Las células eucriotas y sus características.

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE ENTRE RÍOS
Facultad de Ciencias de la Alimentación
Ingeniería en Alimentos
Trabajo Práctico Nº2
Citología I: Observación microscópica de células eucariotas
Objetivo: ofrecer adiestramiento en el manejo de microscopios ópticos mediante
la observación de células sanguíneas (eucariotas) en un preparado en fresco y
preparado fijado y teñido
a) observación de células sanguíneas (eucariotas) en un preparado en fresco
Fundamentos: Esta modalidad de preparados se observan con aumentos de 10x y 40
x y con mínima iluminación, debido a su tamaño y a su coloración propia, graduando
la llegada de luz mediante el diafragma del condensador. Si la llegada de luz es
demasiado intensa, encandila al observador y no se pueden ver detalles del
preparado.
La muestra se extraerá del frasco en el cual se encuentra con una pipeta
Pasteur (en ningún caso pipetear directamente), y se colocará sobre el portaobjetos
apenas tocando este con la punta de la pipeta. Si al colocar el cubreobjetos sobre la
muestra escapara muestra por los bordes será contenida con papel absorbente, el
cual será desechado inmediatamente
Al microscopio se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos,
hematíes o eritrocitos con una tonalidad rosada debido a la presencia de la
hemoglobina que es una proteína coloreada. No tienen núcleo y son más delgados por
el centro que por los bordes.
Cátedra de Biología 1

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Los glóbulos blancos o leucocitos que también están presentes, aunque en
mucha menor cantidad, no se identifican fácilmente por la ausencia de coloración
propia.
Las plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción.
Materiales:
• Microscopio
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Muestra de sangre humana anticoagulada
• Gotero
Procedimiento:
1. Con movimientos suaves homogeneizar muy bien la muestra de sangre.
2. Depositar una gota pequeña de sangre en la parte central de un portaobjetos.
3. Colocar un cubreobjetos sobre la gota de sangre de manera que se pueda
obtener una fina película de sangre, evitando que queden atrapadas burbujas
de aire entre el portaobjetos y el cubreobjetos.
4. Secar cuidadosamente con papel absorbente la muestra que pueda haber
escapado de los bordes del cubreobjetos.
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5. Observar al microscopio.
6. Describir en forma escrita y gráfica la observación realizada.
b) Observación microscópica de células eucariotas en una muestra de sangre
en un preparado fijado y teñido
Fundamentos:
Esta modalidad de preparados se pueden observar con objetivos de 10x y 40
x, pero para lograr una mejor observación se coloca una gota de aceite de cedro en
la zona del preparado que se quiere observar y allí se sumerge el objetivo de 100 x
Al microscopio se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos,
hematíes o eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina. No tienen núcleo y son
más delgados por el centro que por los bordes (disco bicóncavo). Diámetro 7 µm.
Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de
núcleo, teñido de morado. Hay varias clases de leucocitos:
1. Linfocitos: de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, tienen un solo
núcleo, esférico y que en ocasiones deja ver apenas un borde de citoplasma de
color azulado. Diámetro: 7 – 10 µm.
2. Monocitos: son los leucocitos de mayor tamaño, diámetro entre 15 – 20 µm.
poco frecuentes, núcleo grande, redondo o pleomórfico, con citoplasma
grisáceo.
3. Polimorfonucleares: núcleo fragmentado o lobulado. Pueden ser eosinófilos,
con abundantes granulaciones citoplasmáticas teñidas de rojo por la eosina,
neutrófilos con citoplasma ligeramente rosado, y basófilos con escasas
granulaciones oscuras cubriendo núcleo y citoplasma. El diámetro oscila entre
12 – 15 µm.
Las plaquetas son visibles, muy pequeñas, 2 – 3 µm, se observan teñidas de
color rosado, dispuestas en forma aislada o en grupos.
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Materiales:
• Microscopio
• Portaobjetos
• Mechero
• Cubeta de tinción
• Colorante May-Grunwald
• Colorante Giemsa
Procedimiento:
7. Con movimientos suaves homogeneizar muy bien la muestra de sangre.
8. Depositar con una pipeta Pasteur una gota de sangre cercana a uno de los
extremos del portaobjeto.
9. Apoyar otro portaobjeto formando un ángulo de 45° con el primero y
deslizarlo sobre toda la superficie del portaobjeto de manera que se pueda
obtener una fina película de sangre.
10. Dejar secar el frotis.
11. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir gotas de
colorante May-Grunwald hasta cubrir la superficie. Dejar actuar 3 minutos.
En esta etapa del método de tinción se produce la fijación por método
químico de la muestra a observar, debido al alcohol metílico que se encuentra
presente en la composición del colorante.
12. Agregar sobre el colorante algunas gotas de agua y mezclar soplando
suavemente sobre el preparado, y dejar actuar durante 3 minutos. Evitar la
desecación del colorante agregando más líquido. En esta etapa ocurre el
proceso de tinción de los núcleos.
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5. UNIVERSIDAD NACIONAL DE ENTRE RÍOS
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13. Volcar el colorante y agregar gotas de colorante Giemsa diluido hasta cubrir
el preparado. Dejar actuar 15 minutos.
14. Lavar la preparación bajo el chorro de la canilla.
15. Dejar secar aireando el portaobjetos o bien al calor ligero de la llama del
mechero.
16. Observar al microscopio.
17. Describir en forma escrita y gráfica la observación realizada.
Cuestionario:
1. ¿Por qué los glóbulos rojos humanos, siendo células eucariotas no
poseen núcleo?
2. ¿Qué ventajas y desventajas posee el preparado fijado y teñido frente
al preparado en fresco?
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13. Volcar el colorante y agregar gotas de colorante Giemsa diluido hasta cubrir
el preparado. Dejar actuar 15 minutos.
14. Lavar la preparación bajo el chorro de la canilla.
15. Dejar secar aireando el portaobjetos o bien al calor ligero de la llama del
mechero.
16. Observar al microscopio.
17. Describir en forma escrita y gráfica la observación realizada.
Cuestionario:
1. ¿Por qué los glóbulos rojos humanos, siendo células eucariotas no
poseen núcleo?
2. ¿Qué ventajas y desventajas posee el preparado fijado y teñido frente
al preparado en fresco?
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