra lámina 2 gotas de sol. fisiológica y con la ayuda de un mondadientes
colocar una porción de muestra a ambas láminas preparadas, mezclar homogéneamente,
cubrir con un cubreobjeto y observar al microscopio con objetivo de menor y mayor
aumento.

METODO DE CONCENTRACION:
Tiene por objeto reunir en un pequeño volumen a los elementos parasitarios inicialmente
dispersos en una gran masa de heces.
Los métodos de concentración son muy numerosos, clasificándose en dos grupos:
I. METODOS FISICOS:
A. Por sedimentación y por flotación.
Método de Faust
Método del Jarabe Fenolado
Método de Willis
B. Método de sedimentación de Teleman
METODOS DIFASICOS:
Comprende dos etapas:
a. Fases de separación residuos mas voluminosos
b. Fase de concentración y enriquecimiento de los elementos parasitarios:
Método de Ritchie
Método de Carles-Barthelemy
METODOS DE SEDIMENTACION Y FLOTACION:
METODO DE FAUST:
1. En un recipiente adecuado, se prepara una suspensión de materia fecal mezclado una
parte de heces con 10 partes de agua tibia.
2. Filtrar la mezcla sobre una gasa en 4 dobleces colocado en un embudo y se recoge 10 ml
en un tubo de centrifuga.
3. Centrifugar a 2000 rpm durante 2 minutos, retirar de la centrifugadora y decantar el
liquido sobrenadante.
4. Al sedimento obtenido agregar 3 ml de agua tibia, mezclar bien.
5. Centrifugar y decantar el líquido sobrenadante repitiendo la operación por 3 veces hasta
que el agua del sobrenadante permanezca límpida.
6. Después de la centrifugación se decanta el líquido sobrenadante, y añadir 3 a 4 ml. de; la
sol de sulfato de zinc al 33% agitar bien durante un minuto y centrifugar al 2500 rpm
durante 1 o 2 minutos.
7. Con el asa de platino recoger la película superficial donde se encuentra flotando los
quistes de protozoario y huevos de helmintos colocar sobre un portaobjeto limpio y seco
agregar una pequeña gota de lugol parasitológico y efectuar el examen al microscopio.
METODO DEL JARABE FENOLADO (Flotación)
1. En un vial colocar el jarabe fenolado hasta la mitad y agregar con una bagueta unos 2 g de
heces.
2. Mezclar bien las heces con el jarabe fenolado hasta observar uniforme la suspensión.
3. Adicionar mas jarabe fenolado hasta el borde del vial
4. Al borde del vial aplicarle un portaobjeto y dejar en reposo por 20 minutos como tiempo
mínimo.
5. Retirar el portaobjeto y sobre la muestra aplicarle un cubreobjeto efectuar el examen
microscópico.
Por este método se observan larvas y huevos de los helmintos.
13.5 Resultados
13.6 Cuestionario
1. ¿En que consiste la tecnica de Graham ?
2. ¿Cuales son las condiciones para la toma de muestra de heces para un paciente que se
sospecha parasitosis?
3. ¿Desde el punto de vista patológico como se adquiere una tricuriasis?
4. ¿En que consiste el método del jarabe fenolado?

1.Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona: Salvat
Editores S.A.; 2001.
2.Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 8a ed. Barcelona:
3.Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros s.l.; 2007.
4.Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1992.
5.Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.: McGraw –Hill
XIV. PRACTICA No. 14: DOSAJE DE GLUCOSA, PRUEBA DE TOLERANCIA A LA
GLUCOSA, GLUCOSA POST PRANDIAL.
14.1 Marco teórico
La determinación de glucosa sérica es útil para el diagnostico de numerosas enfermedades
metabólicas (diabetes mellitus). Los niveles séricos, de glucosa deben interpretarse de
acuerdo con la hora, día en la que se tomo la muestra. La concentración de glucosa en los
líquidos extracelulares se mueve en una banda de tolerancia que es regulada a la baja de
insulina (acción hipoglucemiante y la alza mediante el glucagón, cortisol, catecolaminas y
hormona de crecimiento).las determinaciones de glucosa en pacientes recientemente
diagnosticados de diabetes se deben realizar con frecuencia para controlar de cerca la dosis
de insulina que debe administrarse.
14.2 Competencias
1. Utiliza métodos bioquímicos para la determinación de la glucosa en sangre
2. Interpreta los resultados y correlacionarlos con otras determinaciones solicitados en
análisis clínicos
 Materiales
1. Gradillas
2. Tubos de ensayo
3. Pipetas volumétricas
4. Pipetas automáticas
5. Baguetas
6. Centrifuga
7. Espectrofotómetro
 Reactivos
1. Reactivo enzimático
2. Standard de glucosa: una solución de glucosa 100mg/dl que contiene preservantes
y estabilizadores. Mantener en refrigeración.
14.4 Procedimiento
METODO ENZIMÁTICO COLORIMÉTRICO:
Preparar 3 tubos y agregar en ellos:
BLANCO STANDARD MUESTRA
(mL) (mL) (mL)
Standard - 0.01 -
Suero - - 0.01

Reactivo constituido 1.0 1 .0 .0
Mezclar suavemente.
Incubar por 5 minutos a 37oC
Leer absorbancia a 505nm contra el blanco. El color es estable por 1 hora.
Cálculos:
Glucosa (mg/dL) = 100
--------------------- x A muestra problema
A standard
A= valor de absorbancia obtenido.
VALORES:
Suero o plasma: 65 – 115 mg/dL
14.5 Resultados
14.6 Cuestionario
1. ¿En que consiste la prueba de la tolerancia a la glucosa?
2. ¿En que consiste la prueba de la hemoglobina glicosilada?
3. ¿Por qué es importante la utilización del método enzimático para determinar glucosa en
sangre ?
1.Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 8a ed. Barcelona:
2. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed.
Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001.
3. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación.
3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985.
4. Kumar V, Cotran R, Robbins S. Patología humana. 7a ed. Madrid:
Elsevier; 2004.
5. Widmann F. Interpretación clínica de las pruebas de laboratorio. 4a ed.
Barcelona: JIMS; 1997.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en
hematología. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

104140922 guia-de-practicas-de-analisis-clinicos-i

Recomendados

Recomendados

Más contenido relacionado

La actualidad más candente

La actualidad más candente (20)

Destacado

Destacado (20)

Similar a 104140922 guia-de-practicas-de-analisis-clinicos-i

Similar a 104140922 guia-de-practicas-de-analisis-clinicos-i (20)

Último

Último (7)

104140922 guia-de-practicas-de-analisis-clinicos-i